一种适用于流式细胞分析植物干燥组织的处理方法

摘要

本发明涉及一种适用于流式细胞分析植物干燥组织的处理方法，属于生物学分析技术领域。为了解决现有技术中只能对鲜样进行分析的问题,提供一种适用于流式细胞分析植物干燥组织的处理方法，该处理方法包括细胞核提取、染色和分析，所述细胞核提取所用细胞核提取液的组分为：Tris：12～18mM；Na

说明书

技术领域

本发明涉及一种适用于流式细胞分析植物干燥组织的处理方 法，属于生物学分析技术领域。

背景技术

流式细胞术(flow cytometry)是一种利用流式细胞仪对处在 液流中的单个细胞或其它生物颗粒等进行快速定量分析和分选的 技术。在植物学研究中，则可用于植物倍性鉴定、细胞核DNA数 量测定、生殖途径鉴定等。

目前，常规的流式细胞术分析植物染色体倍性均采用新鲜植 物的根尖、叶片或细嫩的组织，是因为其可以避免老组织内含有 较高浓度的淀粉、多糖和其他代谢物，而这些物质分布在细胞质 中，使得细胞质紧密地和细胞核粘在一起，影响了细胞核的纯度， 同时，也加速了细胞核的老化，增加样品的粘度，使得其不能准 确地检测出待测样品的倍性。但是，另一方面，如果采用新鲜或 幼嫩的组织，就要求植物材料在短时间内要完成测定，否则细胞 核DNA会发生降解，同样会影响检测的准确性。这样就限制了从 野外采集的植物样品不能进行流式细胞术分析，极大的限制了流 式细胞术在植物生态学、种群生物学、植物系统学中的应用。如 中国专利申请(公开号：CN102243150A)公开了一种适用于流式 细胞分析的果树成熟叶片的细胞核提取方法，通过对细胞核提取 液的组分进行改进，所述细胞核提取液组分为：

15-20mmol/L Tris，40-60mmol/L的KCl，10-20mmol/L的 NaCl，2-5mmol/L的Na₂EDTA，10-20mmol/L MgSO₄，40-50mmol/L 蔗糖和0.5-1.0％Triton X-100，体积加ddH2O至200ml，调pH 为7.5-8后，加入200μl的15mmol/L巯基乙醇。通过加入蔗糖 使有利于维持细胞核的完整性并防止它们聚集，并通过提高 Triton-X-100的处理浓度到1.0％，促使细胞质分散并选择性的溶 解叶绿体膜，使有利于在核膜上打孔，以便于荧光染料顺利进入。 虽然，现有技术中有提及到成熟叶片的处理方法，但是现有技术 中仍然没有涉及到处理检测干燥植物组织的方法，且由于干燥植 物组织是经过脱水处理，植物细胞组织基本上与细胞核粘着在一 起，很难分离，且脱水后的植物细胞膜很难破壁，很难提取细胞 核和保证染色效果，从而影响流式细胞分析的准确性；另一方面， 由于干燥植物组织贮存时间久，细胞核内的DNA存在易断裂和降 解的问题。

发明内容

本发明针对以上现有技术中存在的问题，提供一种适用于流 式细胞分析植物干燥组织的处理方法，本发明所要解决的问题是 如何实现分析植物干燥组织，提高流式细胞分析的适用范围。

本发明的目的是通过以下技术方案得以实现的，一种适用于 流式细胞分析植物干燥组织的处理方法，该处理方法包括细胞核 提取、染色和分析，所述细胞核提取所用细胞核提取液的组分为：

Tris：12mM～18mM；Na₂EDTA：1mM～3mM；盐酸精胺：0.2mM～ 0.3mM；KCl：70mM～90mM,NaCl：10mM～25mM；β-巯基乙醇：10 mM～20mM；Triton X-100：0.2％(vol/vol)～0.5％(vol/vol)；pH 值为6.5～7.0。

