6-O-(4-二甲基氨基乙氧基)肉桂酰烟曲霉醇草酸盐的多晶型盐及其制备和使用方法

摘要

本公开部分涉及结晶形式的6-O-(4-二甲基氨基乙氧基)肉桂酰烟曲霉醇草酸盐。

说明书

相关申请的交叉引用

本申请要求2012年5月7日提交的美国临时序列第61/643,586 号的优先权，其在此通过引用以其整体并入。

背景

MetAP2编码蛋白质，该蛋白质至少部分通过从某些新转译的蛋 白质(诸如甘油醛-3-磷酸脱氢酶)酶促去除氨基末端甲硫氨酸残基起 作用(Warder等人(2008)J Proteome Res 7:4807)。MetAP2基因表达增 加在历史上一直与多种形式的癌症相关。抑制MetAP2酶活性的分子 已被鉴定并且已被开发用于治疗各种癌症类型(Wang等人(2003) Cancer Res 63:7861)和传染性疾病(诸如微孢子虫病、利什曼病和疟 疾)(Zhang等人(2002)J.Biomed Sci.9:34)。值得注意的是，在肥胖 和肥胖型糖尿病动物中，抑制MetAP2活性部分通过增加脂肪的氧化 和部分通过减少食物消耗导致体重减轻(Rupnick等人(2002)Proc Natl Acad Sci USA 99:10730)。

6-O-(4-二甲基氨基乙氧基)肉桂酰烟曲霉醇是METAP2抑制剂并 且可用于治疗如肥胖症。6-O-(4-二甲基氨基乙氧基)肉桂酰烟曲霉醇 特征为式I：

已经制备了6-O-(4-二甲基氨基乙氧基)肉桂酰烟曲霉醇的半草酸 盐的非晶形形式。然而，存在或制备结晶形式的6-O-(4-二甲基氨基 乙氧基)肉桂酰烟曲霉醇似乎未在本领域中公开。

多晶型现象是物质以多于一种晶格排列的形式结晶的能力。结晶 或多晶型现象可影响原料药的固态性质的许多方面。结晶物质可能显 著不同于非晶形形式，并且针对物质的不同晶体修饰可能与另一种修 饰在包括溶解度、溶解速率和/或生物利用度的许多方面显著不同。 通常，很难预测给定的化合物是否将形成各种结晶固态形式。甚至更 难于预测这些结晶固态形式的物理性质。此外，对于某些制剂(如适 于皮下使用的制剂)，具有结晶形式可能是有利的。

概要

在一个实施方案中，本文提供了包含结晶形式的6-O-(4-二甲基 氨基乙氧基)肉桂酰烟曲霉醇的半草酸盐的组合物。本文提供了结晶 形式的6-O-(4-二甲基氨基乙氧基)肉桂酰烟曲霉醇的半草酸盐及其水 合物，其特征在于粉末X-射线衍射图在约7.1度的2θ处具有特征峰， 或例如特征在于粉末X-射线衍射图在约4.7、7.1和13.4度的2θ处具 有特征峰，或例如特征在于粉末X-射线衍射图在约4.7、7.1、9.5、 12.9、13.4和16.8度的2θ处具有特征峰，或例如特征在于粉末X-射 线衍射图在约2.3、4.7、7.1、9.5、11.9、12.9、13.4、14.3、14.6、15.6、 16.8和20.3的2θ处具有特征峰，特征在于结晶图如图1或图2中所 示。在一些实施方案中，粉末X-射线衍射图可使用Cu Kα辐射获得。

在一个实施方案中，6-O-(4-二甲基氨基乙氧基)肉桂酰烟曲霉醇 半草酸盐可具有基本上与图7A中示出的图一致的¹H NMR光谱。

本文还提供了用于制备6-O-(4-二甲基氨基乙氧基)肉桂酰烟曲霉 醇半草酸盐的结晶形式(如，形式A)的方法，其包括：

a)制备6-O-(4-二甲基氨基乙氧基)肉桂酰烟曲霉醇的半草酸盐溶 液，如所述溶液可包含乙酸乙酯和庚烷；

b)加热所述溶液，如到约35至约55℃，如到约40℃，以基本上 或完全溶解6-O-(4-二甲基氨基乙氧基)肉桂酰烟曲霉醇；

c)调节温度使得固体从所述溶液中沉淀出来；以及

d)分离6-O-(4-二甲基氨基乙氧基)肉桂酰烟曲霉醇半草酸盐的结 晶形式。这样的一种包括调节温度的方法可包括冷却所述溶液到约 5℃或更低、或到约2℃至约10℃。

