一种治疗哮喘和辅助治疗肿瘤、艾滋病的复方中药制剂及其制备方法

摘要

本发明公开了一种药物组合物，该药物组合物是由如下原料药制成的：巴戟天5～50重量份；淫羊藿30～120重量份；其特征在于上述药物组合物以及提取物和精制物可以加入常规辅料或赋形剂，制成临床可接受的注射剂、雾化剂、片剂、胶囊剂、口服液等制剂。本发明药物组合物具有温阳补肾、平喘止咳及免疫调节的功能，用于哮证(支气管哮喘)、肾虚挟痰证以及辅助治疗肿瘤和艾滋病。

说明书

技术领域

本发明涉及一种复方中药制剂，特别是涉及一种治疗急、慢性支气管炎、哮喘以及由此而引起气喘、多痰咳嗽、呼吸困难；辅助治疗肿瘤、艾滋病患者免疫功能低下的复方中药制剂及其制备方法。

背景技术

哮喘病是一种常见的慢性呼吸道疾病，近年来在国内外发病率有升高趋势。据陈敏章《中华内科学》(1999年版)和陈灏珠《实用内科学》(第11版)等有关资料介绍，哮喘病在全球各地区的患病率为0.3-9.2％。据测算全世界哮喘病患者达1.5亿。哮喘病在我国患病率为0.5-4％，其中成人患病率1％左右，儿童患病率3％左右，据测算我国有2500万哮喘病患者。不少人还由此而导致呼吸、循环系统及消化系统的继发病变。研究开发疗效确切、作用迅速、疗程短和抗复发的新型药物具有重要现实意义。

当前，西医学多以对症治疗和全身治疗相结合，如口服抗菌素药片等，主要由单纯解痉的对症治疗，发展到以气道抗炎为主兼用气道接近的抗炎治疗。虽有一定的疗效，但不十分理想，而且复发率较高，同时化学药物具有一定副作用。近些年，人们在保持和提高原有疗效的前提下，开展剂型改革，如注射剂、雾化剂。

肿瘤是难治病，发病机理复杂，治疗方法多种多样，但以手术切除肿瘤、放化疗抗肿瘤为主。抗肿瘤治疗后，患者普遍存在免疫功能低下、生存质量差、肿瘤易复发等病症。因此，开发提高肿瘤患者免疫功能又有抑制肿瘤细胞生长，进一步提高患者生存质量的药物具有重要意义。

艾滋病也是难治病，并具有传染性，攻克艾滋病的治疗是世界的难题。目前治疗方法以联合用药、抗艾滋病病毒为主。经药物治疗后，患者免疫功能进一步低下，生存质量差，艾滋病病毒又易复发等病症。因此，开发治疗艾滋病患者免疫功能低下又能抑制艾滋病病毒的药物，进一步提高患者的生存质量也是有重要意义。

发明内容

本发明的目的在于提供一种新的具有确切的抗炎、止喘、镇痛、祛痰和抑菌作用和提高免疫功能、抑制肿瘤、抑制艾滋病病毒作用的复方中药制剂；本发明的另一个目的在于提供一种新的复方中药制剂的制备方法。

本发明药物组合物的原料药组成及配比如下(按重量份)：

巴戟天5～50重量份；淫羊藿30～120重量份。

优选为：巴戟天15～40重量份；淫羊藿40～110重量份。

上述药物组合物以及提取物和精制物可以加入常规辅料或赋形剂，制成临床可接受的剂型，可以将本发明药物组合物制备成多种临床药物剂型，包括口服制剂或非肠道给药的剂型。所说的口服制剂选自于片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂、混悬剂、滴丸、口服液体制剂当中的一种；所说的非肠道给药剂型选自于注射剂、气雾剂、栓剂或皮下给药剂型当中的一种。

