山腊梅提取物在制备治疗神经系统性疾病和肌无力疾病的药物中的用途

摘要

本发明涉及提供一种山腊梅提取物的新用途，山腊梅提取物在制备治疗神经系统性疾病和肌无力疾病的药物中的用途；具体为山腊梅提取物在制备治疗老年痴呆、脑卒中、精神分裂症、重症肌无力、进行性肌营养不良的药物中的用途；在上述用途中，山腊梅提取物通过溶剂提取得到，其溶剂为乙醇、蒸馏水或石油醚。该山腊梅提取物能有效改善患者上述疾病的症状，其疗效确切、副作用少。

说明书

技术领域

本发明涉及山腊梅提取物的新用途，特别涉及山腊梅提取物在制 备治疗神经系统性疾病和肌无力疾病的药物中的用途。

背景技术

神经系统性疾病为发生于中枢神经系统、周围神经系统、植物神 经系统的以感觉、运动、意识、植物神经功能障碍为主要表现的疾病； 其包括老年痴呆、脑卒中、精神分裂症、抑郁症等。

其中，老年痴呆是一种起病隐匿的进行性发展的神经系统退行性 疾病。临床上以记忆障碍、失语、失用、失认、视空间技能损害、执 行功能障碍以及人格和行为改变等全面性痴呆表现为特征，病因迄今 未明。随着人口的老龄化，其发病率逐年上升，严重危害老年人的身 心健康和生活质量，已成为严重的社会问题，引起各国政府和医学界 的普遍关注。目前主要由以下几种治疗药物：如干扰Aβ形成和沉积 的药物；胆碱能类药物；谷氨酸受体调控剂；影响自由基代谢的药物 以及脑代谢调节剂等。其中胆碱能类药物中，乙酰胆碱递质的减少与 记忆损害有关，因而增加中枢神经系统胆碱能神经递质的含量对该病 有改善作用；应用乙酰胆碱酯酶抑制剂能抑制胆碱酯酶的活性，减少 其水解作用，增加脑内神经突触间乙酰胆碱的含量。目前广泛治疗老 年痴呆症的药物如多奈派齐、利凡斯的明、加兰他敏等。

脑卒中是一种突然起病的脑血液循环障碍性疾病是指在脑血管疾 病的病人，因各种诱发因素引起脑内动脉狭窄，闭塞或破裂，而造成 急性脑血液循环障碍，临床上表现为一过性或永久性脑功能障碍的症 状和体征。脑卒中是当前老年人致残致痴的主要原因之一，据WHO公 布的资料,在57个国家中，有40个国家把卒中的死亡率列入了前三 位，其中在日本和中国卒中的死亡率已占首位；而缺血性脑卒中占脑 卒中病人总数的60％-70％。目前临床常用治疗策略包括：溶栓剂、神 经保护剂以及干细胞疗法，但是由于上述治疗策略中药物的副作用或 方法中存在的免疫排斥等问题，对脑卒中的治疗策略仍亟待研究。

精神分裂症是一组病因未明的功能性的精神疾病，多在青壮年缓 慢或亚急性起病，临床上往往表现为症状各异的综合征，涉及感知觉、 思维、情感和行为等多方面的障碍以及精神活动的不协调。精神分裂 症起病早，对患者的认知、生活和社会功能带来严重影响，给患者家 庭造成沉重负担，并可能引发许多社会问题。

抑郁症是情感性精神障碍的主要类型，是一种以显著而持久的心 境低落为主要临床特征的综合症，其主要表现为情绪低落、言语减少、 精神运动迟缓，常自责、自罪甚至企图自杀等。随着社会竞争的加剧， 抑郁症已成为现代社会的常见病，高发病，其发病率迅速攀升。抑郁 发作往往有复发倾向。因此，治疗目的有二：控制急性发作和预防复 发。目前，临床上用来治疗抑郁症的一线药物主要是三环类抗抑郁药 (TCAS)，但这类药物大多有高血压危象、急性黄色肝萎缩等严重不 良反应，所以寻找出一类副作用低，治疗效果好的药物有重要的意义。

