转人神经生长因子基因猪的制备方法

摘要

本发明公开了一种转人神经生长因子基因猪的制备方法。该方法包括如下步骤：a、构建靶向pNGF基因外显子的CRISPR/Cas9系统表达载体；b、构建提供hNGF基因的同源重组载体；c、将CRISPR/Cas9系统表达载体与hNGF基因的同源重组载体共转染猪耳成纤维细胞；d、转染后的猪耳成纤维细胞经筛选后，获得阳性细胞系，并通过体细胞克隆获得转人神经生长因子的转基因猪。本发明通过定点基因重组的方式，将hNGF基因插入猪pNGF基因位点，从而获得的转人神经生长因子基因猪，可以表达人神经生长因子而不表达猪神经生长因子，避免了在猪唾液中收集人源NGF时，其中还混有猪源NGF的现状，也避免其在用作药物治疗时的免疫原性问题，更加安全和有效。