本发明药物还可加入常规的药物赋形剂，如溶剂、崩解剂、矫味剂、防腐剂、着色剂等。

本发明组合物制备方法：

中药材巴戟天、淫羊藿进行前处理工序，从众多的杂乱药材中拣选上好的药材，而后用水多次清洗，除去沙土、泥垢，将淫羊藿切成1cm左右小段、50-70℃以下干燥；巴戟天50-70℃以下干燥后，粉碎成20目粗粉；然后用此净原料进行第二提取工序，巴戟天净原料用6-8倍量水分别提取三次，每次1-2小时，提取液浓缩成40-60℃相对密度至1.1-1.3时，加入乙醇使含醇量达50-70％，回收乙醇，浓缩至相对密度1.1时，分次上聚酰胺柱吸附，用水和一种25-35％大极性溶剂洗脱，洗脱液混合回收烘干，再粉碎洗脱，浓缩过滤烘干，用溶媒溶解析结晶，在75-85℃以下真空干燥，得巴戟天提取物；淫羊藿净原料依次用10-16倍量水提取2-4次，每次1-2小时，提取液浓缩成40-60℃相对密度至11-1.3时，加入乙醇使含醇量达65-85％，回收乙醇，浓缩至相对密度1.1时，分次上聚酰胺柱吸附，用水和一种30-45％大极性溶剂洗脱，洗脱液混合回收烘干，再粉碎洗脱，浓缩过滤烘干，用溶媒溶解析结晶，在75-90℃以下真空干燥，得淫羊藿提取物；最后经过常规工序直接或加入药学上可接受的赋形剂制成临床可接受的剂型。

本发明复方制剂中抗菌、消炎、镇痛以及治疗急、慢性支气管炎、哮喘和免疫功能调节的主要成分分别为黄酮类化合物、低聚糖等。

本发明组合物具有抗菌、镇痛、消炎和止咳免疫调节功能，对急、慢性支气管炎、哮喘有很好的治疗作用，并可辅助治疗肿瘤和艾滋病。

本发明组合物制剂具有以下药理作用：中药复方制剂对氨水引咳小鼠有较明显的止咳作用；中药复方制剂对小鼠气管有明显的祛痰作用；中药复方制剂对豚鼠气管平滑肌有明显的松弛作用；中药复方制剂有明显的抗被动皮肤过敏作用；中药复方制剂有明显增强体液细胞免疫作用；中药复方制剂对小鼠耳二甲苯所致炎症有抑制作用；中药复方制剂延长耐缺氧作用及延长小鼠游泳时间；中药复方制剂提高免疫功能、抑制肿瘤细胞、具有免疫激活作用来抑制艾滋病毒等。

下面实验例用于进一步说明本发明。

下述实验材料与方法适用于实验例1-8。

实验材料与方法：

(1)、受试药物：本发明组合物制剂(复方注射液)，珠海健心医药有限公司产品，0.9g/ml，971205；(2)、盐酸麻黄碱注射液，无锡第七制药厂产品。50mg/ml，960613；(3)、阿司匹林片，北京制药厂产品，950825；(4)、人参皂甙，吉林省中医中药研究所中药所植化室提供，含量95％；(5)、扑尔敏注射液，濮阳市制药厂产品，960919；(6)、实验动物：Wistar大鼠，体重180-250g，合格证号970101018；昆明种小鼠，体重18-20g，合格证号970101017；杂种犬，体重10-20kg；日本大耳白兔，体重2.5kg左右；豚鼠，体重250-300g；以上动物雌雄兼半，均由吉林省中医中药研究院实验动物室提供。(7)、实验方法：体内实验肌肉注射，体外实验药品按终浓度要求溶入培养基或缓冲液。实验例1  复方注射液止咳作用的实验研究：

     表1复方注射液对氨水引咳小鼠的影响(X±SD)   组别    剂量(ml/kg)    动物数    C(秒)        EDT50     R

         体重          (只)正常对照组                  12    16.2±0.96     22.39麻黄碱组       2            12    18.0±0.84*    36.87    165复方注射液     4            12    18.8±1.08*    34.15    153复方注射液     2            12    18.4±1.08*    31.62    141复方注射液     1            12    17.8±0.84*    30.43    136