针对上述各类神经系统类的疾病，现有的施用药物或方法大多存 在不理想的情况，如能研发出一种有效的治疗药物来改善患者的病症， 是具有重大意义的。

重症肌无力是一种由神经-肌肉接头处传递功能障碍所引起的自 身免疫性疾病，临床主要表现为部分或全身骨骼肌无力和易疲劳，活 动后症状加重，经休息后症状减轻。患病率为77～150/100万，年发 病率为4～11/100万。女性患病率大于男性，约3：2，各年龄段均有 发病，儿童1～5岁居多。随着人们对重症肌无力发病机制研究的深入， 虽取得了巨大进展，但至今尚无公认的标准治疗方案。

进行性肌营养不良症是一组由遗传因素所致的原发性骨骼肌疾 病，其临床主要表现为缓慢进行的肌肉萎缩，肌无力及不同程度的运 动障碍。本病可由多种遗传方式引起，其临床表现各具有不同的特点， 因而形成许多类型。该病迄今尚无特效的治疗方法，因此，研发出一 种可以治疗进行性肌营养不良症的药物具有重大意义。

山腊梅为蜡梅科Calycanthaceae植物山腊梅Chimonanthus nitens  Olive的叶，生产于安徽、江西等地。山腊梅性凉、味辛微苦，具有解 表祛风、清热解毒之功效，对于防止感冒、流行性感冒有良好的疗效。 如许文跃等报道了以腊梅叶为主的腊梅止咳露，对外感风热型咳嗽、 久咳剂慢性支气管炎有良好疗效；李萍等人通过体内抗菌试验髁体外 抗菌试验发现山腊梅叶对金黄色葡萄球菌和多种细菌均有抑制作用， 同时还证明有抗炎解热，免疫增强的作用。以上研究表明山腊梅具有 抑菌、抗炎、抗流感病毒和免疫增强的作用，但山腊梅提取物用于治 疗神经系统性疾病、肌无力和进行性肌营养不良的用途，尚未见有相 关报道。

发明内容

本发明所解决的技术问题是提供一种山腊梅提取物的新用途，山腊 梅提取物在制备治疗神经系统性疾病和肌无力疾病的药物中的用途。

本发明提供的技术方案之一为山腊梅提取物在制备治疗老年痴 呆、脑卒中、精神分裂症、重症肌无力、进行性肌营养不良的药物中 的用途。在此类药物的用途中，山腊梅提取物具有抑制乙酰胆碱酯酶 的作用而起到相应的治疗效果。

本发明的用途中，山腊梅提取物通过溶剂提取得到，其溶剂为乙 醇、蒸馏水或石油醚。

本发明进一步提供了优选方案，溶剂为乙醇，山腊梅提取物为山腊梅 醇提物；山腊梅醇提物的制备方法为：称取重量份为100的山腊梅，粉碎，加 入重量份为500～1200的65～95％乙醇提取1～3次，每次提取时间为1～2h，将提 取液过滤合并，浓缩，即得山腊梅醇提物。

经试验研究发现，山腊梅醇提物中的有效成分为异嗪皮啶。

本发明的另一个方案中，溶剂为蒸馏水，山腊梅提取物为山腊梅水提物；

山腊梅水提物的制备方法为：称取重量份为100的山腊梅，粉碎，加入重 量份为500～1200的蒸馏水煎煮1～3次，每次煎煮时间为1～2h，将煎煮液过滤 合并，浓缩，即得山腊梅水提物。

本发明又一个优选方案，溶剂为石油醚，山腊梅提取物为山腊梅石油醚提 取物；

山腊梅石油醚提取物的制备方法为：称取重量份为100的山腊梅，粉碎， 加入重量份为500～1200的石油醚提取1～3次，每次提取时间为1～2h，将提取 液过滤合并，浓缩，加乙醇稀释，即得山腊梅石油醚提取物。

对于山腊梅提取物在本发明中的应用中，每kg患者体重施用剂量为 0.1～0.5g的山腊梅提取物时，取得较佳的治疗效果。

山腊梅提取物用于治疗重症肌无力时优选施用剂量为0.1g/kg患者体重，此 时效果最佳。

由山腊梅提取物和辅料制备成口服制剂或注射剂；其中，口服制剂包括片 剂和胶囊剂；口服制剂包括重量份数为50-150份的山腊梅提取物、30-40份的 淀粉、70-80份的糊精、1-3份的硬脂酸镁、3-9份的滑石粉以及8-20 份的70％乙醇溶液。

