用作促性腺激素释放激素拮抗剂的7－杂环基喹啉和噻吩并2,3－b吡啶衍生物

摘要

本发明涉及式(I)或(II)新的7－杂环基喹啉和噻吩并[2，3－b]吡啶的衍生物，其中所有可变基团如定义所述；含有它们的药物组合物；以及它们在治疗与促性腺激素释放激素(GnRH)有关的疾病和症状中的应用。本发明的化合物是GnRH的拮抗剂，用于治疗不育、前列腺癌、良性的前列腺增生(BPH)以及用作避孕剂。

说明书

                       发明领域

本发明涉及新的7-杂环基喹啉和噻吩并[2，3-b]吡啶的衍生物、和含有它们的药物组合物，以及它们在治疗与促性腺激素释放激素(GnRH)有关的疾病和症状中的应用。本发明的化合物是GnRH的拮抗剂，用于治疗不育、前列腺癌、良性的前列腺增生(BPH)以及用作避孕剂。

                       发明背景

促性腺激素释放激素(GnRH)，也称为黄体生成素释放激素(LHRH)，是一种直链十肽酰胺，pGlu-HisTrp-Ser-Tyr-GIy-Leu-Arg-Pro-Gly-NH₂，最初从猪(Matsuo，H.，et.al.，Biochem.Biophys.Res.Commun.1972，43，1334-1339)和绵羊(Burgus，R.，et.al.，PNAS，USA，1972，69，278-282)中分离。GnRH在生殖系统中担任重要角色。该激素自下丘脑是芳，作用于脑下垂体，刺激促黄体生成激素(LH)和促卵泡激素(FSH)的生物合成和分泌。从脑下垂体释放的LH主要用于调节男性和女性体内生殖腺类固醇的生成，而FSH调节男性精子的生成和女性卵泡的发育。

使用肽(peptidic)GnRH激动剂和拮抗剂的基于GnRH的治疗方法已经在与LH/FSH释放有关的病症中的治疗中显示出了效果，诸如子宫内膜异位、子宫纤维肌瘤、多囊性卵巢疾病、青春期早熟和一些生殖腺类固醇依赖性肿瘤，特别是前列腺癌、乳腺癌和卵巢的癌。GnRH激动剂和拮抗剂还用于调节生育能并用作男性和女性避孕药。

虽然本发明的化合物主要用于治疗与生殖系统有关的疾病和病症，但是它们还可用于治疗其它GnRH调节的紊乱和病症，包括垂体促性腺细胞腺瘤、睡眠障碍、良性前列腺增生和前列腺癌。

类似肽的GnRH拮抗剂是已知的，例如直链肽的衍生物(美国专利5140009和517835)，环状六肽衍生物(日本专利申请延迟公开No.61(1986)-191698)，和二环肽衍生物(J.Med.Chem.1993，36，3265)。然而，由于生物可利用度不足、这些化合物限于静脉内和皮下给药。

最近，已经公开了小分子非肽GnRH拮抗剂。Kato等人在EP0679642公开了异苯并二氢吡喃衍生物，其具有促性腺激素释放激素受体拮抗活性以及钙拮抗和一元胺吸收抑制活性。

Ohkawa等人在WO96/38438中公开了三环二氮杂卓衍生物，其具有促性腺激素释放激素受体拮抗体活性。Ohkawa等人在WO95/29900中公开了稠合的杂环化合物，其具有GnRH受体拮抗作用和和/或改善睡眠障碍的作用。

Furuya等人在WO97/14682公开了2-羟基喹啉衍生物作为GnRH拮抗剂，其用作预防或治疗性激素依赖性疾病的预防剂或治疗剂。

Goulet等人在WO97/44037和WO97/44041中、Goulet等人在WO97/44321中以及Goulet等人在WO97/44339中公开了GnRH的非肽拮抗剂，用于治疗男性和女性的多种与性器官激素相关的病症。Goulet等人在WO97/21703和WO97/21707中公开了GnRH的非肽拮抗剂，用于治疗男性和女性的多种与性器官激素相关的病症。

Furuya等人在WO95/28405中公开了二环噻吩衍生物，具有促性腺激素释放激素受体拮抗活性。Furuya等人在WO97/41126中公开了具有GnRH拮抗活性的4，7-二氢-4-氧杂噻吩并[2，3-b]吡啶衍生物。Furuya等人在WO97/14697公开了作为GnRH拮抗剂的噻吩并[2，3-b]吡啶衍生物。

                       发明概述

因此，本发明涉及式(I)或(II)化合物：

或

其中

L′选自CH₂、CH(CH₃)和C(CH₃)₂；

R¹和R²独立地选自烷基、环烷基、芳基、芳烷基、杂芳基和杂环烷基；其中芳基、杂芳基或杂环烷基任选被一个或多个独立地选自卤素、烷基、烷氧基、硝基、NH₂、NH(烷基)、N(烷基)₂、-C(O)-烷基、-C(O)-芳基或-C(O)-环烷基的取代基取代；