涵盖了包含本文提供的结晶形式和药学上可接受的赋形剂的药 物组合物，例如为适于皮下注射的混悬液制剂的组合物。本文提供了 包含至少可检测量的所提供的结晶形式的原料药。

还提供了治疗有需要的患者的肥胖症的方法，所述方法包括向患 者施用有效量的本文提供的结晶形式。本文还提供了治疗有需要的患 者的肥胖症的方法，其包括皮下施用包含6-O-(4-二甲基氨基乙氧基) 肉桂酰烟曲霉醇半草酸盐的所公开的结晶形式的组合物。

附图简述

图1描绘了实施例1的形式A的X-射线衍射图。

图2描绘了实施例2的形式A的X-射线衍射图。

图3描绘了通过实施例2制备的晶体形式(形式A)的FT-IR谱图。

图4描绘了通过实施例2制备的晶体形式(形式A)的FT-拉曼光 谱(FT-Raman spectrum)。

图5描绘了通过差示扫描量热法(DSC)和热重热分析(TGA)对形 式A(实施例2)的表征。

图6描绘了通过热重热分析(TGA)对形式A(实施例2)的表征。

图7A和B描绘了通过实施例2制备的溶解的晶体形式的NMR 光谱。

图8(A)是用作为实施例5原料的非晶态半草酸盐物质的显微照 片，和(B)是用作为实施例5原料的非晶态物质的X-射线衍射图。

图9是实施例5的形式B的X-射线衍射图。

图10描绘了通过实施例6制备的晶体形式(形式A)的FT-IR光 谱。

图11描绘了通过差示扫描量热法(DSC)和热重/差热分析(TGA) 对形式A(实施例6)的表征。

图12描绘了通过动态气体吸附仪(DVS)对形式A(实施例6)的表 征。

图13描绘了通过实施例7制备的晶体形式(形式A)的FT-IR拉 曼。

详述

本公开至少部分涉及结晶形式的6-O-(4-二甲基氨基乙氧基)肉桂 酰烟曲霉醇的半草酸盐及其水合物。本公开还提供了包含公开的 6-O-(4-二甲基氨基乙氧基)肉桂酰烟曲霉醇结晶盐和药学上可接受的 载体的药物组合物。术语“结晶形式”是指可使用诸如如X-射线粉末 衍射或拉曼光谱分析方法表征的晶体形式或修饰。例如，本文提供了 包含了至少可检测量的公开的结晶形式的6-O-(4-二甲基氨基乙氧基) 肉桂酰烟曲霉醇半草酸盐的原料药。

本文提供了结晶形式的6-O-(4-二甲基氨基乙氧基)肉桂酰烟曲霉 醇、半草酸盐，其特征在于粉末X-射线衍射图在约7.1度的2θ处具 有特征峰(在本文中是指“形式A”)。在一个实施方案中，所述结晶形 式的6-O-(4-二甲基氨基乙氧基)肉桂酰烟曲霉醇，特征在于粉末X- 射线衍射图在约2.3度的2θ处具有特征峰，或特征在于粉末X-射线 衍射图在约4.7度的2θ处具有特征峰，或特征在于粉末X-射线衍射 图在约7.1度的2θ处具有特征峰，或特征在于粉末X-射线衍射图在 约9.5度的2θ处具有特征峰，或特征在于粉末X-射线衍射图在约11.9 度的2θ处具有特征峰，或特征在于粉末X-射线衍射图在约12.9度的 2θ处具有特征峰，或特征在于粉末X-射线衍射图在约13.4度的2θ处 具有特征峰，或特征在于粉末X-射线衍射图在约14.3度的2θ处具有 特征峰，或特征在于粉末X-射线衍射图在约14.6度的2θ处具有特征 峰，或特征在于特征在于粉末X-射线衍射图在约15.6度的2θ处具有 特征峰，或特征在于粉末X-射线衍射图在约16.8度的2θ处具有特征 峰，或特征在于粉末X-射线衍射图在约20.3度的2θ处具有特征峰。 在另外的实施方案中，所述结晶形式特征在于粉末X-射线衍射图在 约4.7、7.1和13.4度的2θ处具有至少一个或多个特征峰。在又一个 实施方案中，所述结晶形式特征在于粉末X-射线衍射图在约4.7、7.1、 9.5、12.9、13.4和16.8度的2θ处具有至少一个或多个特征峰。在一 些实施方案中，所述结晶形式特征在于粉末X-射线衍射图在约2.3、 4.7、7.1、9.5、11.9、12.9、13.4、14.3、14.6、15.6、16.8和20.3度 的2θ处具有至少一个或多个特征峰。在该上下文中术语“约”意指2θ 的度量存在±0.5的不确定性(以2θ表示)。例如，设想的结晶形式具有 图1或图2中所示出的粉末X-射线衍射图。在一个实施方案中，结 晶形式的粉末X射线衍射图使用Cu Kα辐射获得。在其他的实例中， 设想的形式具有基本上与图7A或图7B中所示出的图一致的¹H NMR 光谱。