该口服制剂的制备方法具体如下：

1)所述重量份的山腊梅制备成山腊梅提取物；

2)将步骤1)中得到的山腊梅提取物浓缩成浸膏，加入所述重量份的淀粉、 糊精、硬脂酸镁、滑石粉以及70％乙醇，搅拌混合制软粒；

3)步骤2)所得的软粒压片或灌装成胶囊，每粒(片)含山腊梅提取物100mg。

由所述山腊梅提取物和注射用水制备的注射剂，使该药物直接注入组织或 血管，迅速到达高峰发挥作用，疗效可靠。其中注射用水与山腊梅提取物的重 量份数比为5-12:1。

该注射剂的制备方法具体如下：

1)所述重量份的山腊梅制备成山腊梅提取物；

2)将步骤1)中得到的山腊梅提取物冷藏并去除杂质，加入所述重量份的 注射用水，冷藏过夜，解冻，抽滤，滤液调节pH5.8～6.2，然后加入活性炭脱色， 室温下静置，精滤，灌装，灭菌分装，每只含山腊梅提取物200mg。

本发明的有益效果在于，获得了山腊梅提取物的新用途，其用于治 疗老年痴呆症、脑卒中、精神分裂症、抑郁症、重症肌无力和肌营养不良，具 有较好的疗效，有效改善患者上述疾病的症状，其疗效确切、副作用 少。

具体实施方式

下列实施例进一步描述和证明了本发明范围内的优选实施方案。所 给的这些实施例仅仅是说明性的，不可理解为是对本发明的限制。

实施例1 山腊梅醇提物

制备方法：称取100g的山腊梅，粉碎，加入的95％乙醇1000ml提取1次， 提取时间为2h，将提取液过滤，浓缩至100ml，即得山腊梅醇提物。

实施例2 山腊梅醇提物

制备方法：称取100g的山腊梅，粉碎，加入的65％乙醇500ml提取2次，每 次提取时间为1h，将提取液过滤合并，浓缩100ml，即得山腊梅醇提物。

实施例3 山腊梅醇提物

制备方法：称取100g的山腊梅，粉碎，加入的80％乙醇1200ml提取3次， 每次提取时间为1.5h，将提取液过滤合并，浓缩100ml，即得山腊梅醇提物。

实施例4 山腊梅水提物

制备方法：称取100g的山腊梅，粉碎，加入1000ml的蒸馏水煎煮1次，煎煮 时间为2h，将煎煮液过滤，浓缩100ml，即得山腊梅水提物。

实施例5 山腊梅水提物

制备方法：称取100g的山腊梅，粉碎，加入500ml的蒸馏水煎煮2次，每次 煎煮时间为1h，将煎煮液过滤合并，浓缩100ml，即得山腊梅水提物。

实施例6 山腊梅水提物

制备方法：称取100g的山腊梅，粉碎，加入1200ml的蒸馏水煎煮3次，每 次煎煮时间为1.5h，将煎煮液过滤合并，浓缩100ml，即得山腊梅水提物。

实施例7 山腊梅石油醚提取物

制备方法：称取100g的山腊梅，粉碎，加入石油醚1000ml提取1次，煎提取 时间为2h，将提取液过滤，浓缩至50ml，加乙醇稀释至300ml，即得山腊梅石 油醚提取物。

实施例8 山腊梅石油醚提取物

制备方法：称取100g的山腊梅，粉碎，加入石油醚1000ml提取2次，每次 提取时间为1h，将提取液过滤合并，浓缩至50ml，加乙醇稀释至300ml，即得 石油醚提取物。

实施例9 山腊梅石油醚提取物

制备方法：称取100g的山腊梅，粉碎，加入石油醚1200ml提取3次，每次 提取时间为1.5h，将提取液过滤合并，浓缩至50ml，加乙醇稀释至300ml，即 得石油醚提取物。