本发明适用于流式细胞分析植物干燥组织的处理方法，由于 植物组织如叶片、根或茎等干燥后，是基本上处于完全脱水之后， 植物组织会粘着在细胞核表面，很难达到分离效果，且植物细胞 膜很难破壁，也影响了细胞核的提取和不易染色的问题；同时， 干燥的植物组织由于贮存时间较久，很容易导致DNA断裂和降解。 为了解决上述问题，本发明通过在细胞核提取液中加入盐酸精胺 主要作用是为了稳定细胞核DNA的作用，能够有效防止其断裂和 降解，提高DNA的提取效率和纯度要求，保证细胞核的完整性和 具体较好的分散效果，有利于进行流式细胞分析，并通过加入 Triton X-100和提高其浓度，解决因脱水导致的细胞壁难以破壁 的问题，从而达到较好的处理效果，另一方面，由于经过干燥的 植物组织，植物组织比较硬，需要较长的时间切碎，而切的时间 过长，容易导致多酚类物质被氧化，因此，本发明通过加入β- 巯基乙醇来达到防止多酚类物质被氧化的效果。通过调节体系的 pH值在6.5～7.0，能够减少植物材料的褐化，有利于干燥植物细 胞的破膜，从而易于细胞核的释放。上述所述单位mM表示mmol/L， 体积比vol/vol表示Triton X-100的体积用量与整体细胞核提取 液的体积百分比，两者的体积单位相同的条件下的百分比值，优 选，所述细胞核提取液中Triton X-100为0.25％～0.35％ (vol/vol)。

在上述适用于流式细胞分析植物干燥组织的处理方法中，作 为优选，该处理方法具体包括以下步骤：

A、细胞核提取：向干燥的植物组织中加入预冷的细胞核提取 液，再进行切碎处理，过滤除去残渣，收集含有细胞核的滤液；

B、染色和分析：向上述滤液中加入RNA酶A和碘化丙锭进行 染色处理，所述碘化丙锭的浓度为0.15mg/mL～0.25mg/mL，染色 处理后，进行流式细胞术分析。

由于干燥植物组织的细胞核表面会有少量细胞膜、植物组织 等杂质，会导致在染色的过程很难染色，从而影响分析的准确性 的精度，本发明发现通过提高加入的碘化丙锭的浓度很好的解决 了不易染色的问题，使DNA更易被染料吸附，达到较好的染色效 果。另外，通过采用预冷的细胞核提取液进行提取，更有利于防 止细胞核的降解和保证细胞核的完整性。所述的干燥植物组织最 好预先储存在冰袋里或是在冷冻条件下进行保存。

在上述适用于流式细胞分析植物干燥组织的处理方法中，作 为优选，步骤A中所述切碎处理的具体过程为：

将预冷的干燥的植物组织放入预冷的容器中，加入预冷的细 胞核提取液，再然后用刀片将植物组织进行第一次切碎处理，过 滤，收集含有细胞核的滤液，再采用刀片将剩下的植物组织进行 第二次切碎处理，直到将全部的植物组织切碎成糊状。优选，每 次切碎处理的时间最好超过10分钟以上。经过第一次切碎后，已 经基本被切成小颗粒，但由于干燥的植物组织较硬，小颗粒漂浮 在提取液内，很难达到进一步切细效果，因此，本发明通过二次 切碎处理，先将经过第一次切碎处理后的提取液过滤出来，再进 行二次切碎，从而很好的达到了切碎的效果，也更有利于实现了 细胞核的提取和分离。作为进一步的优选，所述刀片的厚度为 0.1mm～0.3mm。主要目的有利于破碎细胞，有助于使细胞核游离 的作用；另外，刀片的厚度越小，刀片就会越锋利，但是刀片的 硬度会减弱；刀片厚度越高，刀片锋利程度较差，植物组织就很 难切碎，尤其是干燥的植物组织就更难切碎并释放出细胞核。选 择上述厚度范围内的刀片，可以在刀片硬度与锋利度上选择一个 平衡点，适应于干燥组织的切碎。