X选自O、S和NR^A；其中R^A选自氢、烷基、芳基或芳烷基；

R⁴选自-C(O)-R^B、-C(O)O-R^B、-C(O)NH₂、-C(O)-NHR^B、-C(O)-N(R^B)₂和-C(O)NHNH₂；

其中R^B选自烷基、芳基、芳烷基和环烷基；

或者X是N并与R⁴连接在一起形成选自吡唑基、二氢吡唑基、异卓唑啉基和二氢嘧啶基的环结构；其中环任选被一个或多个R^C取代；

其中每个R^C独立地选自氧代基、烷基、烷氧基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、芳基、-O-芳基、芳烷基和-O-芳烷基；

L²选自烷基；

R³选自烷基、环烷基、芳基、杂芳基和杂环烷基；其中环烷基、芳基、芳烷基、杂芳基或杂环烷基基团任选被一个或多个独立选自卤素、烷基、烷氧基、硝基、NH₂、NH(烷基)、N(烷基)₂、氰基或亚磺酰氨基的基团取代；

R⁵选自卤素、环烷基、芳基、芳烷基、杂芳基和杂环烷基；其中环烷基、芳基、芳烷基、杂芳基或杂环烷基基团任选被一个或多个独立选自卤素、烷基、烷氧基、硝基、NH₂、NH(烷基)、N(烷基)₂、氰基或亚磺酰氨基的基团取代；

条件是当X为O，则R⁵选自杂芳基或杂环烷基；其中杂芳基或杂环烷基基团任选被一个或多个独立选自卤素、烷基、烷氧基、硝基、NH₂、NH(烷基)、N(烷基)₂、氰基或亚磺酰氨基的基团取代；

及其药学上可接受的盐、酯和其前体药物。

本发明的一个方面是化合物4，7-二氢-2-(4-甲基苯基)-7-[(2-甲氧基苯基)甲基]-3-[[甲基(苯基甲基)氨基]甲基]-4-氧杂-噻吩并[2，3-b]吡啶-5-羧酸酰肼，及其药学上可接受的盐、酯和其潜药。

本发明涉及包括药学可接受载体和任何上述化合物的药物组合物。本发明涉及通过混合任何上述化合物和药学可接受载体制得的药物组合物。本发明涉及包括混合任何上述化合物和药学可接受载体的制备药物组合物的方法。

本发明涉及在需要的情况下治疗紊乱或疾病的方法，其在需要者体内应答于GnRH的拮抗作用，包括对需要者给予治疗地有效量的上述任何化合物或药物组合物。

本发明的一个实例是用于在需要的情况下治疗不育、前列腺癌或良性的前列腺增生(BPH)的方法，包括对需要者给予治疗有效量的上述任何化合物或药物组合物。

本发明的另一个实例是在需要的情况下女性或男性避孕的方法，包括对需要者给予治疗有效量的上述任何化合物或药物组合物。

本发明的另一实施例是在此描述的任何化合物在药剂制备中的用途，所述的药剂用于在需要时治疗：(a)不育、(b)前列腺癌、(c)良性的前列腺增生(BPH)或用于(d)避孕。

                       发明详述

本发明涉及式(I)或(II)化合物：

或

其中L¹，R′，R²，X，R⁴，13，R³和R⁵如前所述，其用于治疗紊乱或疾病，其在需要者体内应答于GnRH的拮抗作用，诸如不育、前列腺癌、良性的前列腺增生(BPH)等。本发明的化合物进一步用作避孕剂。

本发明的一个实施方案是式(I)化合物，其中

L¹是CH₂；

R¹和R²独立地选自低级烷基、环烷基、芳基芳烷基、杂芳基和杂环烷基；其中芳基、芳烷基、杂芳基或杂环烷基可任选被一或两个取代基取代，所述的取代基选自卤素、低级烷基、低级烷氧基、硝基、NH₂、NH(低级烷基)或N(低级烷基)₂；

X是O；

R⁴选自-C(O)O-烷基、-C(O)O-芳基和-C(O)NHNH₂；

或者X是N且与R⁴连接在一起形成选自吡唑基、吡唑啉基、二氢吡啶基和二氢嘧啶基的环结构，其中环结构可任选被1-2个取代基取代，所述的取代基独立地选自氧代、低级烷基、低级烷氧基、芳基、-O-芳基、芳烷基或-O-芳烷基；

L²选自低级烷基；

R³选自芳基；其中芳基基团任选被一个或两个独立选自卤素、低级烷基、低级烷氧基、硝基、NH₂、NH(烷基)、N(烷基)₂、氰基或亚磺酰氨基的取代基取代；R⁵选自卤素、环烷基、芳基、芳烷基、杂芳基和杂环烷基，其中环烷基、芳基、芳烷基、杂芳基或杂环烷基任选被一或两个取代基取代，所述的取代基独立地选自卤素、低级烷基、低级烷氧基、硝基、NH₂、NH(低级烷基)或N(低级烷基)₂、氰基或亚磺酰氨基；

条件是当X是O时，则R⁵是选自杂芳基或杂环烷基的基团；其中，杂芳基或杂环烷基基团任选被一个或多个独立选自卤素、低级烷基、低级烷氧基、硝基、NH₂、NH(低级烷基)、N(低级烷基)₂、氰基或亚磺酰氨基的基团取代；