实施例10 片剂

制备方法：

1)取所述重量份的实施例1中的山腊梅醇提物；

2)将步骤1)中得到的山腊梅醇提物浓缩成浸膏，加入所述重量份的淀粉、糊 精、硬脂酸镁、滑石粉以及70％乙醇，搅拌混合制软粒；

3)步骤2)所得的软粒压片，每片含山腊梅提取物100mg。

实施例11 片剂

制备方法：按实施例10所述步骤制备得山腊梅水提物的片剂，每粒含 山腊梅提取物100mg。

实施例12 片剂

制备方法：按实施例10所述步骤制备得山腊梅石油醚提取物的片剂， 每粒含山腊梅提取物100mg。

实施例13 胶囊剂

制备方法：

1)取所述重量份的实施例1中的山腊梅醇提物；

2)将步骤1)中得到的山腊梅醇提物浓缩成浸膏，加入所述重量份的淀粉、糊 精、硬脂酸镁、滑石粉以及70％乙醇，搅拌混合制软粒；

3)步骤2)所得的软粒灌装胶囊，每粒含山腊梅提取物100mg。

实施例14 胶囊剂

制备方法：按实施例13所述步骤制备得山腊梅水提物的胶囊剂，每粒 含山腊梅提取物100mg。

实施例15 胶囊剂

制备方法：按实施例13所述步骤制备得山腊梅石油醚提取物的胶囊剂， 每粒含山腊梅提取物100mg。

实施例16 注射剂

活性成分：实施例1的山腊梅醇提物      100g

注射用水                                 1000ml

制备方法：将实施例1得到的山腊梅提取物冷藏并去除杂质，加入所述重量份 的注射用水，冷藏过夜，解冻，抽滤，滤液调节pH5.8，然后加入活性炭脱色， 室温下静置，精滤，灌装，灭菌分装，每只含山腊梅提取物200mg。

实施例17 注射剂

活性成分：实施例4的山腊梅水提物      100g

注射用水                                 1200ml

制备方法：将实施例4得到的山腊梅提取物冷藏并去除杂质，加入所述重量份 的注射用水，冷藏过夜，解冻，抽滤，滤液调节pH6.2，然后加入活性炭脱色， 室温下静置，精滤，灌装，灭菌分装，每只含山腊梅提取物200mg。

实施例18 注射剂

活性成分：实施例7的山腊梅石油醚提取物   100g

注射用水                                 800ml

制备方法：将实施例7得到的山腊梅提取物冷藏并去除杂质，加入所述重量份 的注射用水，冷藏过夜，解冻，抽滤，滤液调节pH6，然后加入活性炭脱色， 室温下静置，精滤，灌装，灭菌分装，每只含山腊梅提取物200mg。

附图说明

图1为试验例1山腊梅提取物对乙酰胆碱酯酶体外抑制率示意图；

图2为试验例2各组小鼠在定位航行试验中寻找原平台的运动轨迹；

图3为试验例3山腊梅提取物对缺血小鼠脑梗死的保护作用的比较；

图4为试验例3山腊梅提取物对缺血小鼠脑梗死面积的比较；

图5为试验例3山腊梅提取物对脑缺血小鼠的行为学评分比较；

图6为试验例4山腊梅提取物对精神分裂症小鼠的穿格次数比较；

图7为试验例4山腊梅提取物对精神分裂症小鼠的刻板行为评分比较；

图8为试验例5山腊梅提取物对抑郁症小鼠5min内水平运动次数比较；

图9为试验例5山腊梅提取物对抑郁症小鼠5min内垂直运动次数比较；

图10为试验例5山腊梅提取物对抑郁症小鼠的强迫游泳试验不动时间 比较；

图11为试验例5山腊梅提取物对抑郁症小鼠吊尾试验不动时间比较；

图12为试验例6山腊梅提取物对重症肌无力小鼠的TNF-a+淋巴细胞 的百分比的比较；

图13为试验例6山腊梅提取物对重症肌无力小鼠的R97-116IgG2a抗 体水平的比较；

图14为试验例6山腊梅提取物对重症肌无力小鼠的R97-116IgG2b抗 体水平的比较。

药效试验

试验例1

试验目的：山腊梅提取物抑制乙酰胆碱酯酶活性的试验

1、试验样品

样品1：50mg/ml山腊梅水提物；

样品2：100mg/ml山腊梅水提物；

样品3：50mg/ml山腊梅醇提物；

样品4：100mg/ml山腊梅醇提物；

样品5：50mg/ml山腊梅石油醚提取物；

样品6：100mg/ml山腊梅石油醚提取物；

样品7：0.05mg/ml异嗪皮啶；

样品8：0.1mg/ml异嗪皮啶；

样品9：0.01mg/ml加兰他敏(阳性药)。

2、试验方法

采用改良的Ellman体外酶活性筛选方法进行，利用经典的反应 体系：140μL 0.1mol/L PBS(pH 8.0)，20μL待测样品溶液(分别为样 品1～9)，20μL乙酰胆碱酯酶溶液，依次加入96孔板中，震荡混匀， 4℃培养20分钟。然后加10μL 0.01M的DTNB，最后通过加10μL 0.075M的ATCI开始反应。37℃培养20分钟后，用酶标仪在405nm 下测量吸光度(A)并根据下式计算抑制率：

