含有α－蒎烯和1,8－桉油精的蓝桉油的药物组合物及其用途

摘要

本发明提供一种含有α－蒎烯和1，8－桉油精的蓝桉油的药物组合物及其用途。药物组合物中蓝桉油主要含有α－蒎烯和1，8－桉油精，还含有药用稀释剂和药用添加剂。该药物组合物可以固体或半固体形式给药，还可以液体形式给药，其制剂可经口服、静脉内、局部给药。该药物组合物的制剂可用于治疗呼吸系统疾病如急性上呼吸道感染、急慢性支气管炎、慢性阻塞性肺病、肺结核、矽肺等痰多咳嗽时的祛痰止咳治疗以及呼吸系统疾病的急慢性炎症的治疗。

说明书

所属技术领域

本发明涉及蓝桉油的药物组合物，尤其涉及含有α-蒎烯和1，8-桉油精的蓝桉油的药物组合物及其用途，优选用于呼吸道疾病的祛痰止咳治疗。

背景技术

蓝桉油主要用作香料。药典^[1]所载的桉油来源于桃金娘科植物蓝桉Eucalyptus globulus Labill.樟科植物樟或上述两科同属其他植物经水蒸气蒸馏得到的挥发油，规定桉油精(C₁₀H₁₈O)含量不得少于70.0％。有祛风止痛之功效，用于皮肤瘙痒，神经痛。含桉油的食品如桉叶糖，还有含有桉油的中成药复方。专利(公开号CN 1298699A)《包含桉油和橙油的药物组合物》为桉油和橙油的药物组合物，用于治疗微生物引发的呼吸系统疾病。Morice等^[2]报道，桉油中的薄荷醇吸入给药对正常人由柠檬酸(枸橼酸)引起的咳嗽具有抑制作用。国内外未见从蓝桉油中制得的含有α-蒎烯和1，8-桉油精的组合物制成的制剂用于祛痰止咳药的报道。

发明内容

本发明的目的是提供一种含有α-蒎烯和1，8-桉油精的蓝桉油药物组合物，是取自桃金娘科植物蓝桉Eucalyptus globulus Labill.，经水蒸气蒸馏，再经重蒸馏，得到的挥发油，经分馏，收集60～80℃馏分，主要含α-蒎烯和1，8-桉油精的蓝桉油。

本发明提供的蓝桉油药物组合物，其蓝桉油中主要含有α-蒎烯和1，8-桉油精，还含有药用稀释剂和药用添加剂。

本发明提供的蓝桉油药物组合物，蓝桉油中含有α-蒎烯5～30％、1，8-桉油精为30～80％。

本发明提供的蓝桉油药物组合物中所用的稀释剂包括乙醇、表面活性剂、碳水化合物、和/或植物油。

本发明提供的蓝桉油药物组合物，其蓝桉油与稀释剂比例为0.1∶10至10∶0.1之间。

本发明提供的蓝桉油药物组合物，可以固体或半固体形式给药，包括软胶囊、胶丸、肠溶胶囊和液体明胶硬胶囊，优选软和硬明胶胶囊形式。还可以液体形式给药，包括混悬剂或乳剂。