及其药学上可接受的盐、酯和其前体药物。

本发明的另一个实施方案是式(I)或(II)化合物，其中X是S且R⁵是选自杂芳基或杂环烷基的基团；其中杂芳基或杂环烷基基团任选被一个或多个选自卤素、烷基、烷氧基、硝基、NH₂、NH(烷基)、N(烷基)₂、氰基或亚磺酰氨基的基团取代；

本发明的另一个实施方案是式(I)或(II)化合物，其中X是NR^A或X是N且与R⁴连接在一起形成环结构，该环结构是选自吡唑基、二氢吡唑基、异卓唑啉基和二氢嘧啶基的基团；其中环结构任选被一或多个R^C取代，其中R^C定义如上。

本发明特别优选的实施方案是列于表1和2的式(I)和(II)化合物。

                                     表1

                                        表2

在此使用的″卤素″意思是氯、溴、氟和碘。

在此使用的术语″烷基″无论是单独使用还是作为取代基的一部分使用，包括有1-10个碳原子的直链和支链。例如，烷基包括甲基、乙基、正丙基、丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基等。除非另作说明，″低级″与烷基一起使用时表示有1-6个碳原子的碳链结构。

在此使用的，除非另作说明，″烷氧基″表示上述直链或支链烷基的氧醚基。例如甲氧基、乙氧基、正丙氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、正己氧基等。除非另作说明，″低级″与烷氧基一起使用时表示烷基具有1-6个碳原子的上述直链或支链烷基的氧醚基。

除非另作说明，在此使用的″芳基″表示碳环芳基，诸如苯基、萘基等。

除非另作说明，在此使用的″芳烷基″表示被诸如苯基、萘基等芳基取代的任何低级烷基。例如苄基、苯乙基、苯丙基、萘基甲基等。

除非另作说明，在此使用的″环烷基″表示3-8元单环、饱和碳环结构，包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基和环辛基。

除非另作说明，在此使用的″杂芳基″表示5或6元单环芳环结构，其含有至少一个选自O、N和S的杂原子，任选含有1-3个独立选自O、N和S的其它杂原子。或9或10元双环芳环结构，其含有至少一个选自O、N和S的杂原子，任选含有1-4个独立选自O、N和S的其它杂原子。杂芳基基团可在环的任何杂原子或碳原子上连接从而得到稳定结构。

适合的杂芳基基团的例子非限制性地包括吡咯基、呋喃基、噻吩基、恶唑基、咪唑基、吡唑基、异噁唑基、异噻唑基、三唑基、噻二唑基、吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、吡喃基、呋咱基、吲嗪基、吲哚基、异二氢氮茚基、吲唑基、苯并呋喃基、苯并噻嗯基、苯并咪唑基、苯并噻唑基、嘌呤基、喹嗪基、喹啉基、异喹啉基、异噻唑基、噌啉基、2，3-二氮杂萘基、喹唑啉基、喹喔啉基、萘啶基、蝶啶基等。

在此使用的术语″杂环烷基″表示5或6元单环饱和、部分不饱和或部分芳香的环结构，其含有至少一个选自O、N和S的杂原子，任选含有1-3个独立选自O、N和S的其它杂原子。或9-10元饱和、部分不饱和或部分芳香的双环体系，其含有至少一个选自O、N和S的杂原子，任选含有1-4个独立选自O、N和S的其它杂原子。杂环烷基基团可在环的任何杂原子或碳原子上连接从而得到稳定结构。

适合的杂环烷基基团的例子非限制性地包括吡咯啉基、吡咯烷基、dioxalanyl、咪唑啉基、imldazolidlnyl、吡唑啉基、吡唑烷基、哌啶基、二噁烷基、吗啉基、二噻烷基、硫吗啉基、哌嗪基、三噻烷基、二氢吲哚基、苯并吡喃基、3，4-亚甲基二氧苯基和2，3-二氢苯并呋喃基等等。

当特定的基团″被取代″时(例如环烷基、芳基、芳烷基、杂环烷基、杂芳基)，该基团可具有一个或多个取代基，优选1-5个取代基，更优选1-3个取代基，最优选1-2个取代基，这些取代基独立地选自取代基列表中。

对于取代基而言，术语″独立地″是指当可存在多于一个这类取代基时，这类取代基可以相同或彼此不同。

基于在此使用的全部标准命名，首先描述指定侧链的末端，然后描述对着附着点的邻近官能团。因此，例如″苯基烷基氨基羰基烷基″是指下式基团：

本发明化合物的命名可用本领域已知的命名法规则生成，或可以用商业化学命名软件生成，例如ACO/Index Name(AdvancedChemistry Development，Inc.，Toronto，Ontario)。

为了用于医药，本发明化合物的盐是无毒的″药学可接受的盐″。但是，其它的盐也可用于根据本发明化合物或它们的药学可接受盐的制备。化合物适合的药学可接受的盐包括酸加成盐，例如可以是通过将化合物与药学可接受酸的溶液混合形成，所述的酸是诸如盐酸、硫酸、富马酸、马来酸、琥珀酸、乙酸、苯甲酸、柠檬酸、酒石酸、碳酸或磷酸。另外，苯发明化合物带有酸性部分时，适合的药学可接受的盐可以包括碱金属盐，例如钠盐或钾盐；碱土金属盐，例如、钙盐或镁盐；以及与适合的有机配体形成的盐，例如季铵盐。因此，典型的药学可接受的盐包括下列：