形式A 6-O-(4-二甲基氨基乙氧基)肉桂酰烟曲霉醇的结晶形式具 有在约1703、1603、1512、1250、1208、1171、1109、1056、986、 831cm^-1处具有至少一个或多个特征峰的IR吸收光谱。在该上下文 中，术语“约”意为cm^-1值可变化，如最多±5cm^-1。设想的结晶形式特 征在于IR吸收光谱如图3中所示。结晶形式的形式A 6-O-(4-二甲基 氨基乙氧基)肉桂酰烟曲霉醇具有在约3064、2966、2915、1704、1628、 1604、1575、1272、1203、1182cm^-1处具有至少一个或多个特征峰的 拉曼光谱。在该上下文中，术语“约”意为cm^-1值可变化，如最多±5 cm^-1。设想的结晶形式特征在于拉曼光谱如图4中所示。本文公开的 设想的结晶形式例如与6-O-(4-二甲基氨基乙氧基)肉桂酰烟曲霉醇的 非晶态游离碱和/或非晶态半草酸盐相比，可能基本上更稳定。例如， 公开的结晶形式(如，形式A)可贮藏在试剂和经济贮藏条件下同时保 持物理性质，使得可将其制备为剂型。在一个实施方案中，当混配在 药物制剂中时，如与如非晶形形式相比，如公开的结晶形式可具有改 良的化学和/或物理稳定性。

涵盖了水合物形式的结晶半草酸盐6-O-(4-二甲基氨基乙氧基)肉 桂酰烟曲霉醇，如半草酸盐6-O-(4-二甲基氨基乙氧基)肉桂酰烟曲霉 醇·(H₂O)_m，其中m是约0和约4之间的分数或整数(包含端值)。例如， 本文涵盖了一水合物或二水合物形式的结晶半草酸盐6-O-(4-二甲基 氨基乙氧基)肉桂酰烟曲霉醇。在一个实施方案中，公开的结晶半草 酸盐化合物可具有约3至约9重量百分比％的水含量。

本文还提供了用于制备结晶形式的半草酸盐6-O-(4-二甲基氨基 乙氧基)肉桂酰烟曲霉醇(如形式A)的方法，其包括：

a)制备6-O-(4-二甲基氨基乙氧基)肉桂酰烟曲霉醇的半草酸盐在 诸如如乙酸乙酯和/或庚烷中的溶剂的溶液；

b)将所述溶液加热以溶解所述6-O-(4-二甲基氨基乙氧基)肉桂酰 烟曲霉醇；

c)调节温度使得固体从所述溶液中沉淀出来；以及

d)分离所述结晶形式的半草酸盐6-O-(4-二甲基氨基乙氧基)肉桂 酰烟曲霉醇。在一个示例性实施方案中，所述溶液包含乙酸乙酯和/ 或庚烷。在另一个实施方案中，所述溶液另外包含水。其它设想的溶 剂包括乙腈、环己烷、甲醇、异丙烯基、甲基异丁基酮、己烷、甲苯 和/或四氢呋喃。在一些实施方案中，加热所述溶液包括将所述溶液 加热到约35℃至约55℃，如至约40℃。在另一个实施方案中，调节 温度包括将所述溶液冷却到约0℃至约10℃，如到约5℃。在一个实 施方案中，调节温度包括将所述溶液冷却到约5℃或更低、或到约2℃ 至约10℃。

设想的方法还可包括将6-O-(4-二甲基氨基乙氧基)肉桂酰烟曲霉 醇的现有晶体掺入溶液或用6-O-(4-二甲基氨基乙氧基)肉桂酰烟曲霉 醇的现有晶体接种溶液。例如，方法可包括用非晶态或结晶游离碱化 合物和草酸首先制备溶液，或可包括用非晶态或结晶半草酸盐 6-O-(4-二甲基氨基乙氧基)肉桂酰烟曲霉醇首先制备溶液。