本发明提供的蓝桉油药物组合物的制剂，可经口服、静脉内、局部给药，优选口服给药。

本发明提供的蓝桉油药物组合物的制剂，其中含蓝桉油按重量比在1～80％，优选2～60％。

本发明的另一个目的是该药物组合物的制剂在呼吸道疾病如急性上呼吸道感染、急慢性支气管炎、慢性阻塞性肺病、肺结核、矽肺等痰多咳嗽时的祛痰止咳方面的用途。

本发明具有以下优点：

1.本发明提取的药物组合物中蓝桉油是从桃金娘科植物蓝桉叶提取的含有

  α-蒎烯和1，8-桉油精组分的蓝桉油。

2.本发明提取的药物组合物中蓝桉油经药效学证明具有祛痰止咳和抗炎作

  用；

3.本发明提供的药物组合物，可用于治疗呼吸系统疾病如急性上呼吸道感

  染、急慢性支气管炎、慢性阻塞性肺病、肺结核、矽肺等痰多咳嗽时的祛

  痰止咳治疗以及呼吸系统疾病的急慢性炎症的治疗。

4.本发明提取的药物组合物作为祛痰止咳药，使用后有清凉之感，感觉舒适；

5.本发明提取的药物组合物毒性小，除轻度消化道反应外，无明显其它不良

  反应。

具体实施方式

本发明将结合具体实施例作进一步说明，这些实例仅用于说明目的，而不用于限制本发明范围。

实施例1  药学研究

1.生产工艺研究    水蒸气蒸馏法，提取挥发油。在常压下，分馏，收集60～80℃馏分的蓝桉油有效部位(称蓝桉油)。蓝桉油为无色或微黄色油状液，有特异香气，味辛、凉。相对密度为0.890～0.910，折光率为1.455～1.465。采用GC法测定，含量限度α-蒎烯应不少于20.0％、桉油素应不少于55.0％。软胶囊制剂：含量限度α-蒎烯应不少于12.0％、桉油素应不少于28.0％。

2.化学成分分析

(1)蓝按挥发油的化学成分分析

采用GC-MS测定，经化学成分分析主要含有α-蒎烯(α-pinene)7.9～13.05％、p-伞花烃(para-cymene)、桉油精(1，8-cineol)41.5～46.85％、γ-萜品烯(γ-terpinene)、α-萜品烯醇(α-terpineol)、蓝桉醇(globulol)、白干层醇(viriddiflorol)、α、β、γ-桉油醇(α、β、γ-eudesmol)等，挥发油有48个峰，保留时间到43min。

(2)蓝桉油化学成分分析

采用GC-MS检测，分析结果：主成分有α-蒎烯(α-pinene)25～30％、p-伞花烃(para-cymene)、桉油素(1，8-cineol)66～70％、γ-萜品烯(γ-terpinene)、α-萜品烯醇(α-terpineol)、蓝桉醇(globulol)等共有27个峰，保留时间22.85min以后基本未出现色谱峰。

实施例2    药效学研究：

1.蓝桉油对小鼠气道酚红排泄量的影响

利用酚红小鼠腹腔注射后部分从气道排泄的特点，测定小鼠气道酚红排泄量，以判断受试药对气道分泌液量的影响，以了解受试药的祛痰作用。

方法：小鼠，实验前饥饿16～18小时。蓝桉油在注射酚红前30min灌胃，然后腹腔注射1％酚红生理盐水溶液0.2ml/10g，注射后30min脱颈处死。剪开颈部皮肤、分离气管、用细塑胶管插入气管，用5％碳酸氢钠0.8ml，轻轻灌洗支气管三次，共计2.4ml。用波长546nm比色，与酚红标准曲线比较，算出酚红量。

结果：蓝桉油可增加小鼠气道酚红排泄量。(见表1)

表1  蓝桉油对小鼠气道酚红排泄量的影响

  组别                   n       酚红排泄量μg/ml

对照组                   18        4.99±0.98

蓝桉油    300mg/kg       16        6.31±1.98⁺

          100mg/kg       16        6.81±1.67^*

          30mg/kg        17        6.58±1.92^*

          10mg/kg        10        4.72±2.28

(与对照组比较+p＜0.05，*p＜0.01下表同)

结论:蓝桉油可增加小鼠气道酚红排泄量而稀释痰液，起到祛痰作用。

2.蓝桉油对豚鼠气道粘液粘蛋白的影响

气管粘液主要由杯细胞和粘液性腺细胞产生和分泌，内含粘蛋白，由粘多糖和蛋白质构成。测定粘蛋白的含量以反映蓝桉油对气道杯细胞和粘液性腺细胞分泌功能的影响。

方法：处死豚鼠，取出气管称重，剪开气管用棉棒取气管粘液，取出的粘液用1.5ml蒸馏水洗下，3000rpm离心15min，上清液待用。用咔唑法测定粘蛋白的含量。

结果：蓝桉油可增加豚鼠气道粘液粘蛋白的含量，表明蓝桉油对气道杯细胞和粘液性腺细胞分泌有促进作用。(见表2)

