一种SARS冠状病毒荧光分子信标PCR检测技术

摘要

表面刺突蛋白(spike protein)是冠状病毒特征性的结构。此种SARS冠状病毒荧光分子信标PCR检测技术是在SARS－Cov的表面刺突蛋白基因区域设计一对基因扩增引物，PCR扩增片段长度约为140bp。在上下游引物中间设计一条荧光分子信标探针，探针的5’端标记荧光报告基团FAM，3’端标记荧光淬灭基团DABCYL，探针的5’端和3’端有6个碱基能反折互补，使荧光分子信标探针在游离状态下不发出荧光信号。此技术采用逆转录PCR的方法检测靶基因片段，适用于定性、定量检测呼吸道分泌物、血清、病检组织和各种排泄物等标本中的SARS－Cov RNA。荧光的检测可采用实时检测和终点检测两种方法。终点检测方法结果判定标准是：荧光值(Ax)≥2.5倍阴性对照荧光值(An)为阳性，而当Ax＜2.1An时为阴性。2.1An≤Ax＜2.5An为实验灰区，需重复实验进一步确认。