醋酸盐、苯磺酸盐、苯甲酸盐、重碳酸盐、硫酸氢盐、酒石酸氢盐、硼酸盐、溴化物、乙二胺四乙酸钙、右旋樟脑磺酸盐、碳酸盐、氯化物、棒酸盐、柠檬酸盐、二盐酸化物、乙二胺四乙酸盐、edisylate、estolate、esylate、延胡索酸盐、葡庚糖酸盐、葡糖酸盐、谷氨酸、乙醇酰基对氨基苯砷酸盐(glycollylarsanilate)、己烷基间苯二酚盐、hydrabamine、氢溴化物、氢氯化物、羟基萘甲酸盐、碘化物、isothionate、乳酸盐、乳糖酸盐、月桂酸盐、苹果酸、顺丁烯二酸、苦杏仁酸盐、甲磺酸盐、甲基溴、甲基硝酸盐、甲磺酸盐、mucate、萘磺酸盐、硝酸盐、N-甲基葡糖胺铵盐、油酸盐、双羟萘酸盐(双羟萘酸盐)、棕榈酸、泛酸盐、磷酸盐/二磷酸、多聚半乳糖醛酸、水杨酸盐、硬脂酸盐、硫酸盐、碱式醋酸盐、琥珀酸盐、丹宁酸盐、酒石酸盐、teoclate、甲苯磺酸盐、三乙基碘和戊酸盐。

本发明范围内包括本发明化合物的前体药物。通常，这种前体药物是本发明化合物的官能衍生物，其在体内可容易地转化成需要的化合物。因此，在本发明治疗方法中，术语″给药″包括将具体公开的或可能没有具体公开但是在给与病人后在体内转化成具体化合物的化合物用于治疗各种紊乱。例如在″Design of Prodrugs″，ed.H.Bundgaard，Elsevier，1985中描述了选择和制备前体药物衍生物的常规方法。

当根据本发明的化合物具有至少一个手性中心时，它们相应地会作为对映体存在。当化合物有两个或更多手性中心时，它们还可作为非对映体存在。应认为所有这类异构体和其混合物也包括在本发明的范围内。另外，化合物的一些晶体形式可以多种形体存在，其同样也包括本发明内。另外，一些化合物可能与水(即、水合物)或常规溶剂形成溶剂化物，这类溶剂化物也包括在本发明的范围内。

在此使用的术语″需要者″是指被治疗、观察或实验的动物，优选哺乳动物，最优选人。

在此使用的术语″治疗有效量″意思是在被研究人员、兽医、内科医生或其它临床医生研究的组织系统、动物或人内部引起生物学或医学响应的活性化合物或药剂引戏的量，所述的响应包括减轻所治疗疾病或紊乱的症状。

在此使用的术语″组合物″是指一种包括特定量的特定成分的产品，以及任何直接或间接生成特定量特定成分的组合物的产品。

实施例中使用的缩写如下：

αMEM ＝极限必需培养基

DCM   ＝二氯甲烷

DIPEA ＝二异丙基乙胺

DMF   ＝N，N-二甲基甲酰胺

DME   ＝乙二醇二甲醚

DMSO  ＝二甲亚砜

Et₃N ＝三乙胺

EtOAc ＝乙酸乙酯

LHMDS ＝Lithium hexamethyldisilazide

MeOH  ＝甲醇

NBS   ＝1-溴-2，5-吡咯烷二酮

Ph    ＝苯基

RT或rt＝室温

TEA＝三乙胺

THF＝四氢呋喃

其中X是O的通式(I)化合物可根据方案1所示的方法制备。

                          方案1

更特别地，式(III)化合物，一种通过已知方法制备的已知化合物，其中Q是溴或碘，与式(IV)的被适当取代的化合物在碱存在下在有机溶剂中反应，得到相应的式(V)化合物，所述的碱是诸如碳酸钾、TEA、NaOH、NaH、DIPEA等，有机溶剂是诸如THF、DMF、DCM等。

式(V)化合物与诸如70％NBS的溴化剂在诸如THF、DMF、DMC等有机溶剂中反应，得到相应的式(VI)化合物。

式(VI)化合物与式(VII)的适当取代的胺在诸如TEA、DIPEA等的碱存在下在诸如THF、DMF等有机溶剂中反应，生成相应的式(VIII)化合物。

在诸如四(三苯基膦)钯(Pd(PPh₃)₄)等催化剂存在下，在诸如NaCO₃、NaOH等碱存在下，在诸如THF、DMF、二恶烷等有机溶质中，任选在与水的混合物中，式(VIII)化合物与式(IX)的适当取代的硼酸反应得到相应的式(Ia)化合物。

其中X是O的通式(I)化合物可根据方案2所示的方法制备。

                          方案2

具体地，在诸如吡啶、甲苯、二甲苯等有机溶剂中，在大约60-140℃范围内的升高温度，方案1中制备的式(Ia)的适当取代的化合物与诸如P₄S₁₀、Lawessons试剂等磺化剂反应生成相应的式(Ib)化合物。