在上述适用于流式细胞分析植物干燥组织的处理方法中，作 为优选，步骤A中所述干燥的植物组织的重量与细胞核提取液体 积的用量比为：50：1～45：1，所述干燥的植物组织的重量单位 为毫克，所述细胞核提取液的体积单位为毫升。植物组织的重量 要在一定范围内，植物组织过少或是提取液用量的比例过高，会 导致植物组织会漂浮在液面上，单位体积液体里细胞核数量过少， 难以被检测到；而植物组织用量过多或提取液用量比例过少，又 导致分离出来的细胞很难分散，组织很难切碎，同样会使单位体 积里的细胞核数量过少。

在上述适用于流式细胞分析植物干燥组织的处理方法中，作 为优选，步骤B中所述碘化丙锭的浓度为0.18mg/mL～0.22mg/mL。 目的是为了提高染料的染色效果。

在上述适用于流式细胞分析植物干燥组织的处理方法中，作 为优选，步骤A中所述干燥的植物组织选自硅胶干燥、自然风干 或压干标本的植物干燥组织。通过采用本发明的处理方法，从而 能够适用于干燥的植物组织，大大的提高了适用范围。

在上述适用于流式细胞分析植物干燥组织的处理方法中，作 为优选，步骤B中所述流式细胞术分析采用的流式分析仪为 Attune声波聚焦流式细胞分析仪。作为进一步的优选，步骤B中 所述Attune声波聚焦流式细胞分析仪的参数设置为：

相应参数 电压范围(mV) FSC 2300～2400 BL1 1500～1800 SSC 2500～2600 BL2 1800～1900 LB3 1300～1400 VL1 1200～1300 VL2 1900～2000 VL3 2100～2400

上述参数是流式细胞仪中的八个滤光片通道，其数值指的是 滤光片通道的电压值，通过将FSC和SSC的电压调节至适宜范围 可以找到相应的细胞或细胞核类群。本发明测定干样时所用的电 压高于鲜样测定的电压，目的是为了提高细胞核与细胞碎片之间 的荧光峰的区分度，有利于染色体倍性的确定。

综上所述，本发明与现有技术相比具有以下优点：

1.本发明适用于流式细胞分析植物干燥组织的处理方法，通 过加入盐酸精胺和提高Triton X-100来实现防止细胞核DNA的降 解和提高其稳定性，并通过加入β-巯基乙醇来解决因干燥植物 组织切碎过程较好而导致的被氧化的问题，本发明通过上述对细 胞核提取液进行改进，从而使本发明的方法能够适用于干燥的植 物组织，且还能够适用于各种不同的植物干燥组织，大大提高了 适用范围。

2.本发明适用于流式细胞分析植物干燥组织的处理方法，通 过提高碘化丙锭的浓度，解决了因干燥植物组织的细胞核表面易 粘着少量的杂质如细胞膜和植物组织碎片，实现使DNA更易于被 染料吸附，达到着色效果。