抑制率(％)＝[1-(A实验-A实验对照)/(A空白-A空白对照)] ×100％。

3、试验结果

附图1的结果显示，山腊梅水提物50mg/ml、100mg/ml乙酰胆碱 酯酶抑制率分别为40.58％、80.36％；山腊梅醇提物50mg/ml、100mg/ml 乙酰胆碱酯酶抑制率分别为60.89％、92.37％；山腊梅石油醚提取物 50mg/ml、100mg/ml乙酰胆碱酯酶抑制率分别为48.26％、60.52％；异 嗪皮啶0.05mg/ml、0.1mg/ml乙酰胆碱酯酶抑制率分别是57.56％， 96.87％；加兰他敏(阳性药)0.01mg/ml乙酰胆碱酯酶抑制率为49.82％。 表明山腊梅水提、醇提、石油醚提取物均有一定的抗乙酰胆碱酯酶作 用，其中醇提物抑制活性最强，而异嗪皮啶的抑制率与山腊梅醇提物 的相当，说明异嗪皮啶为山腊梅醇提物中的有效成分。

试验例2

试验目的：山腊梅提取物改善老年痴呆病症的试验

本试验例选择山腊梅提取物作为抗老年痴呆的药物，通过建立东 莨菪碱诱导的小鼠学习记忆障碍痴呆模型，探讨山腊梅醇提物对神经 的保护作用，旨在选择一种疗效确切、副作用少的抗老年痴呆新药物。

1、材料与方法

1.1药品及试剂

山腊梅样品：

样品1：实施例1的山腊梅醇提物；

样品2：实施例4的山腊梅水提物；

样品3：实施例7的山腊梅石油醚提取物。

乙酰胆碱酯酶(AChE)，碘代硫代乙酰胆碱(ATCI)和5,5′-二硫 代双硝基苯甲酸(DTNB)均购自Sigma公司；

氢溴酸加兰他敏：天津药业集团新郑股份有限公司，国药准字 H41023666；

氢溴酸东莨菪碱：徐州莱恩药业有限公司，国药准字H32022136；

乙酰胆碱(ACh)和乙酰胆碱酯酶(AChE)试剂盒，购自南京建 成生物工程研究所。

1.2动物

SPF级KM小鼠，体重20-22g，武汉大学动物实验中心提供， 动物合格证号为NO.42000500001804，生产许可证号：SCXK(鄂) 2008-2004。鼠饲料，购于武汉大学实验动物中心。

2、试验方法

2.1动物分组与处理

小鼠随机分为对照组3组和试验组5组：

对照组：对照组1为正常组；对照组2为模型组；对照组3为模 型+加兰他敏组。

试验组：试验组1为模型+0.5g/kg山腊梅醇提物；

试验组2为模型+0.3g/kg山腊梅醇提物；

试验组3为模型+0.1g/kg山腊梅醇提物；

试验组4为模型+0.5g/kg山腊梅水提物；

试验组5为模型+0.5g/kg山腊梅石油醚提取物。

上述各组均采用灌胃给药，每日1次，连续21天。第16天开始， 除对照组1外，其余各组均于实验前30min给予腹腔注射3mg/kg氢 溴酸东莨菪碱，制备小鼠学习记忆障碍痴呆模型。

2.2Morris水迷宫测试

Morris水迷宫主体为直径100cm，高35cm的圆形水池，水池内 加入奶粉使水不透明，且将迷宫均分为4个象限，水温保持在(25±2)℃。 另有一个白色圆形平台(直径9cm，高29cm)，置于某一象限中央， 位于水面下1-2cm，迷宫上方安置着连接显示系统的摄像机，同步记录 小鼠运动轨迹。测试方法参照现有的文献进行。第16天开始进行定位 航行实验，历时5天，每天1次。将小鼠面向池壁放入水中，记录其 在120s内找到平台的时间(逃避潜伏期)。超过120s找不到平台，可 引导其找到平台并在平台上滞留10s，逃避潜伏期记成120s。第21天 上午进行空间探索实验，撤除平台，将小鼠随机从某一象限面向池壁 放入水中，记录120s内小鼠寻找原平台的运动轨迹。

