用于构建T载体的DNA序列及用该序列制备T载体的方法

摘要

本发明涉及一种用于构建T载体的DNA序列、含有该序列的载体及其转化为T载体的方法。该DNA序列GGTGACCANNNNT/NNNNNTGG是限制性内切酶HphI和XcmI的识别序列串联体,两个该序列以反向重复方式插入自身不含XcmI识别位点的载体便得到一前T载体;在超过前T载体10摩尔浓度的外切酶竞争性底物的存在下,用内切酶XcmI过消化前T载体可得到成熟T载体。该方法得到的T载体对经A－tailing操作后的线性DNA片段的一系列克隆测试表明,其克隆效率可达95%甚至更高。这一结果表明该方法得到的T载体具有与目前已商品化的T载体相当甚至更好的克隆效率,而该方法操作简单且具普遍应用价值的优势是传统T载体制作方法无法相比的。