结论：(^*p＜0.01)复方注射液有较明显的止咳作用；复方注射液每ml含生药0.9克。实验例2  复方注射液祛痰作用的实验研究：

     表2复方注射液对小鼠气管酚红排泌量的影响   组别            剂量(ml/kg)体重      气管酚红排泌量(ug/ml)正常对照组                                   0.019±0.0004麻黄碱组                  2                  1.6±0.6^*复方注射液                4                  1.7±0.5^*复方注射液                2                  1.5±0.4^*复方注射液                1                  1.4±0.8^*

结论：(^*p＜0.01)复方注射液有增强酚红排泌的作用，可以认为有明显的祛痰作用。实验例3  复方注射液平喘作用的实验研究：

       表3(1)复方注射液对豚鼠喘息的影响  药物     剂量度      用药前                     用药后

        ml//kg    潜伏期(秒)   抽搐动物数  潜伏期(秒)   抽搐动物数正常对照               88±17         10/10      86±19       10/10麻黄碱      1.3        83±22         10/10      296±77      0/10喘可治      2.6        91±19         10/10      294±84      0/10喘可治      1.3        82±23         10/10      288±9       1/10喘可治      0.7        79±20         10/10      231±5       2/10

^*p＜0.01表3(2)复方注射液对豚鼠离体气管平滑肌的影响

                                曲线高度                解痉百分率

药物        标本数

                       给组胺后    给药后    差值          (％)

生理盐水      8       7.8±2.5    7.8±2.5   0

麻黄碱        8       8.0±3.9    0.5±2.4   7.5±1.5^**   93.8

复方制剂      8       7.9±2.5    0.6±2.3   7.3±0.2^**   93.4结论：(^**p＜0.01)复方注射液有明显的松弛的作用解痉率为92.4％。实验例4  复方制剂对大鼠同种被动过敏反映的影响

  表4复方注射液对大鼠同种被动过敏反映的影响(X±SD)

组别           剂量    动物数(只)       兰斑洗脱液OD值

对照组                     10

扑尔敏         2.0         10           0.429±0.017

复方注射液     3.0         10           0.333±0.027**

复方注射液     4.5         10           0.354±0.036*

复方注射液     0.8         10           0.386±0.081结论：(p＜0.05；^**P＜0.01)可治具有明显的抗被动皮肤过敏作用。实验例5 复方注射液对慢性支气管炎模型动物体液免疫和细胞免疫的影

  表5(1)复方注射液对小鼠免疫的影响(X±SD)

组别        剂量(ml/kg)      动物数(只)     HC50

正常对照组                      10      294.66±38.43

实验对照                        10      203.54±66.43

人参皂甙    20mg/kg             10      261.94±27.31**

复方注射液    4                 10      248.18±43.89*

复方注射液    2                 10      247.96±34.22*

复方注射液    1                 10      250.16±53.93*结论：(^*p＜0.05；^**P＜0.01)中、高剂量的复方制剂注射液具有明显的增强型动物体液免疫的作用。

  表5(2)复方注射液对慢性支气管模型动物小鼠淋巴细胞转化的影响(X±SD)

   组别             剂量(ml/kg)         动物数(只)       转化指数

正常对照组                                  10         18.05±3.06

实验对照                                    10         10.96±3.45 

人参皂甙               20mg/kg              10         17.33±3.06**

复方注射液                4                 10         15.55±3.85*

复方注射液                2                 10         14.69±2.31*

复方注射液                1                 10         12.58±4.12*

结论：(^*p＜0.05；^**P＜0.01)实验结果说明中、高剂量的复方注射液具有提高模型动物细胞免疫功能。实验例6  复方注射液的抑菌作用研究；

  表6复方注射液抑菌试验结果(液体试管法)