2.3生物化学检测

行为学实验测试结束后，处死小鼠，迅速取出脑组织，用生理盐 水制成10％匀浆，放入低温离心机中，3000r/min 4℃离心10min， 取上清液装入试管中冷冻备用，按照试剂盒说明书进行ACh、AChE的 测定。

3、试验结果

3.1山腊梅提取物对东莨菪碱诱导的记忆障碍的保护作用

表1 山腊梅提取物对东莨菪碱所致小鼠的记忆获得性障碍的作用情况

小组 小鼠处理 药物用量 逃避潜伏期/s 对照组1 正常 / 18.42±6.38 对照组2 模型 / 37.89±4.58 对照组3 模型+加兰他敏 2mg/kg 18.94±4.32 试验组1 模型+山腊梅醇提物 0.5g/kg 22.23±4.53 试验组2 模型+山腊梅醇提物 0.3g/kg 25.42±2.57 试验组3 模型+山腊梅醇提物 0.1g/kg 28.88±1.24 试验组4 模型+山腊梅水提物 0.5g/kg 24.05±3.53 试验组5 模型+山腊梅石油醚提取物 0.5g/kg 23.94±5.47

对照组1～3和试验组1的小鼠在第五天的游泳路径，见附图2。

由表1及附图2的结果表明：山腊梅提取物能够显著改善东莨菪 碱所致小鼠的记忆获得性障碍作用；当施用剂量每kg体重0.5g时的效 果更好，其中山腊梅醇提物的改善效果最佳。

3.2山腊梅提取物对痴呆小鼠脑组织匀浆中乙酰胆碱酯酶活性的影响

表2 山腊梅提取物对痴呆小鼠脑组织匀浆中乙酰胆碱酯酶活性的影响

由表2的结果表明：山腊梅提取物可能是通过抑制AChE活性， 来改善痴呆小鼠的学习记忆功能；其中山腊梅醇提物的改善效果较好， 且当施用剂量每kg体重0.5g时的效果最佳。

3.3实验结论

山腊梅提取物能显著改善东莨菪碱所致的小鼠记忆获得性障碍作 用，并能有效拮抗东莨菪碱引起的脑内乙酰胆碱酯酶活力的增高。通 过对乙酰胆碱酯酶活性的抑制，从而达到抗老年痴呆的作用。

试验例3

试验目的：山腊梅提取物改善脑卒中病症的试验

本试验例选择山腊梅提取物作为抗脑卒中的药物，通过建立脑缺 血动物模型，探讨山腊梅提取物对脑缺血的保护作用，旨在选择一种 疗效确切、副作用少的抗脑卒中药物。

1、材料与方法

1.1药品及试剂

山腊梅样品：

样品1：实施例1的山腊梅醇提物；

样品2：实施例4的山腊梅水提物；

样品3：实施例7的山腊梅石油醚提取物。

水合氯醛：国药集团化学试剂有限公司，T20090926，99.5％。

TTC(2，3，5—氯化三苯基四氮唑)：Sigma公司提供，T8877-25G, 95％；乙醚等试剂均为市售分析纯试剂。

依达拉奉：吉林省博大制药有限责任公司，YBH28302005，注射 液:20ml：30mg*1/支/支。

1.2动物

SPF级KM小鼠，体重20-22g，武汉大学动物实验中心提供， 动物合格证号为NO.42000500001804，生产许可证号：SCXK(鄂) 2008-2004。鼠饲料，购于武汉大学实验动物中心。

2、试验方法

2.1动物分组与处理

小鼠随机分为对照组3组和试验组5组：

对照组：对照组1为假手术组；对照组2为模型组；对照组3为 模型+依达拉奉组。

试验组：试验组1为模型+0.5g/kg山腊梅水提物；

试验组2为模型+0.3g/kg山腊梅水提物；

试验组3为模型+0.1g/kg山腊梅水提物；

试验组4为模型+0.5g/kg山腊梅醇提物；

试验组5为模型+0.5g/kg山腊梅石油醚提取物。

对照组3的模型小鼠经腹腔注射给予依达拉奉6mg/kg，试验组分 别经腹腔注射给予山腊梅提取物，对照组1与对照组2分别给予等容 积的生理盐水。于栓塞后2h，一次性给予。