附图说明

图1是本发明的方法得到的加拿大一枝黄花干燥叶片样品的 流式细胞术分析结果图。

图2是本发明的方法得到的黄莺干燥叶片样品的流式细胞术 分析结果图。

图3是本发明的方法得到的野生草莓干燥叶片样品的流式细 胞术分析结果图。

图4是本发明的方法得到的栽培草莓干燥叶片样品的流式细 胞术分析结果图。

图5是本发明的方法得到的栽培草莓干燥叶片样品的流式细 胞术分析结果图。

图6是本发明的方法得到的栽培草莓干燥叶柄样品的流式细 胞术分析结果图。

图7是本发明的方法得到的栽培草莓干燥匍匐茎样品的流式 细胞术分析结果图。

图8是本发明的方法得到的栽培草莓干燥根尖样品的流式细 胞术分析结果图。

图9是本发明的方法得到的三叶草干燥叶片样品的流式细胞 术分析结果图。

图10是本发明的方法得到的水杨梅干燥叶片样品的流式细 胞术分析结果图。

图11是本发明的方法得到的喜旱莲子草干燥叶片样品的流 式细胞术分析结果图。

图12是本发明的方法得到的小飞蓬干燥叶片样品的流式细 胞术分析结果图。

图13是本发明的方法得到的龙葵干燥叶片样品的流式细胞 术分析结果图。

图14是本发明的方法得到的桔子干燥叶片样品的流式细胞 术分析结果图。

图15是本发明的方法得到的大豆干燥叶片样品的流式细胞 术分析结果图。

图16是本发明的方法得到的红花檵木干燥叶片样品的流式 细胞术分析结果图。

图17是本发明的方法得到的构树干燥叶片样品的流式细胞 术分析结果图。

图18是本发明的方法得到的三叶鬼针草干燥叶片样品的流 式细胞术分析结果图。

具体实施方式

下面通过具体实施例和附图，对本发明的技术方案作进一步 具体的说明，但是本发明并不限于这些实施例。

实施例1

本实施例为加拿大一枝黄花的倍性测定，本实施例中所用的 细胞核提取液的组分为：

Tris：12mMmM；Na₂EDTA：1mM；盐酸精胺：0.2mM；KCl：70mM, NaCl：10mM；β-巯基乙醇：10mM；Triton X-100：0.3％(vol/vol)； pH值为7.0，pH值可以采用1mM的NaOH溶液调节，所述的细胞 核提取液预先保存于-20℃的冰箱中备用；

将加拿大一枝黄花成熟叶片(经过硅胶干燥的叶片)50mg 放入预冷过的塑料培养皿中，再加入预冷的细胞核提取液1mL 中，然后采用双面刀片切碎叶片，切碎过程持续10分钟以上，先 用30微米尼龙膜过滤，收集含有细胞核的滤液，再对剩余的叶片 进行二次切碎处理，即采用双面刀片继续切碎叶片，切碎过程持 续10分钟以上，直到将全部的叶片切成糊状，再用细胞核提取液 冲洗，过滤，收集含有细胞核的提取液，将两次收集的提取液合 并后，加入10微升RNA酶A(浓度为1mg/mL)，混合均匀后在4℃ 的条件下放置10分钟以上，再向提取液中加入浓度为1mg/mL的 碘化丙锭溶液至体系中碘化丙锭的最终浓度为0.2mg/mL，在避光 条件下对细胞核DNA进行染色30分钟，染色完成后，进行流式细 胞术分析，优选所述流式细胞术分析采用Attune声波聚焦流式细 胞分析仪，且所述Attune声波聚焦流式细胞分析仪的参数设置 为：

相应参数 电压值mV(毫伏) FSC 2350 BL1 1600 SSC 2560 BL2 1850 LB3 1340 VL1 1250 VL2 1950 VL3 2200

具体分析结果如图1所示，加拿大一枝黄花干燥叶片样品的 荧光值为3259937，所测的细胞核DNA含量峰纤细而集中，其CV 值4.54％，经计算，加拿大一枝黄花为6倍体，与文献报道相同。

实施例2

本实施例为黄莺的倍性测定，本实施例中所用的细胞核提取 液的组分为：

Tris：14mM；Na₂EDTA：1mM；盐酸精胺：0.2mM；KCl：70mM, NaCl：15mM；β-巯基乙醇：20mM；Triton X-100：0.5％(vol/vol)； pH值为7.0，pH值可以采用1mM的NaOH溶液调节，所述的细胞 核提取液预先保存于-20℃的冰箱中备用；

将黄莺成熟叶片(经过硅胶干燥的叶片)50mg放入预冷过 的塑料培养皿中，再加入预冷的细胞核提取液1mL中，然后采用 双面刀片切碎叶片，切碎过程持续10分钟以上，先用30微米尼 龙膜过滤，收集含有细胞核的滤液，再对剩余的叶片进行二次切 碎处理，即采用双面刀片继续切碎叶片，切碎过程持续10分钟以 上，直到将全部的叶片切成糊状，再用细胞核提取液冲洗，过滤， 收集含有细胞核的提取液，将两次收集的提取液合并后，加入10 微升RNA酶A(浓度为1mg/mL)，混合均匀后在4℃的条件下放 置10分钟以上，再向提取液中加入浓度为1mg/mL的碘化丙锭溶 液至体系中碘化丙锭的最终浓度为0.21mg/mL，在避光条件下对 细胞核DNA进行染色30分钟，染色完成后，进行流式细胞术分析， 优选所述流式细胞术分析采用Attune声波聚焦流式细胞分析仪， 且所述Attune声波聚焦流式细胞分析仪的参数设置为：