菌株                 喘可治注射液                         空白    菌株   阳性

            0.4  0.2  0.1  0.056  0.025  0.0125  0.00625  对照    对照   对照金黄色葡萄球菌  -    -    -    -      -      -       -        -       +++    -  致病大肠      -    -    -    -      -      +       +++      -       +++    -  沙门氏菌      -    -    -    -      -      +       +++      -       +++    -  志贺氏菌      -    -    -    -      -      +       +++      -       +++    -  肺炎球菌      -    -    -    -      -      +       +++      -       +++    -

“-”无菌生长；“+”少量生长；“+++”明显生长

结论：复方注射液对上述致病菌具有不同程度的抑制作用。实验例7  复方注射液抗炎作用的实验研究：

表7(1)复方注射液对小鼠二甲苯所致炎症的影响(X±SD)   组别        剂量    动物数(只)    肿胀度(mg)    肿胀抑制率(％)  正常对照                  10        12.0±2.6  阿司匹林      0.2         10        7.3±3.4^**     39.2  复方注射液    4           10        7.5±1.9^**     37.5  复方注射液    2           10        8.0±2.7^*      33.3  复方注射液    1           10        9.3±3.0        22.2

结论：^**p＜0.05；^*P＜0.01结果说明复方注射液具有明显的抗炎作用。

表7(2)复方制剂对棉球所致肉芽肿的作用

组别    剂量(ml/kg)体重    动物数(只)    肉芽肿数(mg/100g)体重  正常对照                          10               38.9±9.2  阿司匹林      0.2g/kg             10               27.9±16.2*  复方注射液    3.0                 10               27.8±3.9*  复方注射液    1.5                 10               29.2±2.9*  复方注射液    0.8                 10               27.7±8.2*

结论：^*P＜0.01结果表明，中、高剂量的复方制剂具有抗棉球所致肉芽中的作用。实验例8  复方制剂对应激实验的影响：

 表8(1)复方注射液对小鼠常压缺氧的作用。

组别    剂量(mg/kg)       动物数(只)        耐缺氧时间(min)  对照组                           10              59.7±11.9  人参皂甙      20mg/kg            10              80.3±12.1**  复方注射液    4                  10              75.5±13.9*  复方注射液    2                  10              67.8±11.6*  复方注射液    1                  10              68.2±10.7*^**p＜0.05；^*P＜0.01结果表明复方注射液具有明显的耐缺氧的作用。

表8(2)复方注射液对小鼠游泳时间的影响

 组别         剂量(mg/kg)    动物数(只)    游泳持续时间   对照组                           10          49.6±13.9  人参皂甙         20mg/kg          10          70.6±6.15**  复方注射液        4               10          79.5±10.1*  复方注射液        2               10          70.5±16.8*  复方注射液        1               10          65.6±17.0*

结论：(^*P＜0.01)复方注射液能明显的延长小鼠游泳时间，具有抗疲劳的作用。

上述实验例1-8试验证明复方制剂对氨水引咳法引起的小鼠咳嗽，有明显的镇咳作用。对喘息动物有平喘作用；对支气管平滑肌有明显的松弛作用：该注射液还有抗过敏作用；对慢性支气管炎模型动物有明显的增强肌体的体液免疫与细胞免疫的功能；在抗炎及抑菌实验中，该药表现出一定的抗炎与抑菌作用以及增强肌体的应急能力的作用实验例9  肿瘤辅助治疗实验