在另一个实施方案中，提供了不同的结晶形式的6-O-(4-二甲基 氨基乙氧基)肉桂酰烟曲霉醇半草酸盐，特征在于粉末X-射线衍射图 在约2.2、6.8、9.1、16.1、18.4、20.7、23.1度的一个或多个位置的 2θ处具有特征峰(在本文中是指“形式B”)。在该上下文中术语“约”意 指2θ的度量存在±0.5的不确定性(以2θ表示)。例如，设想的结晶形 式具有图9中所示出的粉末X-射线衍射图。

方法

在某些实施方案中，本公开提供了通过施用有效量的公开的结晶 化合物(如半草酸盐6-O-(4-二甲基氨基乙氧基)肉桂酰烟曲霉醇(形式 A))治疗和或缓解有需要的患者的肥胖症的方法。本文还提供了用于 诱导由需要的患者体重减的方法，所述方法包括施用公开的结晶化合 物。

其它设想的治疗方法包括通过将本文公开的结晶施用给受试者 来治疗或缓解肥胖症相关的疾患或共病的方法。例如，本文涵盖了用 于治疗有需要的患者的2型糖尿病的方法和/或治疗罹患糖尿病的患 者的其它设想的疾病或病症的方法。

可通过公开的化合物治疗的示例性共病或其它病症可包括心脏 病症、内分泌病症、呼吸病症、肝病症、骨骼病症、精神病症、代谢 病症、代谢病症及生殖病症。

示例性心脏病症包括高血压、血脂异常、缺血性心脏疾病、心肌 病、心肌梗赛、中风、静脉血栓栓塞性疾病及肺动脉高压。示例性内 分泌病症包括2型糖尿病和成人隐匿性自身免疫性糖尿病。示例性呼 吸病症包括肥胖症低通气综合征、哮喘及阻塞性睡眠性呼吸暂停。示 例性肝病症是非酒精性脂肪肝病。示例性骨骼病症包括背部疼痛和包 括背痛和负重关节的骨关节炎。示例性代谢病症包括普瑞德-威利综 合征和多囊卵巢综合征。示例性生殖病症包括性功能障碍、勃起机能 障碍、不孕症、产科并发症及胎儿异常。示例性精神病症包括体重相 关的抑郁和焦虑。

特别是，在某些实施方案，本公开提供了治疗上述医学适应症的 方法，所述方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量的本文所述的 化合物。在某些其它实施方案中，提供了治疗有需要的患者的肥胖症 的方法，其包括皮下施用包含公开的结晶形式的6-O-(4-二甲基氨基 乙氧基)肉桂酰烟曲霉醇草酸盐(形式A)的组合物。

肥胖症或提及“超重”是指与瘦体重相比的脂肪过量。过量脂肪堆 积与脂肪组织细胞的大小(肥大)和数量(增生)的增加相关。依据绝对 体重、体重：身高比例、皮下脂肪分布及社会和审美规范多方面地测 量肥胖症。体脂的常见量度是体重指数(BMI)。所述BMI是指体重(以 千克表示)与身高(以米表示)的平方的比值。体重指数可使用下式精确 计算：体重(kg)/高度²(m²)(SI)或703X体重(lb)/高度²(in²)(US)。

根据美国疾病控制和预防中心(CDC)，超重成人的BMI为 25kg/m²至29.9kg/m²，并且肥胖成人的BMI为30kg/m²或更大。40 kg/m²或更大的BMI表明病态肥胖或极度肥胖。肥胖症还可以是指具 有约102cm(对于男性)和约88cm(对于女性)的腰围的患者。对于儿 童而言，超重和肥胖的定义考虑到年龄和性别对体脂肪的作用。具有 不同遗传背景的患者可能在与上述一般准则不同的水平上被认为是 “肥胖的”。

施用

本文公开的结晶化合物可用作如以用于经肠、胃肠外或局部施用 的药物制剂的形式的药物，并且本文公开的设想的方法可包括经肠 (如，经口)、胃肠外或局部施用公开的结晶化合物。

