水貂肠炎细小病毒全基因组感染性克隆及其构建方法和应用

摘要

本发明提供了一种水貂肠炎细小病毒全基因组感染性克隆及其构建方法和应用。该方法是将MEV复制形式的完整基因组进行酶切，以分段的形式依次定向克隆到基于载体pUC18‑M，获得重组质粒。将重组质粒与转染试剂混合后转染CRFK细胞，可获得拯救病毒。本发明利用反向遗传技术构建的水貂肠炎细小病毒感染性克隆在体外转染CRFK细胞，能够诱导细胞产生与亲本病毒相同的细胞病变和生长趋势。该方法简单、快速、省时省力，与传统PCR方法相比具有更高的准确性，应用该克隆系统能够快速便捷地在MEV基因组任意位置进行碱基突变，从而为后续研发MEV的分子生物学研究和疫苗的研制提供了有效的途径和手段。