基于CRISPR/Cas9 SunTag系统抑制双生病毒侵染的载体及其构建和应用

摘要

本发明公开了一种基于CRISPR/Cas9 SunTag系统抑制双生病毒侵染的载体及其构建和应用，该方法利用搭载甲基转移酶DRM2的CRISPR/dCas9 Sun Tag系统，构建针对TYLCCNV和TYLCCNB特定区域的sgRNA，从而使得TYLCCNV和TYLCCNB特定区域被DRM2识别并被甲基化。为了增强识别和甲基化的效果，分别设计了三个sgRNA(g16/g17/g9A)靶标TYLCCNV和三个sgRNA(g1/g14/g9B)靶标TYLCCNB的甲基化敏感区域，并将三个sgRNA依次插入pEG302载体，从而得到可以定点靶标并进行甲基化修饰TYLCCNV的pEG302‑A和定点靶标并进行甲基化修饰TYLCCNB的pEG302‑β的抑制双生病毒侵染的载体。