2.2动物造模

依据改良线栓MCAo模型建立脑缺血模型，小鼠用10％水合氯醛 (3.5ml/kg)静脉注射麻醉。仰卧位固定，颈正中线切口，沿胸锁乳突 肌内缘分离肌肉和筋膜，分离左侧颈总动脉(CCA)、颈外动脉(ECA) 和颈内动脉(ICA)，在CCA远心端和近心端及ECA处挂线备用。用 微动脉夹暂时夹闭ICA，然后近心端结扎CCA、ECA。然后在距CCA分 叉部约4mm处剪一小口，将拴线插入CCA后进入ICA,直至颅底,越 过MCA的起始部,到达大脑前动脉(ACA)的近端这时用绕在CCA远 心端的细线轻轻系牢拴线。缝合伤口，单笼饲养观察。2h后拔线栓实 现再灌注。

假手术组小鼠用10％水合氯醛(3.5ml/kg)静脉注射麻醉。仰卧 位固定，颈正中线切口，沿胸锁乳突肌内缘分离肌肉和筋膜，分离左 侧颈总动脉(CCA)、颈外动脉(ECA)和颈内动脉(ICA)后缝合上 后即可。

2.3检测指标

2.3.1神经行为学评分

麻醉苏醒后，由一不了解分组情况的观察者进行神经行为学评分。 将动物放回鼠笼，自由饮食.脑缺血再灌注后24h，由不了解分组情况 的第二位观察者评估记录神经行为学评分，按Zea-Longa等的6级评 分法:0级，无功能障碍；1级，不能伸展左侧前肢；2级，向左侧旋 转；3级，向左侧倾倒；4级，无自主活动伴意识抑制；5级，死亡。 2.3.2TTC染色

动物于栓塞后24h，麻醉，取脑。－20度冰箱中速冻30分钟左右， 切片：切成8-10片，每隔1.5mm切一片。切片置于2％TTC染色剂 (2g溶于100mlPBS缓冲液)中，用锡箔纸盖住后，放入370℃温箱 30min，不时翻动脑片，使均匀接触到染色液。染色后扫描仪扫描切片， 用image pro plus图像处理软件计算梗死体积：

梗死体积＝[(VC－VL)/V C]，VC是对照半球体积，VL是损伤半 球非梗死体积。

对照组3的模型小鼠经腹腔注射给予依达拉奉6mg/kg，试验组分 别经腹腔注射给予山腊梅提取物，对照组1与对照组2分别给予等容 积的生理盐水。于栓塞后2h，一次性给予。采用6分法进行行为学评 分。于24h后，处死动物，取脑，TTC染色后，计算梗死体积。

3、试验结果

3.1山腊梅提取物对缺血小鼠的保护作用

表3 山腊梅提取物对脑缺血小鼠的影响

小组 小鼠处理 药物用量 梗死体积 行为学评分 对照组1 假手术 / 0±0 0±0 对照组2 模型 / 0.3567±0.059 4.120±0.48 对照组3 模型+依达拉奉 6mg/kg 0.1564±0.054 2.145±0.167 试验组1 模型+山腊梅水提物 0.5g/kg 0.0713±0.029 1.546±0.324 试验组2 模型+山腊梅水提物 0.3g/kg 0.0781±0.014 1.567±0.244 试验组3 模型+山腊梅水提物 0.1g/kg 0.0897±0.044 1.611±0.254 试验组4 模型+山腊梅醇提物 0.5g/kg 0.0801±0.040 1.601±0.014 试验组5 模型+山腊梅石油醚提取物 0.5g/kg 0.0814±0.065 1.712±0.075

由表3和图4、图5的结果表明：山腊梅提取物可改善脑卒中，且 作用明显优于其他现有文献报道的化合物或现有临床使用药物。其中 山腊梅水提物的改善效果较好，且当施用剂量每kg体重0.5g时的效果 最佳。此外见附图3，山腊梅水提物与依达拉奉作用的比较，进一步表 明山腊梅提取物可明显改善脑卒中。