其中X是N且与R⁴连接在一起形成下式基团的式(I)化合物，

或其中R^D是选自烷基、芳基和芳烷基的基团，可根据方案3所示的方法制备。

                          方案3

更特别地，在诸如DMF、DMSO等有机溶剂中，在大约80-110℃范围内的升高温度，方案2中制备的式(Ib)的适当取代的化合物与式(X)化合物反应生成相应的式(Ic)化合物。

在诸如LHMDS、NaH、叔丁醇钾等强碱的存在下，式(Ic)化合物任选进一步与式(IX)化合物反应生成相应的式(Id)化合物，其中RD是选自烷基、芳基和芳烷基的基团。

或者，式(Ic)化合物可根据已知方法进一步反应，在吡唑基基团上引入一个或多个取代基。

其中X是NR^A的通式(I)化合物可根据方案4所示的方法制备。

                          方案4

更特别地，在诸如DMF、DMSO等有机溶剂中，优选在大约60-120℃范围内的升高温度，方案2中制备的式(Ib)的适当取代的化合物与式(XII)的适当取代的胺反应生成相应的式(Ie)化合物。

其中X是N且与R⁴连接在一起形成选自二氢吡唑基、异卓唑啉基和二氢嘧啶基的环结构的式(I)化合物可通过本领域技术人员已知的方法制备。

例如，其中X是N且与R⁴连接在一起形成二氢吡唑基的式(I)化合物可通过下述方法制备，在方案1中制备的、其中X是O和R⁴是式-CO₂R^B的酯的式(Ia)适当取代的化合物与适合的还原剂反应生成相应的其中R⁴是式-C(O)H醛的化合物，随后，R⁴醛与肼基甲酸苄基酯反应生成其中R⁴是腙(-CHNNH-C(O)O-苄基)的相应化合物，用氢气在诸如氢氧化钯的催化剂存在下还原R⁴腙，生成其中R⁴是肼(-CH₂NHNH₂)的相应化合物，然后用诸如P₂O₅的脱水剂在升高的温度处理R⁴肼，得到相应的式(I)二氢吡唑取代的化合物。

其中X是N且与R⁴连接在一起形成异卓唑啉基的式(I)化合物可通过下述方法制备，在方案1中制备的、其中X是O且R⁴是式-CO₂R^B酯的式(Ia)适当取代的化合物进行皂化，将R⁴酯基转化为相应的羧基(-CO₂H)，然后用适当的还原剂处理R⁴羧基，生成其中R是式-CH₂OH的醇的相应化合物，将X从O羰基转化为相应的X是S-硫代羰基基团，将硫代羰基基团转化为相应的其中X是N-OH的羟胺，然后用诸如P₂O₅的脱水剂在升高的温度进行X羟胺和R⁴醇的环闭合反应，生成相应的式(I)异卓唑啉基取代的化合物。

其中X是N且与R⁴连接在一起形成二氢嘧啶基或氧代二氢嘧啶基的式(I)化合物可通过下述方法制备：在方案1中制备的、其中R⁴是式-CO2RB酯的适当取代的式(Ia)化合物在有机溶剂中在升高的温度与脲、硫脲、胍或适当取代的烷基或芳基脒反应胜场相应的氧代取代的二氢嘧啶基硫取代的二氢嘧啶基亚氨基取代的二氢嘧啶基或烷基或芳基取代的二氢嘧啶基取代的式(I)化合物。式(I)的氧代取代二氢嘧啶基取代化合物可进一步任选根据方案3所述的方法烷基化，生成相应的二氢二氢嘧啶基取代的式(I)化合物。同样地，式(I)硫代或亚氨基取代二氢嘧啶基取代的化合物可进一步任选根据已知方法反应，分别去掉硫代基团(＝S)或修饰亚胺基(＝NH)。

其中R⁴是-C(O)O-R⁶、X是S或X是N且与R⁴连接在一起形成的式(II)化合物可根据方案5所示的方法制备。

                          方案5

更特别地，式(X)化合物，一种已知化合物或用已知方法制备的化合物，与诸如P₄S₁₀、Lawesson试剂等磺化剂在诸如吡啶、TEA、Hunig′s碱(DIEA)等存在下，在60-120℃范围内的升高的温度，优选在大约回流温度进行反应，生成式(IIa)化合物。

式(IIa)化合物可任选进一步与H₂N-NH₂在诸如DMF、DMSO等有机溶剂中在80-110℃范围内的升高的温度反应，生成相应的式(IIb)化合物。

式(IIb)化合物可进一步任选根据已知的方法反应，在吡唑基基团上引入一个或多个取代基。其中X是N且与R⁴连接在一起形成选自二氢吡唑基、异卓唑啉基和二氢嘧啶基的式(II)化合物可类似地根据上述方法用适当的式(X)化合物代替式(Ia)化合物制备。