组合物

本公开的另一个方面提供药物组合物，其包含与药学上可接受的 载体一起配制的如本文所公开的化合物。具体地说，本公开提供药物 组合物，其包含与一种或多种药学上可接受的载体一起配制的如本文 所公开的化合物。这些制剂包括那些适用于经口、经直肠、局部、经 颊、经眼、胃肠外(如，皮下、肌内、皮内或静脉内)经直肠、经阴道 或气雾剂施用的制剂，尽管在任何给定的情况下大部分适合形式的施 用将取决于正在治疗的疾患的程度和严重性，及正在使用的具体化合 物的性质。例如，可以将公开的组合物配制为单位剂量，和/或可以 配制公开的组合物用于经口施用或皮下施用。

本发明的示例性药物组合物可以药物制剂的形式使用，例如以固 体、半固体或液体形式，所述药物制剂含有与适于如胃肠外(皮下或 静脉内)施加的有机或无机载体或赋形剂混合的作为活性成分的一种 或多种本发明化合物。例如，可以将所述活性成分与通常无毒、药学 上可接受的载体混合用于片剂、丸剂、胶囊、栓剂、溶液、乳剂、混 悬剂、以及适合于使用的任何其它形式。活性主题化合物以足够对所 述方法或所述疾病的疾患产生所希望的作用的量包括于所述药物组 合物中。

为了制备固体组合物(诸如片剂)，可以将主要活性成分与药物载 体(如，常规压片成分诸如玉米淀粉、乳糖、蔗糖、山梨糖醇、滑石、 硬脂酸、硬脂酸镁、磷酸氢钙或树胶)和其它药用稀释剂(如水)混合以 便形成含有本发明化合物或其无毒的药学上可接受的盐的均匀混合 物的固体预配制组合物。当提及这些均匀的预配制混合物时，意指所 述活性成分被均匀地分散于整个组合物以使得可以容易地将所述组 合物细分成同样有效的单位剂型(诸如片剂、丸剂和胶囊)。

在用于经口施用的固体剂型(胶囊、片剂、丸剂、糖锭剂、粉末、 颗粒等)中，将所述主题组合物与一种或两种药学上可接受的载体(诸 如柠檬酸钠或磷酸氢钙)和/或以下中的任何一项进行混合：(1)填充剂 或增充剂，诸如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和/或硅酸；(2) 粘合剂，诸如，例如羧甲基纤维素、藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、 蔗糖和/或阿拉伯胶；(3)湿润剂，诸如甘油；(4)崩解剂，诸如琼脂、 碳酸钙、马铃薯或木薯淀粉、藻酸、某些硅酸盐及碳酸钠；(5)溶液 延迟剂，诸如石蜡；(6)吸收加速剂，诸如季铵化合物；(7)润湿剂， 诸如，例如鲸蜡醇和单硬脂酸甘油酯；(8)吸收剂，诸如高岭土和膨 润土；(9)润滑剂，诸如滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、 月桂基硫酸钠及其混合物；以及(10)着色剂。在胶囊、片剂及丸剂的 情况下，所述组合物还可以包含缓冲剂。在使用赋形剂诸如乳糖或乳 糖以及高分子量聚乙二醇等的软填充和硬填充的明胶胶囊中还可以 采用类似类型的固体组合物作为填充剂。

可以任选地与一种或多种辅助成分通过压制或模制来制备片剂。 可以使用粘合剂(例如，明胶或羟丙基甲基纤维素)、润滑剂、惰性稀 释剂、防腐剂、崩解剂(例如，淀粉乙醇酸钠或交联羧甲基纤维素钠)、 表面活性剂或分散剂来制备压缩片剂。可以通过在适合的机器中模制 用惰性液体稀释剂湿润的所述主题组合物的混合物来制备模制片剂。 可以任选地用包衣和壳(诸如肠溶包衣和药物配制领域熟知的其它包 衣)来刻痕或制备片剂和其它固体剂型(诸如糖锭剂、胶囊、丸剂和颗 粒剂)。

除所述主题组合物之外，混悬剂还可含有助悬剂，诸如，例如乙 氧基化异十八醇、聚氧乙烯山梨醇和脱水山梨糖醇酯、微晶纤维素、 偏氢氧化铝、膨润土、琼脂以及黄芪胶及其混合物。例如，可用粒度 为直径小于约200nm的化合物形成适用于静脉内施用的悬浮剂。

用于经直肠或经阴道施用的制剂可以作为栓剂存在，可以通过将 主题组合物与一种或多种适合的无刺激性赋形剂或载体(包括，例如， 可可脂、聚乙二醇、栓剂蜡或水杨酸酯)混合来制备所述栓剂，并且 所述栓剂在室温下是固体，但在体温下是液体并因此在体腔中将会熔 化并且释放所述活性剂。