相应参数 电压值mV(毫伏) FSC 2300 BL1 1700 SSC 2600 BL2 1800 LB3 1400 VL1 1300 VL2 1900 VL3 2300

具体的分析结果如下图2所示，黄莺的干燥叶片样品的荧光 值为986872，所测的细胞核DNA含量峰纤细而集中，其CV值 3.24％，经计算，黄莺为2倍体，与文献报道相同。

实施例3

本实施例为加拿大一枝黄花的倍性测定，本实施例中所用的 细胞核提取液的组分为：

Tris：18mM；Na₂EDTA：3mM；盐酸精胺：0.2mM；KCl：70mM, NaCl：25mM；β-巯基乙醇：20mM；Triton X-100：0.2％(vol/vol)； pH值为7.0，pH值可以采用1mM的NaOH溶液调节，所述的细胞 核提取液预先保存于-20℃的冰箱中备用；

将加拿大一枝黄花成熟叶片(经过硅胶干燥的叶片)45mg放 入预冷过的塑料培养皿中，再加入预冷的细胞核提取液1mL中， 然后采用厚度为0.1mm的双面刀片切碎叶片，切碎过程持续10 分钟以上，先用30微米尼龙膜过滤，收集含有细胞核的滤液，再 对剩余的叶片进行二次切碎处理，即采用厚度为0.1mm的双面刀 片继续切碎叶片，切碎过程持续10分钟以上，直到将全部的叶片 切成糊状，再用细胞核提取液冲洗，过滤，收集含有细胞核的提 取液，将两次收集的提取液合并后，加入10微升RNA酶A(浓 度为1mg/mL)，混合均匀后在4℃的条件下放置10分钟以上，再 向提取液中加入浓度为1mg/mL的碘化丙锭溶液至体系中碘化丙 锭的最终浓度为0.22mg/mL，在避光条件下对细胞核DNA进行染 色30分钟，染色完成后，进行流式细胞术分析。优选上述所述流 式细胞术分析采用Attune声波聚焦流式细胞分析仪，且所述 Attune声波聚焦流式细胞分析仪的参数设置为：

相应参数 电压值mV(毫伏) FSC 2300 BL1 1500 SSC 2600 BL2 1900 LB3 1400 VL1 1200 VL2 2000 VL3 2400

上述流式细胞术分析的具体的分析结果与实施例1中的相应 结果一致。

实施例4

本实施例为加拿大一枝黄花的倍性测定，本实施例中所用的 细胞核提取液的组分为：

Tris：15mM；Na₂EDTA：2mM；盐酸精胺：0.25mM；KCl：80mM, NaCl：20mM；β-巯基乙醇：15mM；Triton X-100：0.5％(vol/vol)； pH值为7.0，pH值可以采用1mM的NaOH溶液调节，所述的细胞 核提取液预先保存于-20℃的冰箱中备用；

将加拿大一枝黄花成熟叶片(经过压干的标本叶片)48mg放 入预冷过的塑料培养皿中，再加入预冷的细胞核提取液1mL中， 然后采用厚度为0.3mm的双面刀片切碎叶片，切碎过程持续10 分钟以上，先用30微米尼龙膜过滤，收集含有细胞核的滤液，再 对剩余的叶片进行二次切碎处理，即采用厚度为0.3mm的双面刀 片继续切碎叶片，切碎过程持续10分钟以上，直到将全部的叶片 切成糊状，再用细胞核提取液冲洗，过滤，收集含有细胞核的提 取液，将两次收集的提取液合并后，加入10微升RNA酶A(浓 度为1mg/mL)，混合均匀后在4℃的条件下放置10分钟以上，再 向提取液中加入浓度为1mg/mL的碘化丙锭溶液至体系中碘化丙 锭的最终浓度为0.18mg/mL，在避光条件下对细胞核DNA进行染 色30分钟，染色完成后，进行流式细胞术分析，，优选所述流式 细胞术分析采用Attune声波聚焦流式细胞分析仪，且所述Attune 声波聚焦流式细胞分析仪的参数设置为：