1、受试材料

(1)本发明制剂(复方注射液)，珠海健心医药有限公司产品，0.9g/ml，20021205

(2)环磷酰胺(CTX)粉针剂，0.2g/支，上海华联制药集团公司。

(3)雌性小鼠60只，体重(19±1)g，由广州中医药大学提供。

2、方法：在无菌条件下以匀浆法制备成(1-2)×10⁷/ml的Lewis肺癌细胞悬液，每鼠足趾皮下接种该细胞悬液0.05ml/只。60只小鼠随机分为5组，每组12只。分高、中、低量3组。注射液用生理盐水稀释，使0.1ml分别相当于50、10、2g/kg，分别静脉给药0.1ml，1次/天，连续7天。CTX则为0.1ml相当于30mg/kg。对照组给予等量生理盐水。

3、观测指标：接种肿瘤细胞后10天，无菌截取足趾称质量，按下列公式计算肿瘤抑制率：[(对照组存瘤足趾质量—给药组荷瘤足趾质量)/对照组荷瘤足趾质量]×100％。

4、结果

表9复方注射液对小鼠Lewis肺癌生长的抑制作用

组别         荷瘤足趾质量(m/g)         抑瘤率(％)

             复方注射液(mB/g.kg^-1)

50            0.350±0.05                57.1

10            0.402±0.03                48.8

2             0.501±0.02                38.9

CTX           0.120±0.03                85.4

对照          0.820±0.09                0

结果表明：复方注射液高、中、低剂量对肿瘤生长有较强抑制作用。实验例10  艾滋病辅助治疗实验例

1、材料：(1)复方注射液：珠海健心医药有限公司产品，0.9g/ml，20021205；(2)BALB/C小鼠：广州中医药大学提供。(3)人外周血：正常成人全血。(3)α-干扰素、白细胞介素-II：购自中国军事医学科学院。

2、方法

(1)对人T细胞作用试验方法：Ficoll常规方法分离人外周血淋巴细胞，花环沉淀法分离T淋巴细胞，加入不同剂量药物共同培养，用MTT法酶显色测定细胞增殖时代谢显色反应(波长570nm)。

(2)体内诱生白介素II的作用试验方法：按5mg/kg和30mg/kg给药，每日给小鼠腹腔给药，连续4天，停药后3天及6天取脾脏制成悬液(5×10细胞/ml)，培养24小时，加入H-TDR/uci/孔继续培养40小时，液闪仪计数，以CMP表示。

(3)体内诱生α-干扰素作用试验方法：小鼠腹腔注射不同剂量的药物，2小时后取血分离血清，2倍稀释96孔板L29细胞过夜，加水泡性口炎病菌毒(10-3/0.2ml)，继续培养48小时，镜下观察。标准干扰素作对照，当细胞对照孔细胞正常，病毒对照组出现病变时，取抑制病变50％的血清稀释度50％为干扰素滴度。

3、结果

(1)人T细胞激活作用实验：当培养液合复方注射剂干粉量为62.5-1000ug/ml时，人T淋巴细胞数量显著增加。见下表：

表10复方注射液对人T细胞激活作用

    复方注射(ug/ml)干粉            T细胞(DD值)

       0                           0.08±0.01

       62.5                        0.15±0.01

       125                         0.18±0.01

       250                         0.28±0.01

       500                         0.45±0.01

       1000                        0.78±0.01

(2)体内诱生白细胞介素II(IL-2)作用：复方注射液在小鼠体有较强诱生白细胞介素II的作用，见下表：

表11复方注射液诱生IL-2的作用(CMP)停药后天数       脾细胞上清          剂量(mg/kg)

