一种基于特有识别序列的T细胞受体库高通量测序文库构建及测序数据分析方法

摘要

本发明公开了一种基于特有识别序列的T细胞受体库高通量测序文库构建及测序数据分析方法。该方法针对TCR恒定区C区mRNA序列设计了特异性逆转录引物，逆转录获得cDNA，再于cDNA的3’端连接带有特有识别序列的文库构建接头；然后使用夹板连接法添加上带有特有识别序列的接头，利用带有标签的基因特异性引物在DNA聚合酶的作用下扩增出TCR基因重排序列；最后通过PCR扩增使DNA文库加上测序接头，从而制备高通量测序cDNA文库并用于测序。通过生物信息学对TCR基因多样性进行全面分析，可精确高效获得包含J区、D区和V区基因TCR基因的重排规律。本方法建库效率高，建库步骤少，所需RNA起始量低，建库成本低。