用于经皮施用主题组合物的剂型包括粉剂、喷雾剂、软膏剂、糊 剂、乳膏剂、洗剂、凝胶剂、贴剂以及吸入剂。可以在无菌条件下将 所述活性组分与药学上可接受的载体，和与可能必需的任何防腐剂、 缓冲剂或推进剂进行混合。

除主题组合物之外，所述软膏、糊剂、乳膏和凝胶可以包含赋形 剂，诸如动物和蔬菜脂肪、油、蜡、石蜡、淀粉、黄芪胶、纤维素衍 生物、聚乙二醇、硅酮、膨润土、硅酸、滑石以及氧化锌或其混合物。

除主题组合物之外，粉末和喷雾剂可以包含赋形剂如乳糖、滑石、 硅酸、氢氧化铝、硅酸钙以及聚酰胺粉末、或这些物质的混合物。喷 雾剂可以额外地包含常规推进剂，诸如氯氟烃和挥发性未取代的烃 (诸如丁烷或丙烷)。

适用于胃肠外施用的本发明药物组合物包括主题组合物与以下 的一种或多种的组合：药学上可接受的无菌等渗非水性溶液、分散液、 混悬液或乳液、在使用之前即可被复溶成无菌可注射溶液或分散液的 无菌粉末，它们可以含有抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂、使所述制剂与 预期的接受者的血液等渗的溶质，或悬浮剂或增稠剂。

本发明药物组合物中可采用的适合的非水性载体的实例包括多 元醇(诸如甘油、丙二醇、聚乙二醇等)、及其适合混合物、植物油(诸 如橄榄油)、和可注射的有机酯(诸如油酸乙酯)以及环糊精。可以保持 适当的流动性，例如，通过使用包衣材料(诸如卵磷脂)、在分散液的 情况下通过保持所要求的颗粒大小以及通过使用表面活性剂。例如， 可将本文提供的结晶形式研磨以获得特定粒度，并且在至少一些实施 方案中，当研磨时此类结晶形式可基本上保持稳定。

例如，本文提供了适用于皮下施用的组合物，所述组合物包含了 公开的结晶形式的悬浮液。皮下施用可能比静脉内施用更加有利，其 通常需要医生随访并可是更加疼痛和侵袭性的。当向患者施用时，结 晶化合物的典型剂量可为约1mg至约5mg化合物。

实施例

可基于本文含有的教导和本领域已知的的合成程序，以多种方式 制备本文描述的化合物。

使用配备有X'Celerator检测器的PANalytical X’Pert Pro衍射仪， 获得X-射线粉末衍射(XRPD)数据。使样品在零背景硅支撑物上变平， 并将其在环境条件下制备后立即运行。在Cu Kα放射源和 发电机功率为45kV和40mA时，使用2°至40°的连续2-θ扫描范围。 使用0.0167度/2-θ步骤的步长，并将样品以30rpm旋转。

在4cm^-1的分辨率下使用来自Nd:YVO4激光(λ＝1064nm)激发， 将拉曼光谱记录在Nicolet NXR 9650FT-拉曼光谱仪上。

将DSC热谱图记录在TA仪器Q1000示差扫描热量计上。将样 品称入铝盘中、将盘盖放置于顶部并轻微弯曲而不密封盘。使用 15℃/min的加热速率进行实验。

将TGA热谱图记录在TA仪器Q5000热重分析仪上。将样品称 入铝盘中，并使用15℃/min的加热速率进行实验。

在500MHz Varian Unity Inova NMR光谱仪上，获得1D 1H NMR 光谱。将样品在DMSO-d6中制备，并且是指0.00ppm处的TMS。

在具有Dionex AS11HC 250x4mm分析柱和Dionex ASRS 300抑 制子的Dionex ICS-3000上进行离子色谱。在等梯度条件下，使用20  mM NaOH流动相和1mL/min的流动速率进行分析。将样品和标准 品的水溶液以10μL的固定体积注射。

实施例1

结晶，如下制备6-O-(4-二甲基氨基乙氧基)肉桂酰烟曲霉醇半草 酸盐的形式A物质：

将大约18mg(0.037mmol)6-O-(4-二甲基氨基乙氧基)肉桂酰烟 曲霉醇(游离碱)与乙腈/庚烷混合物(1:4,400μL)和草酸(于THF中的 3M，6.1μL，0.5当量)合并。蒸发溶剂，得到结晶形式A。