相应参数 电压值mV(毫伏) FSC 2400 BL1 1800 SSC 2500 BL2 1800 LB3 1300 VL1 1300 VL2 1900 VL3 2100

上述流式细胞术分析的具体的分析结果与实施例1中的相应 结果一致。

实施例5

本实施例为黄莺的倍性测定，本实施例中所用的细胞核提取 液的组分为：

Tris：15mM；Na₂EDTA：2mM；盐酸精胺：0.2mM；KCl：70mM, NaCl：20mM；β-巯基乙醇：10mM；Triton X-100：0.4％(vol/vol)； pH值为7.0，pH值可以采用1mM的NaOH溶液调节，所述的细胞 核提取液预先保存于-20℃的冰箱中备用；

将黄莺成熟叶片(经过自然风干的叶片)48mg放入预冷过 的塑料培养皿中，再加入预冷的细胞核提取液1mL中，然后采用 厚度为0.2mm的双面刀片切碎叶片，切碎过程持续10分钟以上， 先用30微米尼龙膜过滤，收集含有细胞核的滤液，再对剩余的叶 片进行二次切碎处理，即采用厚度为0.2mm的双面刀片继续切碎 叶片，切碎过程持续10分钟以上，直到将全部的叶片切成糊状， 再用细胞核提取液冲洗，过滤，收集含有细胞核的提取液，将两 次收集的提取液合并后，加入10微升RNA酶A(浓度为1mg/mL)， 混合均匀后在4℃的条件下放置10分钟以上，再向提取液中加 入浓度为1mg/mL的碘化丙锭溶液至体系中碘化丙锭的最终浓度 为0.20mg/mL，在避光条件下对细胞核DNA进行染色30分钟，染 色完成后，进行流式细胞术分析，优选所述流式细胞术分析采用 Attune声波聚焦流式细胞分析仪，且所述Attune声波聚焦流式 细胞分析仪的参数设置为：

相应参数 电压值mV(毫伏) FSC 2350 BL1 1700 SSC 2560 BL2 1840 LB3 1360

VL1 1250 VL2 1950 VL3 2300

流式细胞术分析的具体的分析结果与实施例2中的相应分析 结果相一致。

实施例6

本实施例为野生草莓倍性的测定，所述野生草莓采自西藏藏 族自治区林芝县，本实施例中所用的细胞核提取液的组分为：

Tris：15mM；Na₂EDTA：2mM；盐酸精胺：0.2mM；KCl：70mM, NaCl：20mM；β-巯基乙醇：10mM；Triton X-100：0.4％(vol/vol)； pH值为7.0，pH值可以采用1mM的NaOH溶液调节，所述的细胞 核提取液预先保存于-20℃的冰箱中备用；

将野生草莓成熟叶片(经过自然风干的叶片)50mg放入预 冷过的塑料培养皿中，再加入预冷的细胞核提取液1mL中，然后 采用厚度为0.3mm的双面刀片切碎叶片，切碎过程持续10分钟以 上，先用30微米尼龙膜过滤，收集含有细胞核的滤液，再对剩余 的叶片进行二次切碎处理，即采用厚度为0.2mm的双面刀片继续 切碎叶片，切碎过程持续10分钟以上，直到将全部的叶片切成糊 状，再用细胞核提取液冲洗，过滤，收集含有细胞核的提取液， 将两次收集的提取液合并后，加入10微升RNA酶A(浓度为 1mg/mL)，混合均匀后在4℃的条件下放置10分钟以上，再向提 取液中加入浓度为1mg/mL的碘化丙锭溶液至体系中碘化丙锭的 最终浓度为0.22mg/mL，在避光条件下对细胞核DNA进行染色30 分钟，染色完成后，进行流式细胞术分析，优选所述流式细胞术 分析采用Attune声波聚焦流式细胞分析仪，且所述Attune声波 聚焦流式细胞分析仪的参数设置为：

