一种内源性高表达miRNA的大肠杆菌胞外囊泡的制备方法

摘要

本申请属于细胞生物学技术领域，具体涉及一种内源性高表达miRNA的大肠杆菌胞外囊泡的制备方法。制备外囊泡时，具体包括：设计引物及PCR扩增、酶切、连接、转化、筛选和鉴定、重组载体的自连、连接目的miRNA、诱导目的miRNA表达和提取Evs等步骤。本申请以Lys‑tRNA的序列和pET‑31b(+)载体序列为基础，以特定miRNA为例，通过利用tRNA、rRNA的支架保护作用，重组构建了相关表达载体。初步实验结果表明，改造细菌较好实现了内源性、高效、大量表达功能性的miRNA的目的，同时较好实现了包含有miRNA的大肠杆菌Evs的高效收集，较好实现了以Evs作为miRNA载体的技术目标。