对固体晶体(形式A)进行XRPD分析。图1显示了XRPD。

实施例2

如下扩大结晶，6-O-(4-二甲基氨基乙氧基)肉桂酰烟曲霉醇半草 酸盐的形式A物质：

将6-O-(4-二甲基氨基乙氧基)肉桂酰烟曲霉醇(游离碱)(1.2g,2.4 mmol)与乙酸乙酯(5mL)、庚烷(10mL)及水(200uL)在30-mL反应容 器中合并。将草酸于THF中的3M溶液(405uL,1当量)以滴加的方式 添加，这导致了迅速沉淀。将混合物用形式A晶体接种，并且将悬 浮液在室温下搅拌5分钟、加热至40℃30分钟及以2℃/分钟的速率 冷却至5℃。在5℃下搅拌约2小时后，将浆料在氮气下在维持于5℃ 下的带夹套的布氏漏斗(Buchner funnel)中过滤。将固体用庚烷(2mL) 洗涤，在室温下经空气干燥两天，得到形式A(1.15g，81％产率)。形 式A物质的特征在于XPRD、FT-拉曼和FT-IR，并且显示与其它形 式A物质一致。在约100℃下校正了产物的体重减轻后，所述产物通 过离子色谱法含有7.9％w/w草酸盐，这与半草酸盐化学计量一致。

结晶物质(形式A)的XRPD图、FT-IR谱图、FT-拉曼光谱、DSC 际线和TGA曲线分别描述于图2、图3、图4、图5和图6中。

形式A特征XRPD峰(图2)可见于表1中，并且形式A的特征 FT-IR吸收带(图3)和FT-拉曼带(图4)可分别见于以下表2和3中。

表1

表2

FT-IR吸收带，cm^-1831 986 1056 1109 1171 1208 1250 1512 1603 1703

表3

FT-拉曼带，cm^-11182 1203 1272 1575 1604 1628 1704 2915 2966 3064

结晶物质(形式A)的¹H NMR谱图描述于图7A(无D₂O尖峰)和图 7B(具有D₂O尖峰)中。结晶物质(形式A)的样品的特征¹H NMR峰如 下：

图7A：(δ,ppm)7.706,7.688,7.650,7.618,7.019,7.001,6.508, 6.476,5.624,5.620,5.203,4.250,4.239,4.228,3.639,3.633,3.616, 3.611,3.305,3.068,3.058,3.047,2.890,2.881,2.616,2.607,2.592, 2.579,2.525,2.503,2.203,2.189,2.177,1.935,1.912,1.716,1.620, 1.103。

图7B：(δ,ppm)7.705,7.687,7.649,7.617,7.024,7.007,6.505, 6.473,5.627,5.623,5.204,4.250,4.239,4.228,3.639,3.634,3.616, 3.611,3.524,3.305,3.086,3.075,3.065,2.892,2.883,2.618,2.609, 2.595,2.583,2.538,2.512,2.203,2.190,2.177,1.936,1.914,1.845, 1.840,1.717,1.620,1.104。

实施例3

结晶，如下制备6-O-(4-二甲基氨基乙氧基)肉桂酰烟曲霉醇半草 酸盐的形式A物质：

将大约168mg(0.337mmol)6-O-(4-二甲基氨基乙氧基)肉桂酰烟 曲霉醇(游离碱)与乙腈/庚烷混合物(1:4,1.5mL)和草酸(于THF中的 3M，56.1μL，0.5当量)合并(注意：所述溶剂混合物是双相的)。观 察到形式A的种子溶解于混合物中。通过反复蒸发至干燥并重新悬 浮于数种溶剂和溶剂混合物中，循环所得混合物数次，试图产生自由 流动的结晶物质。在40℃下蒸发至干燥后，将样品溶解于乙酸乙酯 (500μL)中，并通过庚烷(1mL)沉淀。将浑浊混合物在室温下搅拌ca.2 小时。向所得浆料，添加乙酸乙酯(50μL)并将样品在室温下搅拌过夜。 第二天，将样品加热至40℃达2小时，然后以0.1℃/min冷却至5℃。 产生白色结晶物质(71mg)。产物的FT-拉曼和XRPD数据与形式A一 致。