试验例4

试验目的：山腊梅提取物改善精神分裂症的试验

1、材料与方法

1.1药品及试剂

山腊梅样品：山腊梅醇提取物、山腊梅水提取物以及山腊梅石油 醚提取物。

1.2动物：如试验例3所述的小鼠原型。

2、试验方法

2.1动物分组与处理

小鼠随机分为对照组3组和试验组3组：

其中对照组：对照组1为正常组；对照组2为模型组；对照组3 为模型+4mg/kg氯丙嗪组(临床用抗精神分裂症药物)。

试验组：试验组1为模型+0.5g/kg山腊梅醇提物；

试验组2为模型+0.5g/kg山腊梅水提物；

试验组3为模型+0.5g/kg山腊梅石油醚提取物。

除对照组1外，其他各组采用苯丙胺诱导成精神分裂模型。试验 组经口给予山腊梅提取物，对照组3腹腔注射氯丙嗪30mg/kg，连续7 天。

2.2检测指标：进行旷场试验及5分法刻板行为评分。

2.3试验结果

表4 山腊梅提取物对改善精神分裂症状的情况

小组 小鼠处理 药物用量 穿格次数 刻板行为评分 对照组1 正常 / 214.56±30.12 1.54±0.34 对照组2 模型 / 350.45±19.21 3.03±0.23 对照组3 模型+氯丙嗪 4mg/kg 243.69±21.76 1.59±0.24 试验组1 模型+山腊梅醇提物 0.5g/kg 265.34±23.45 2.32±0.38 试验组2 模型+山腊梅水提物 0.5g/kg 277.05±12.65 2.47±0.31 试验组3 模型+山腊梅石油醚提取物 0.5g/kg 269.84±20.40 2.22±0.60

表4和图6、图7可看出山腊梅提取物能增加自主性活动，减轻刻 板行为，改善精神分裂症状；其中山腊梅醇提物的改善效果最佳。

试验例5

试验目的：山腊梅提取物改善抑郁症的试验

1、材料与方法

1.1药品及试剂

山腊梅样品：山腊梅醇提取物、山腊梅水提取物以及山腊梅石油 醚提取物。

1.2动物：如试验例3所述的小鼠原型。

2、试验方法

2.1动物分组与处理

小鼠随机分为对照组3组和试验组3组：

其中对照组：对照组1为正常组；对照组2为模型组；对照组3 为模型+30mg/kg盐酸氟西汀(临床用抗抑郁症药物)。

试验组：试验组1为模型+0.5g/kg山腊梅醇提物；

试验组2为模型+0.5g/kg山腊梅水提物；

试验组3为模型+0.5g/kg山腊梅石油醚提取物。

除对照组1外，其他各组采取慢性应激抑郁模型造模28天。第三 周开始试验组经口给予山腊梅提取物，对照组3腹腔注射盐酸氟西汀 30mg/kg，连续7天。

2.2检测指标：进行旷场试验、强迫游泳实验和吊尾试验。

2.3试验结果

表5 山腊梅提取物对改善抑郁症状的情况

表5和图8～11的结果表明山腊梅提取物可以改善小鼠兴趣缺失的 状态和探索行为，有一定的抗抑郁作用，且优于氟西汀；其中山腊梅 醇提物的效果最佳。

试验例6

试验目的：山腊梅提取物改善重症肌无力病症的试验

1、材料与方法

1.1药品及试剂

山腊梅样品：山腊梅醇提取物、山腊梅水提取物以及山腊梅石油 醚提取物。

1.2动物：如试验例3所述的小鼠原型。

2、试验方法

2.1动物分组与处理

小鼠随机分为对照组3组和试验组4组：

其中对照组：对照组1为正常组；对照组2为模型组。

试验组：试验组1为模型+0.5g/kg山腊梅醇提物；

试验组2为模型+0.5g/kg山腊梅水提物；

试验组3为模型+0.5g/kg山腊梅石油醚提取物；

试验组4为模型+0.1g/kg山腊梅石油醚提取物。

各组小鼠采用实验性自身免疫性重症肌无力动物模型，于免疫后 第10天，每日灌胃给药治疗，直至小鼠发病高峰期第40天。

2.2检测指标：使用流式细胞仪检测小鼠淋巴结中TNF-a+淋巴细胞的 百分比；酶联免疫吸附法检测小鼠血清中R97-116IgG2a和IgG2b抗 体的水平。

2.3试验结果

表6 山腊梅提取物对重症肌无力的改善情况

表6和图12～14可看出表明山腊梅石油醚提取物可明显缓解重症 肌无力小鼠的症状；其中山腊梅醇提物的改善效果最佳；且当施用剂 量每kg体重0.1时的效果最佳。