其中X是选自O、S和NR^A的基团的式(II)化合物可通过本领域技术人员已知的方法由相应的式(X)化合物制备。

例如，其中X是O且R⁴不是-C(O)OR⁶的式(II)化合物可通过下述方法制备：将式(X)适当取代的化合物上的R4酯转化为相应的R⁴羧基，然用已知的喹诺酮化学将R⁴羧基转化为需要的R⁴官能基。

其中氧是S且R⁴不是-C(O)OR⁶的式(II)化合物可类似地通过下述方法制备：将式(X)化合物上的-C(O)OR⁶酯转化为如上所述需要的R4基团，然后如方案5所述，通过与磺化试剂反应将X是氧O(羰基)转化为X是S(硫代羰基)。

其中X是NR^A且R⁴不是-C(O)OR⁶的式(II)化合物可类似地通过下述方法制备：将式(X)化合物上的-C(O)OR⁶酯转化为如上所述需要的R⁴基团，然后如方案4所述，通过与适当取代的胺反应将X是氧O(羰基)转化为X是NR^A(氨基)。

下列实施例用于帮助理解本发明，其不是也不应被认为是对前述发明和后继权利要求的任何限制。

                          实施例1

7-溴-6-溴甲基-1-(2，6-二氟苄基)-1，4-二氢-4-氧代喹啉

                     -3-羧酸乙酯

根据PCT申请WO97/14682参考实施例3所述的方法制备的7-溴-1-(2，6-二氟苄基)-1，4-二氢-甲基-4-氧代喹啉基-3羧酸乙酯(3.5g，8mmol)、NBS(1.5g，8.4mmol)和2，2′-偶氮二异丁腈(AIBN，100mg)在DCM(200mL)中的混合物在回流下搅拌4小时。加入另外的NBS(750mg)，混合物再回流4小时。柱色谱法柱色谱法(己烷∶乙酸乙酯＝3∶7)提纯得到白色固体产品。

产量：2.95g(72％)

m.p.184-187℃；

¹H NMR(CDCl₃)，δ1.41(t，J＝8Hz，3H)，4.40(q，J＝8Hz，2H)，4.66(s，2H)，5.36(s，2H)，7.03(m，2H)，7.39(m，1H)，7.92(s，1H)，8.54(s，1H)，8.68(ds，1H)；

MS(m/z)：514(MH⁺).

                    实施例2

6-(N-苄基-N-甲基氨基甲基)-7-溴-1-(2，6-二氟苄基)-1，4-二氢-4-

                    氧代喹啉-3-羧酸乙酯

7-溴-6-溴甲基-1-(2，6-二氟苄基)-1，4-二氢-4-氧代喹啉-3-羧酸乙酯(110mg，0.21mmol)、甲基苄基胺(31mg、0.26mmol)在DIPEA(0.045ml)和DMF(15ml)中的混合物在室温搅拌16小时。加入乙酸乙酯和水。分离有机相，用水洗涤，用MgSO₄干燥。蒸发溶剂，残余物在真空下干燥，得到白色固体产物。

产量：120mg(100％)

¹H NMR(CDCl₃)，δ1.41(t，J＝8Hz，3H)，2.17(s，3H)，3.62(s，2H)，3.67(s，2H)，4.40(q，J＝8Hz，2H)，5.36(s，2H)，7.03(m，2H)，7.25-7.39(m，6H)，7.88(s，1H)，8.59(s，1H)，8.67(ds，1H)；

MS(m/z)：555(MH⁺).

                          实施例3

6-(N-苄基-N-甲基氨基甲基)-7-(苯并呋喃-2-基)-1-(2，6-二氟苄

            基)-1，4-二氢-4-氧代喹啉-3-羧酸乙酯

                          化合物#2

7-溴-6-溴甲基-1-(2，6-二氟苄基)-1，4-二氢-4-氧代喹啉-3-羧酸乙酯(278mg、0.5mmol)、苯并呋喃-2-硼酸(97mg、0.6mmol)、四(三苯基膦)钯(O)(69mg、0.06mmol)和2M碳酸钠(414mg、3mmol)在DME(20ml)中的混合物回流加热16小时。加入乙酸乙酯和水。分离有机相，用水洗涤并用MgSO₄干燥。柱色谱法(乙酸乙酯)提纯生成黄色固体产物。

产量：55mg(19％)

¹H NMR(CDCl₃)，δ1.44(t，J＝8Hz，3H)，2.17(s，3H)，3.63(s，2H)，3.90(s，2H)，4.42(q，J＝8Hz，2H)，5.49(s，2H)，7.00(m，2H)，7.22-7.81(m，11H)，8.23(s，1H)，8.62(s，1H)，8.76(ds，1H)；

MS(m/z)：593(MH⁺).

