基于切刻内切酶的网状滚环扩增体系及其应用

摘要

本发明涉及一种基于切刻内切酶的网状滚环扩增体系及其应用，该扩增体系在现有第二代超分支滚环扩增技术的基础上，通过引入一种特殊的核酸内切酶，即切刻内切酶Nb.BsrDI，从而发展出第三代滚环扩增技术，即网状滚环扩增技术（NRCA）。本发明的网状滚环扩增所产生的荧光信号强度随靶标DNA浓度的增加而增加，并且荧光信号强度明显高于线性滚环扩增和超分支滚环扩增，检测限达到0.1fM。该技术与第一代线性滚环扩增和第二代超分支滚环扩增相比，不仅保持了原有技术在操作性、使用成本、扩增所需时间等方面的优势，而且在原有技术基础上进一步实现了信号放大，从而为超低丰度核酸样本的分析检测提供了良好的技术条件，其应用前景非常广阔。