CRISPR/Cas9双靶点靶向敲除目的基因载体构建方法

摘要

CRISPR/Cas9双靶点靶向敲除目的基因载体构建方法，包括以下步骤：通过以pLenti CRISPR‑E载体为基础，通过在线设计工具选择得分较高的靶位点设计引物，通过退火产生双链DNA，再经过连接转化将其构建到pLenti CRISPR‑E载体上，将载体转入受体细胞后，提取细胞DNA测序验证挑选出敲除效率较高的两个靶位点。本发明以pLenti CRISPR‑E载体为骨架，利用同源重组酶的原理，快速构建针对目标基因的双靶点CRISPR表达载体模型，本发明设计的双靶点CRISPR载体系统，可以应用于改造CRISPR单靶点的载体，从而提高打靶效率，实现多基因敲除，有很好的实用价值。