  表2 蓝桉油对豚鼠气道粘液粘蛋白的影响

组别                 n       粘蛋白含量mg/ml  对照组                 10       1.69±0.40   蓝桉油    100mg/kg     7        2.43±0.53^*

        30mg/kg      8        2.51±1.23

结论：蓝桉油可促进气道杯细胞和粘液性腺细胞分泌，表明蓝桉油具有祛痰作用。

3.蓝桉油对鸽气管纤毛运动的影响

从末梢细支气管到上部呼吸道粘膜上皮布满纤毛。通过纤毛的运动可使呼吸道液体、微粒、痰等向口腔方向运动，这对呼吸道异物的排除起重要作用。观察药物对鸽气管纤毛运动的影响，以了解蓝桉油的祛痰作用。

方法：鸽，体重250～350g，不麻醉背位固定，沿颈部中线切开，分离气管，在气管上做好2cm的标记，切开气管，暴露气管粘膜，稳定10～15min后，将软木颗粒放入气管2cm向心端的气管内，记录软木颗粒开始走至2cm末端所需的时间。观察给药前及给药后0.5h的走速，每次记录3～4粒软木颗粒的走速，求平均值。药物口腔内给药。

结果：蓝桉油能明显增快鸽气管纤毛运动速度。(见表3)

表3.蓝桉油对鸽气管纤毛运动的影响

                                 纤毛运动速度(s/2cm)

组别           n        用药前        用药后        差值  对照组(吐温80)   8     158.2±57.7   211.3±102.7   53.5±53.7  蓝桉油100mg/kg   8     161.6±82.5   133.3±48.7    -28.4±86.4⁺  蓝桉油30mg/kg    8     170.9±67.3   174.0±80.1    3.2±38.6⁺  蓝桉油10mg/kg    8     129.9±27.5   146.8±54.8    16.9±53.4

结论：蓝桉油能增快鸽气管纤毛运动速度而促进异物排出，表明蓝桉油具有祛痰作用。

4.蓝桉油对小鼠氨水引咳试验的影响

小鼠吸入刺激性化学药品后，刺激呼吸道感受器，反射性引起咳嗽。凡能降低呼吸感受器敏感性的药物，均有止咳作用。该实验观察蓝桉油对小鼠氨水引咳的止咳作用。

方法：将小鼠放入钟罩内，用超声雾化器雾化吸入氨水15秒，记录2min内咳嗽次数。

结果：蓝桉油对小鼠氨水引咳的咳嗽次数有明显的抑制作用。(见表4)

表4  蓝桉油对小鼠氨水引咳试验的影响组别            剂量               咳嗽次数

          (mg/kg)       n      (次/5min)对照                       25      11.2±5.0蓝桉油       100mg/kg      26      6.1±3.1^*

         30mg/kg       25      8.9±4.6

         10mg/kg       24      9.8±6.1可待因       30mg/kg       24      6.0±2.7^*

结论  蓝桉油对小鼠氨水引咳的咳嗽次数有明显的抑制作用，表明蓝桉油有镇咳作用。

5.蓝桉油对豚鼠枸橼酸引咳试验的影响

用枸橼酸溶液喷雾，刺激豚鼠呼吸道粘膜感受器，反射性引起咳嗽。该实验观察蓝桉油对豚鼠枸橼酸引咳的止咳作用。

方法：将豚鼠放入钟罩内，用超声雾化器雾化吸入17.5％枸橼酸1min，记录5min和10min内咳嗽次数。

结果：蓝桉油对豚鼠枸橼酸引咳的咳嗽次数有明显的抑制作用。(见表5)