                           实施例4

2，5-二氢-7-(4-甲氧苯基)-5-[(2-甲氧苯基)甲基]-8-[甲基(苯基甲

    基1)氨基]甲基]-3H-吡唑并[3，4-d]噻吩并[2，3-b]吡啶-3-酮

                            化合物#8

向4，7-二氢-2-(4-甲氧基苯基)-7-[(2-甲氧苯基)甲基-3-[[甲基(苯基甲基)氨基]甲基]-4-氧代噻吩并[2，3-b]吡啶-5-羧酸乙酯(根据Furuya.S等在PCT申请WO95/28405中描述的方法制备)(387mg，0.66mmol)在吡啶(3mL)中的溶液中加入P₄S₁₀(240mg，0.65eq)。反应烧瓶用氩冲洗，在回流下搅拌5小时。除去溶剂，产品急骤层析法提纯，得到相应的硫代羰基。

硫代羰基(118mg、0.19mmol)溶于干DMF(0.25ml)并用肼一水合物(0.02ml，0.42mmol)处理。得到的溶液在80□加热2小时，冷却混合物，用急骤层析法提纯。产品用HCl处理转化为其盐酸盐，得到黄色粉末产品。

产量：7.5mg

MS(m/z)551(MH⁺).

                          实施例5

2，5-二氢-7-(苯并呋喃-2-基)-8-[[甲基(苯基甲基)氨基]甲基]-5-

       [(2，6-二氟苯基)甲基]-3H-吡唑并[4，3-c]喹啉-3-酮

                          化合物#4

向7-(苯并呋喃-2-基)-8-[[甲基(苯基甲基)-氨基]-甲基]-5-[(2，6-二氟苯基)℃甲基]-3-喹啉羧酸乙酯(590mg、0.84mmol)在吡啶(5ml)中的溶液中加入P₄S₁₀(240mg，0.65eq)。用氩冲洗反应烧瓶并在回流搅拌二小时，冷却至100℃并倾入水中(100ml)。用氯仿萃取产物，干燥(MgSO₄)，浓缩生成红棕色固体。

固体(337mg，0.55mmol)溶于干DMF(5ml)并用肼一水化物(60mg，1.1mmol)处理。得到的混合物在100℃温热3小时，冷却混合物并倾入水中。过滤收集得到的黄色沉淀，干燥得到产物。

产量：149mg

¹H NMR(CDCl₃)δ2.09(s，3H)，3.57(s，2H)，3.86(s，2H)，5.84(s，2H)，7.18-7.49(m，12H)，7.66-7.77(m，2H)，8.16(s，1H)，8.33(s，1H)，8.95(s，1H).

                          实施例6

7-(苯并呋喃-2-基)-3-[(苯基甲基)氧基)]-5-[(2，6-二氟苯基)甲

  基]-8-[[甲基(苯基甲基)氨基]甲基]-5H-吡唑并[4，3-c]喹啉

                           化合物#5

2，5-二氢-7-(苯并呋喃-2-基)-8-[(甲基(苯基甲基)氨基]甲基]-5-[(2，6-二氟苯基)甲基]-3H-吡唑并[4，3-c]喹啉-3-酮(120mg，0.21mmol)在干DMF(5ml)中的溶液用lithiumhexainethyidisilazide(0.25ml，0.25摩尔，1.0M)的四氢呋喃(THF)溶液处理。用注射器加入溴化苄(40mg，0.22mmol)，混合物搅拌过夜。加入1当量在乙醚中的盐酸，蒸发溶剂，得到相应的盐酸盐产物黄色固体。

产量：47mg

¹H NMR(CDCl₃)δ2.08(s，3H)，3.55(s，2H)，3.87(s，2H)，5.13(s，2H)，5.88(s，2H)，7.12-7.51(m，16H)，7.66-7.70(m，2H)，8.16(s，1H)，8.37(s，1H)，9.10(s，1H).

                           实施例7

6-(N-苄基-N-甲基氨基甲基)-7-(噻吩-3-基)-1-(2，6-二氟苄基)-

               1，4-二氢-4-氧代喹啉-3-羧酸乙酯

                           化合物#1

按照实施例3所述的方法，实施例2制备的化合物(6-(N-苄基-N-甲基氨基甲基)-7-溴-1-(2，6-二氟苄基)-1，4-二氢-4-氧代喹啉-3-羧酸乙酯)(150mg，0.27mmol)噻吩-3-硼酸(38.4mg，0.30mmol)反应，生成黄色固体产物。

产量：48mg

MS(m/z)559(MH⁺).

                            实施例8

2，5-二氢-7-溴-8-[[甲基(苯基甲基)氨基]甲基]-5-[(2，6-二氟苯基)

               甲基]-3H-吡唑并[4，3-c]喹啉-3-酮

                            化合物#3

根据实施例4所述的方法，6-(N-苄基-N-甲基氨基甲基)-7-溴-1-(2，6-二氟苄基)-1，4-二氢-4-氧代喹啉-3-羧酸乙酯(0.6g，1.1mmol)被转化为标题化合物，作为相应的盐酸盐黄色粉末分离。

产量：0.05g

MS(m/z)524(MH⁺)

                            实施例9

7-(苯并呋喃-2-基)-3-乙氧基-5-[(2，6-二氟苯基)甲基]-8-[[甲基

    (苯基甲基)氨基]甲基]-5H-吡唑并[4，3-c]喹啉基-3-酮HCl

                            化合物#6

根据实施例6所述的方法，2，5-二氢7-(苯并呋喃-2-基)-8-[[甲基(苯基甲基)氨基]甲基]-5-[(2，6-二氟苯基)甲基]-3H-吡唑并[4，3-c]喹啉-3-酮(0.05g，0.09mmol)与乙基碘(0.0189，0.116mmol)反应生成标题化合物，其作为相应的盐酸盐黄色粉末分离。

产量：0.05g

MS(m/z)589(MH⁺).