相应参数 电压值mV(毫伏) FSC 2350 BL1 1700

SSC 2540 BL2 1850 LB3 1340 VL1 1250 VL2 1950 VL3 2250

具体的分析结果如下图3所示，野生草莓的干燥叶片样品主 要显示出两个峰，最高峰的荧光值为282600，其CV值4.67％，经 计算，野生草莓为2倍体，与文献报道相同。

实施例6

本实施例为栽培草莓(红颜草莓)倍性的测定，具体的方法 风实施例1一致，这里不再赘述。

具体的分析结果如下图4所示，栽培草莓的干燥叶片样品的 荧光值为918891，其CV值2.71％，经计算，栽培草莓为8倍体， 与文献报道相同。

实施例7

本实施例是为了验证本发明的方法普遍适用于植物的各类干 燥组织测定，本实施例以栽培草莓(红颜草莓)的不同组织进行 测定，具体的处理方法同实施例1一致，区别在于选用栽培草莓 的各类干燥组织作为测试样品，具体的测试结果如下所示。

如图5所示，是选用栽培草莓干燥叶片样品，其流式细胞分 析结果显示其荧光值为954729，CV值为2.17％。

如图6所示，是选用栽培草莓干燥叶柄样品，其流式细胞分 析结果显示其荧光值为892773，CV值为2.60％。

如图7所示，是选用栽培草莓干燥匍匐茎样品，其流式细胞 分析结果显示其荧光值为872748，CV值为3.03％。

如图8所示，是选用栽培草莓干燥根尖样品，其流式细胞分 析结果显示其荧光值为882152，CV值为1.84％。

实施例8

本实施例是为了验证本发明的方法普遍适用于各类植物干燥 组织测定，具体的处理方法同实施例1一致，区别在于选用栽培 草莓的各类干燥组织作为测试样品，具体的测试结果如下所示。

如图9所示，是选用三叶草的干燥叶片(经过硅胶干燥的叶 片)样品，其流式细胞分析结果显示其荧光值为1009494，CV值 为3.30％。

如图10所示，是选用水杨梅的干燥叶片(经过硅胶干燥的叶 片)样品，其流式细胞分析结果显示其荧光值为410217，CV值为 3.94％。

如图11所示，是选用喜旱莲子草的干燥叶片(经过硅胶干燥 的叶片)样品，其流式细胞分析结果显示其荧光值为1622145， CV值为4.74％。

如图12所示，是选用小飞蓬的干燥叶片(经过硅胶干燥的叶 片)样品，其流式细胞分析结果显示其荧光值为307825，CV值为 3.61％。

如图13所示，是选用龙葵的干燥叶片(经过硅胶干燥的叶片) 样品，其流式细胞分析结果显示其荧光值为959260，CV值为 4.79％。

如图14所示，是选用桔子的干燥叶片(经过硅胶干燥的叶片) 样品，其流式细胞分析结果显示其荧光值为375486，CV值为 4.46％。

如图15所示，是选用大豆的干燥叶片(经过硅胶干燥的叶片) 样品，其流式细胞分析结果显示其荧光值为1186217，CV值为 3.97％。

如图16所示，是选用红花檵木的干燥叶片(经过硅胶干燥的 叶片)样品，其流式细胞分析结果显示其荧光值为1385057，CV 值为4.67％。

如图17所示，是选用构树的干燥叶片(经过硅胶干燥的叶片) 样品，其流式细胞分析结果显示其荧光值为360781，CV值为 4.29％。

如图18所示，是选用三叶鬼针草的干燥叶片(经过硅胶干燥 的叶片)样品，其流式细胞分析结果显示其荧光值为1074118， CV值为3.02％。

本发明中所描述的具体实施例仅是对本发明精神作举例说 明。本发明所属技术领域的技术人员可以对所描述的具体实施例 做各种各样的修改或补充或采用类似的方式替代，但并不会偏离 本发明的精神或者超越所附权利要求书所定义的范围。

尽管对本发明已作出了详细的说明并引证了一些具体实施 例，但是对本领域熟练技术人员来说，只要不离开本发明的精神 和范围可作各种变化或修正是显然的。