      表5 蓝桉油对豚鼠枸橼酸引咳试验的影响

组别        剂量      n      咳嗽次数      咳嗽次数

          (mg/kg)            (次/5min)     (次/10min)对照                     14     14.93±7.15    32.36±13.64蓝桉油          100      15     10.80±4.11    23.53±5.96⁺

             30      16     10.19±5.11⁺  26.00±8.32

             10      14     14.28±4.70    30.07±8.89可待因           30      17     8.71±6.05⁺   23.65±12.44

结论：蓝桉油对豚鼠枸橼酸引咳的咳嗽次数有明显的抑制作用，表明蓝桉油有镇咳作用。

6.蓝桉油对大鼠SO₂吸入性慢性气道炎症的影响

方法：大鼠在熏箱内吸入SO₂气体(用5g亚硫酸钠加过量浓硫酸在反应罐中反应，产生的SO₂混合气体通入体积为45cm×25cm×10cm的熏箱内)30min，每周6d，共5周。大鼠吸入SO₂前30min灌胃给药。造模5周，大鼠处死后，在支气管分叉处结扎左肺做病理切片用，右肺行支气管肺泡灌洗，支气管肺泡灌洗液经离心后，沉淀计数细胞总数和细胞分类。

结果：

①蓝桉油对大鼠SO₂吸入性慢性气道炎症的BALF中细胞总数和分类的影响模型对照组支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞总数及中性粒细胞明显高于正常对照组，蓝桉油用药组可明显降低BALF中白细胞总数和中性粒细胞数(见表6)，表明蓝桉油对SO₂吸入性慢性气道炎症的细胞数增高有抑制作用。

表6  蓝桉油对SO₂吸入性慢性气道炎症的BALF中白细胞总数和分类的影响

组别      剂量      白细胞总数      巨噬细胞％      中性粒细胞％     淋巴细胞％

        (mg/kg)      10⁹/L模型对照组            20.31±8.27^#(9) 81.3±6.3^#(10) 5.1±2.6^#(10) 13.7±4.6^#(10)

蓝桉油    300     12.69±3.88⁺(8) 87.8±5.8⁺(8)  2.5±2.3⁺(8)  10.7±6.9(8)

蓝桉油    100     17.61±11.86(8)  83.5±12.0(8)    1.9±1.46(8)   10.6±1.8(8)

蓝桉油     30     19.19±25.13(5)  83.2±7.0(5)     3.8±2.0(5)    12.8±4.8(5)正常对照组            6.55±3.63(8)    90.1±3.2(8)     1.7±1.5(8)    8.1±2.4(8)

(与模型对照组比较+p＜0.05  *p＜0.01；与正常对照组比较#p＜0.05；( )动物数；下表同)

②蓝桉油对大鼠SO₂吸入性慢性气道炎症病理改变的影响

a.对大鼠SO₂吸入性慢性细支气管炎的影响

模型对照组细支气管炎、细支气管炎累积数的发生及严重程度比正常对照组明显增加，蓝桉油用药组细支气管炎、细支气管炎累积数的发生和严重程度比模型对照组明显降低(见表7)。

表7  蓝桉油对大鼠SO₂吸入性慢性细支气管炎的影响

                         细支气管炎                 细支气管炎

组别                 n  +++  ++   +   -    u值      累积数(％)模型对照组              10   4    2   4   0   2.65^☆☆   31.77±12.30^#

蓝桉油300mg/kg      8    1    0   6   1   1.98^*    16.48±14.83^*

蓝桉油100mg/kg      9    2    0   3   4   1.97^*    19.77±25.95

蓝桉油30mg/kg       5    2    1   2   0   0         16.36±8.77^*正常对照组              8    0    0   7   1             14.19±7.04