实施例4

结晶，如下制备6-O-(4-二甲基氨基乙氧基)肉桂酰烟曲霉醇半草 酸盐的形式A物质：

将大约123mg(0.245mmol)6-O-(4-二甲基氨基乙氧基)肉桂酰烟 曲霉醇(游离碱)与乙酸乙酯(500μL)合并。以滴加的方式添加草酸于 THF中的3M溶液(40.9μL，0.5当量)，这导致了迅速沉淀。在添加 了形式A种子晶体(来自实施例3)之后，添加乙酸乙酯并将所得浆料 搅拌过夜、在40至5℃之间热循环。观察到白色非晶态沉淀，但添 加水(20μL)产生了溶液。缓慢添加庚烷直至所述混合物是浑浊的(总 庚烷体积是1.3mL)。添加了额外的形式A晶体种子，并将浆料冷却 超过17小时(搅拌至5℃)。获得了结晶物质的自由流动的浆料。在分 离前和在维持在室温下，观察到沉淀变得粘稠。当冷却至5℃时，粘 稠沉淀回返为自由流动的浆料。将样品快速过滤并使得其风干。产物 的XRPD图与形式A一致。

实施例5

如下制备结晶，6-O-(4-二甲基氨基乙氧基)肉桂酰烟曲霉醇半草 酸盐的形式B物质：

将大约10mg非晶态6-O-(4-二甲基氨基乙氧基)肉桂酰烟曲霉醇 半草酸盐化合物(参见图8A和8B的对非晶态物质的表征)称重于 2-mL小瓶中，并悬浮于甲苯(100uL)中。将悬浮液加热至50℃，并 搅拌17小时。所述等温浆料得到当分离时外观经历了从透明到白色 半胶粘粉末变化的为玻璃状固体的结晶形式B。

对固体晶体(形式B)进行XRPD分析，并且所述衍射峰表明一些 结晶度。所述XRPD显示于图9中，并且所述特征XRPD峰见于下 表4中。

表4

相对于形式A，观察到形式B是亚稳态的。

实施例6

如下制备结晶，6-O-(4-二甲基氨基乙氧基)肉桂酰烟曲霉醇半草 酸盐的形式A物质：

将大约15mg非晶态6-O-(4-二甲基氨基乙氧基)肉桂酰烟曲霉醇 半草酸盐化合物(参见图8A和8B对非晶态物质的表征)称重于2-mL 小瓶中，并悬浮于庚烷(500uL)中。将所得浆料在室温下搅拌15分钟， 并且添加形式B种子晶体。将浆料在室温下搅拌4天。过滤后，提 供为自由流动的白色粉末的形式A(与形式B种子晶体不同的XRPD 图)。

图10描绘了结晶物质(形式A)的FT-IR谱图。图11描绘了结晶 物质(形式A)的DSC/TGA际线。将结晶物质(形式A)的DVS等温曲 线描述于图12中。

实施例7

如下将结晶，6-O-(4-二甲基氨基乙氧基)肉桂酰烟曲霉醇半草酸 盐的形式A物质放大：

将大约76mg非晶态6-O-(4-二甲基氨基乙氧基)肉桂酰烟曲霉醇 半草酸盐化合物(参见图8A和8B对非晶态物质的表征)悬浮于4-mL 小瓶中的庚烷(2mL)中。将所得浆料在室温下过滤10分钟，并用形 式A晶体(ca.1mg)接种。将浆料在室温下搅拌3天。过滤后，得到 结晶白色粉末(52mg，68％产率)。XPRD图匹配图2中所示。

结晶物质(形式A)的FT-拉曼光谱描述于图13中。

实施例8

用非晶态和结晶形式进行挑战稳定性研究。将样品储存在密封的 小瓶中，并贮存在室温(25℃)和40℃下。在不同时间点将样品用稳定 性表明的HPLC测定。测定保留的效能，并观察物理描述。结果示于 表5中：

表5

通过引用并入

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等效方案

尽管已经讨论了主题化合物的具体实施方案，但以上说明书是说 明性的而非限制性的本发明的许多变化将对阅读了本说明书的本领 域技术人员显而易见。本发明的整体范围应参考连同其等效方案的整 体范围的权利要求及连同此类变化的本说明书来确定。

除非另外指出，否则表达说明书和权利要求中使用的成分、反应 条件等的量的所有数字应理解为在所有情况中被术语“约”修饰。因 此，除非指出有相反的情况，否则说明书和所附权利要求中阐述的数 值参数是近似值，其可根据本发明寻求获得的所需性质而变化。