                        实施例10

4，7-二氢-2-(4-甲基苯基)-7-[(2-甲氧基苯基)甲基]-3-[[甲基(苯

       基甲基)氨基]甲基]-4-氧杂-噻吩并[2，3-b]吡啶-5-

                     羧酸酰肼二盐酸盐

                          化合物#7

向4，7-二氢-2-(4-甲氧基苯基)-7-[(2-甲氧基苯基)甲基]-3-[[甲基(苯基甲基)氨基]甲基]-4-氧代-噻吩并[2，3-b]吡啶-5-羧酸乙酯(57mg，0.097mmol)在乙醇(2ml)中的溶液中加入肼(0.030ml，0.096mmol)。回流加热混合物6小时并在真空中浓缩。残留物和乙醚一起研磨，沉淀收集固体，得到浅黄固体产物。

产量：38mg

MS(mlz)569(MH⁺).

                         实施例11

                     GnRH受体结合试验：

用雌雄大鼠垂体相等的混合物制备的匀浆用作GnRH受体结合膜的来源。受体可在溶液中与[125I]-histrelin单独相互作用，或与竞争配体(测试化合物)共同作用。结合的放射性同位素标记的配体通过使用96-穴平板采集系统(Tomtec Mach II 96)经玻璃滤器垫过滤与游离的(未结合的)放射性同位素标记的配体分离。在不存在竞争配体的情况下，最大量的放射性同位素标记的配体与受体结合，通过玻璃滤器垫截留。当存在可争夺受体位点的未标记配体时，与受体结合丙被滤器垫截留的放射性同位素标记的配体量相应降低，这取决于竞争者的浓度和竞争者对受体亲合力的强度。受体-结合的[¹²⁵I]-histrelin在滤器垫上的量用Wallac BetaplateTM液体闪烁计数器测定。结合测定如下：

NSB                        非特异性结合

B₀                        化合物最高浓度

平均NSB                    (NSBI+NSB2)/2

平均B₀：                  (B₀1+B₀2)/2

校正的B₀：                平均B₀-平均NSB

校正B₀(或最大量响应)的抑制百分数(％抑制)计算如下：

％抑制＝100[((每分钟实际计数-平均NSB)校正的B₀)*100]

                           实施例12

                     对GnRH的荧光素酶分析

带有GnRHR基因的Hek 293细胞用hCG促进剂和荧光素酶指示系统转染。在第1天，将细胞以80,000细胞每穴的密度覆盖在聚D-赖氨酸预涂的96穴板上。板在37℃培养24小时。在第2天，将耗尽的培养基倒出，代替以新鲜培养基。将测试化合物、标准样和对比样加入每个穴中。所有的稀释用7.5％DMSO/aMEM介质完成。对激动剂和拮抗剂形式均进行分析。对于拮抗剂形式，分析测定是以标准的0.6nm Higtrelin进行的。在第3天，在使用Enhanced Luciferase Assay Kit的化学荧光分析中测定荧光素酶生成的水平。结果使用下式用抑制百分率(％抑制)表示：

RLU                相对亮度单位、化学荧光的量度

激动剂             [RLU值(测试化合物)-(背景/0.6nMHistrelin)-背景]*100

拮抗剂             (1-[(RLU值-(背景/0.6nM Histrelin)-背景)*100])

使用测定Graph Pad Prizm和IC₅₀/EC₅₀值在图上绘制计算的百分比。

                        实施例13

                主要的垂体细胞培养分析

处死雄性大鼠(在发育未全和成熟之间)，收集它们的垂体前叶。分解垂体，在第1天将细胞以0.33×10⁶细胞/穴的浓度覆盖在板上。在第3天将细胞上的培养基倒出，用新鲜的培养基替换。然后，将测试化合物以1nM至1000nM范围内的浓度加到覆盖的细胞中。板在37□在5％CO₂培养2天。在第5天，再将培养基倒出，用新鲜的培养基替换。然后将测试化合物和1nM GnRH加到板上。细胞培养4小时，通过在1200rpmSorvall RT7离心10分钟收集培养基，从每个穴吸取900mL上层清液，分配到96穴板。盖上深孔板并在20℃保存1天。然后通过ELISA(放射免疫测定系统)测定培养板，确定培养基中lutenizing激素的浓度。在实验化合物的不同浓度重复分析，确定IC₅₀值。IC₅₀值定义为达到50％抑制时测试化合物的浓度。

按照如上所述的方法，测试本发明选择的化合物，结果列于表3。

                                表3-生物活性

ID#    结合，IC₅₀(B％@30μM)  荧光素酶分析IC₅₀(μM)    脑垂体细胞分析IC₅₀(μM)    1    32μM  10(拮抗剂)    2    -  3.26(拮抗剂)    2.43    3    16    4    1    5    5    6    5    7    1.6    1.48    8    30

在上文中描述了本发明的主体，并采用实施例用来具体说明，应认为本发明的实现包括了下述权利要求范围内的所有常规变化、修改和/或改进以及它们的等同方案。