(与模型对照组比较*p＜0.05；与正常对照组比较#p＜0.05.##p＜0.01；Ridit检验^☆p＜0.05＝1.96＜u＜2.58，^☆☆p＜0.01＝u＞2.58；下表同)

b.对大鼠SO₂吸入性杯状细胞阳性细支气管数的影响

模型对照组的杯状细胞阳性细支气管数明显高于正常对照组，蓝桉油300mg/kg组可明显减少杯状细胞阳性细支气管数(见表8)。

表8  蓝桉油对大鼠SO₂吸入性慢性气道炎症杯状细胞的影响

                                   杯状细胞阳性

组别                n              细支气管数(％)模型对照组             10              15.23±7.8^##蓝桉油300mg/kg         8               7.23±3.96^**蓝桉油100mg/kg         9               10.65±5.88蓝桉油30mg/kg          5               18.37±14.29

正常对照组             8                0±0

结论：SO₂吸入性慢性气道炎症有典型的细胞数增高和炎症病理改变，蓝桉油可明显降低BALF中白细胞总数及中性粒细胞数和改善气道炎症的病理改变，表明蓝桉油有预防SO₂吸入伤模型的形成和治疗慢性气道炎症作用。

7.蓝桉油对大鼠LPS诱导的气道炎症的影响

方法：乙醚轻度麻醉大鼠，用耳镜插入喉口，以静脉套管针，随呼吸喉部张开时注入1mg/ml的脂多糖(LPS)0.2ml(200μg)。造模次日蓝桉油灌胃给药，用药3周。3周后处死大鼠，在支气管分叉处结扎左肺做病理切片用，右肺行支气管肺泡灌洗，BALF经离心后沉淀计数细胞总数和分类。

结果：

①蓝桉油对大鼠LPS诱导的气道炎症的BALF中细胞总数和分类的影响

模型对照组BALF中细胞总数明显高于正常对照组，蓝桉油用药组可明显降低BALF中白细胞总数。BALF中细胞分类以淋巴细胞增高明显，蓝桉油300mg/kg组可使淋巴细胞细胞数明显降低(见表9)。表明蓝桉油对LPS诱导的BALF中白细胞总数和细胞分类中淋巴细胞升高有抑制作用。

表9  蓝桉油对LPS诱导气道炎症的BALF中细胞总数和分类的影响组别mg/kg        白细胞总数10⁹/L      巨噬细胞％      中性粒细胞％    淋巴细胞％模型对照组       34.38±22.40^#(10)  78.2±7.1^#(10)  6.5±2.2^#(10)15.6±6.2^#(10)

蓝桉油  300  18.13±10.15⁺(10)  86.4±4.6⁺(10)  4.5±2.8(10)   9.0±4.1⁺(10)

蓝桉油  100  15.72±7.62⁺(10)   75.4±5.7(10)    6.4±3.3(10)   18.2±6.6(10)

蓝桉    30   14.44±3.57⁺(6)    74.0±9.1(9)     5.4±6.5(9)    20.6±8.6(9)正常对照组       6.79±3.92(9)       91.9±3.1(9)     0.9±0.8(9)    6.6±3.4(8)

②蓝桉油对LPS诱导的气道炎症病理学改变的影响  各组大鼠均有不同数量、不同程度的气管、支气管、细支气管炎及间质性肺炎，炎症细胞多以淋巴细胞为主，并有少量浆细胞、中性粒细胞、酸性粒细胞。气管、支气管未见典型的鳞状上皮化生，亦未见明显的乳头状增生等病变。少数气管、支气管可见柱状上皮脱落。根据炎症、上皮脱落程度将炎症分为“-、+、++、+++”四级，“-”即未见明显炎症细胞浸润，“+”少量炎症细胞浸润，气管结构完整。“+++”见大量炎症细胞浸润，并可出现管壁破坏及(或)上皮脱落。“++”界于“+”与“+++”之间。计数肺内细支气管总数(整个切面)，同时计数有炎症病变的细支气管数。间质性肺炎按肺泡壁及动脉管壁周围炎症细胞浸润的程度分为“-、+、++、+++”四级。

病理学检查表明模型对照组与正常对照组比较气管、支气管、细支气管的炎症发生和严重程度明显增加以及细支气管炎累积数亦增加，蓝桉油对气管、支气管、细支气管的炎症发生和严重程度有抑制作用(见表10，11)，细支气管炎累积数明显减少(见表11)，对LPS引起的肺间质炎亦有抑制作用(见表12)。