             稀释倍数      0           5           20

              1∶2     450±200    1025±300    1600±400

3             1∶4     245±60     1500±500    5000±250

6             1∶2     700±180    1800±600    2801±540

              1∶2     800±50     1540±270    1650±215

(3)体内诱生干扰素作用实验：复方注射液在小鼠体内有诱生干扰素作用，且随药量增加可提高干扰素滴度。见下表：

表12复方注射液诱生干扰素的作用

 给药量mg/kg       60      30      15

 干扰素滴度        180     50      20

结果表明：复方注射液对人T细胞有显著激活作用、对白细胞介素II、干扰素有诱生作用。下列实施例均能实现上述实验例的效果。实施例1：巴戟天、淫羊藿提取

中药材巴戟天、淫羊藿进行前处理工序，从众多的杂乱药材中拣选上好的药材，而后用水多次清洗，除去沙土、泥垢，将淫羊藿切成1cm左右小段、60℃以下干燥；巴戟天60℃以下干燥后，粉碎成20目粗粉。然后用此净原料进行第二提取工序，巴戟天净原料依次用8、7、6倍量水分别提取1.5、1、1小时，提取液浓缩成相对密度至1.2时(50℃)，加入乙醇使含醇量达60％，回收乙醇，浓缩至相对密度1.1时，分次上聚酰胺柱吸附，用水和一种30％大极性溶剂洗脱，洗脱液混合回收烘干，再粉碎洗脱，浓缩过滤烘干，用溶媒溶解析结晶，在80℃以下真空干燥，得巴戟天提取物；淫羊藿净原料依次用15、10、10倍量水分别提取1.5、1、1小时，提取液浓缩成相对密度至1.2时(50℃)，加入乙醇使含醇量达70％，回收乙醇，浓缩至相对密度1.1时，分次上聚酰胺柱吸附，用水和一种35％大极性溶剂洗脱，洗脱液混合回收烘干，再粉碎洗脱，浓缩过滤烘干，用溶媒溶解析结晶，在80℃以下真空干燥，得淫羊藿提取物。实施例2：肌注制剂制备工艺

用实施例1所述方法得到的提取物，用水配制成溶液，滤棒粗滤、再用滤球和0.45滤膜过滤、灌封、115℃30分钟灭菌、用色水检漏、灯检、印字、然后包装入库；其中安瓿处理提前备好：用纯水粗洗、注射用水精洗、最后灭菌干燥，用于灌封，即得。实施例3：制成肌肉注射液

巴戟天370g  淫羊藿1000g

用实施例2所述方法制得1000支，肌肉注射液，每支2ml，每天2次，每次2支。

实施例4：制成雾化剂

巴戟天370g  淫羊藿1000g

用实施例1所述方法得到的提取物，用水配制成溶液，滤过，灌封，115℃30分钟灭菌，即得。制成雾化剂1000支，每支5ml，每日1次，每次2支。实施例5：制成冻干粉针剂

巴戟天370g  淫羊藿1000g

用实施例1所述方法得到的提取物，用水配制成溶液，滤过，分装，冷冻干燥，严密封口，即得。制成冻干粉针剂1000支，每天2次，每次2支，静脉注射。实施例6：制成静脉滴注剂

巴戟天370g  淫羊藿1000g

用实施例1所述方法得到的提取物，用水配制成溶液，滤棒粗滤、再用滤球和0.45滤膜过滤、灌封、115℃30分钟灭菌、用色水检漏、灯检、印字、然后包装入库；其中安瓿处理提前备好：用纯水粗洗、注射用水精洗、最后灭菌干燥，用于灌封，即得。制成静脉滴注剂1000支，每支2ml，每天1次，每次2支滴注。实施例7：制成口服片剂

巴戟天200g  淫羊藿500g

用实施例1所述方法得到的提取物，磨成细粉，过120目筛，加入适量淀粉，制成颗粒，加入硬脂酸镁适量，混匀，压制成口服片剂1000片，每天2次，一次2片。实施例8：制成胶囊剂

巴戟天200g  淫羊藿500g

用实施例1所述方法得到的提取物，磨成细粉，过120目筛，加入适量稀释剂，混合均匀，分装填入空胶囊，即得。制成胶囊剂1000粒，每天2次，一次2粒。实施例9：制成口服液制剂

巴戟天300g  淫羊藿1100g

用实施例1所述方法得到的提取物，用水溶解成溶液，滤过，灌装，加盖，115℃30分钟灭菌，贴签，即得。制成口服液1000支，每天2次，每次1支。