表10  蓝桉油对LPS诱导的气管炎和支气管炎的影响

                       气管炎                    支气管炎

组别mg/kg      n    +++  ++  +   -    u值    +++  ++  +   -    u值模型对照组        10    1    8   1   0  3.58^☆☆   3   7   0   0   3.72^☆☆

蓝桉油300     10    4    2   4   0  0         2   3   4   1   1.84

蓝桉油100     10    2    2   6   0  1.49      2   3   3   2   1.84

蓝桉油30      10    0    0   10  0  3.87^##   2   1   7   0   2.38^#正常对照组        10    0    1   2   7            0   1   2   7

表11  蓝桉油对LPS诱导的细支气管炎的影响组别                           细支气管炎             细支气管炎累积数(％)

               n    +++   ++   +    -    u值模型对照组        10     7    2    1    0  3.40^☆☆         46.17±15.57^##  蓝桉油300mg/kg  10     0    1    8    1  3.58^##      19.93±10.63^**  蓝桉油100mg/kg  10     4    1    4    1  1.67         34.13±10.89^*  蓝桉油30mg/kg   10     2    2    6    0  2.44^#       50.05±28.69正常对照组        10     1    0    2    7               5.49±9.57

表12  蓝桉油对大鼠LPS诱导的肺间质炎的影响

                               肺间质炎组别               N    +++  ++    +  -    u值模型对照组        10     5    3    2  0    3.69^☆☆蓝桉油300mg/kg    10     1    1    6  2    2.63^##蓝桉油100mg/kg    10     0    6    4  0    2.03^#蓝桉油30mg/kg     10     2    3    5  0    1.56正常对照组        10     0    0    3  7

结论：LPS气管内滴入可引起BALF中细胞数增高和炎症病理改变，蓝桉油可降低BALF中白细胞总数和细胞分类中淋巴细胞的增高，对炎症病理改变有抑制作用。表明蓝桉油可预防LPS诱导的气道炎症的发生和抑制严重程度。

实施例3  毒理研究

蓝桉油小鼠LD₅₀为1.716±0.148g/kg，95％可信限为1.5746～1.8707g/kg。根据WHO急性毒性分级，小鼠口服LD₅₀501～5000mg/kg属于低毒，蓝桉油属于低毒药物，低毒药物的人可能致死量250g。

实施例4  制剂

本发明提供的蓝桉油药物组合物，含有α-蒎烯、1，8-桉油精、稀释剂及药用敷料，其中含α-蒎烯5～30％、1，8-桉油精30～80％，优选含α-蒎烯不低于20％，1，8-桉油精不低于55％。

含有α-蒎烯和1，8-桉油精的蓝桉油可经静脉内、局部给药，但以口服给药为优选，用于祛痰止咳。该药优选以软和硬明胶胶囊形式，或以液体或半固体形式给药。以软胶囊为例：以明胶、甘油、水为囊材，尼泊金乙酯为防腐剂。蓝桉油是挥发油，对囊壳有渗出作用，因此，加入稀释剂(精制植物油)，蓝桉油与精制植物油的配比可为1∶5至5∶1，优选配比蓝桉油∶精制植物油为3∶2，无渗出作用。每个胶囊内含蓝桉油50～350mg，最佳量300mg。日服量10～30mg/kg体重。

蓝桉油还可以与乙醇、表面活性剂、碳水化合物或这些物质的混合物配备，制备成混悬剂或乳剂。其含蓝桉油的量按重量比在1～30％，最佳2～3％，混悬液，每ml含30mg，每次10ml，日服量30ml。乳剂，每100ml含2g，静脉注射100ml，每天1次。

本发明涉及的部分参考文献：

1.中华人民共和国药典·2000年版(一部)；p227

2.Morice AH.et al.Thorax，1994，49(10)：1024