(2R,3S,4R,5R)-5-(6-(环戊基氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲基硝酸酯的无水多晶型物及其制备方法

摘要

本发明提供了新颖的无水多晶型物形式的[(2R,3S,4R,5R)-5-(6-(环戊基氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)]甲基硝酸酯(化合物A)。本发明还提供了制备无水多晶型形式的化合物A的方法。

说明书

发明领域

本发明提供了新颖的无水多晶型物形式的[(2R,3S,4R,5R)-5-(6-(环戊基氨基)-9H-嘌呤-9-基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)]甲基硝酸酯(化合物A)，并且提供了其制备方法。

发明背景

化合物A由以下结构表示

化合物A是选择性腺苷A₁受体激动剂，且特别用于治疗眼内压升高，如PCT/US2010/033112(公开为WO2010/127210)所述。

可以使用第7,423,144号美国专利、US 20090062314和WO2010/127210(均整体通过援引并入本文)中描述的方法来制备化合物A。

许多药物固体可以以不同的物理形态存在。多晶现象的特征可以在于药物物质以两种或多种在晶格中具有不同的分子排列和/或构象的结晶相形式存在的能力。

药物固体的多晶型物可以具有不同的物理性质和固态化学性质。通常使用药物物质的最稳定的多晶型形式，因为其具有从一种多晶型形式转变成另一种多晶型形式的最低可能性。

化合物的特定结晶形式可具有与其他多晶型形式不同的物理性质，并且此类性质可以影响化合物的物理化学和药物加工，特别当以工业规模制备或使用化合物时。此类差异可以改变化合物的机械处理性质，例如在固体制剂赋形剂的混合物中或悬浮液制剂内的分散。在一些情况中，多晶型物还已知具有不同的化学稳定性曲线和固体物质的不同溶解度。由于这些可能的多晶型物-特定的生化差异，新的多晶型形式的发现提供了改进药物成品的制造或特性的新机遇。

此外，药物物质的新多晶型形式可以呈现不同的熔点、吸湿性、稳定性、溶解度和/或溶出率、结晶度、结晶性质以及配制处理特性，这些属于在制备可有效给药的药剂方面需要考虑的诸多性质，它们可实质性地影响药品的品质。此外，监管机构要求对药物剂型中活性组分(若其处于固态)的多晶型形式的明确的认知、表征和控制。

申请人正在研发化合物A以用于降低眼内压。申请人已发现诸多化合物A的多晶型物，其可用于控制某些期望的制剂性质。特别地，已鉴定、分离和表征了两种无水形式。

发明概述

本文提供了化合物A的无水多晶型物及其制备方法。

因此，在第一方面，提供了化合物A的分离的无水多晶型物A1，其具有以下晶体数据，

C₁₅H₂₀N₆O₆；

Mr＝380.37；

单斜晶系；

P2₁空间群；

a＝5.546(2)

b＝7.107(2)

c＝21.929(9)

V＝858.8(5)以及

Z＝2。

在另一方面，提供了化合物A的分离的多晶型物A1，其在如表3所示的反射角2-θ处具有基本等值的峰。

在一实施方案中，提供了如上定义的A1形式的分离的多晶型物，其至少约75％不含其他多晶型形式。

在一实施方案中，提供了如上定义的分离的多晶型物，其至少约80％不含其他多晶型形式。

在一实施方案中，提供了如上定义的分离的多晶型物，其至少约90％不含其他多晶型形式。

在一实施方案中，提供了如上定义的分离的多晶型物，其至少约95％不含其他多晶型形式。

在一实施方案中，提供了如上定义的分离的多晶型物，其至少约99％不含其他多晶型形式。

在一实施方案中，提供了如上定义的分离的多晶型物，其100％不含其他形式。

在另一方面，提供了获得多晶型物A1的方法，所述方法包括获取化合物A并由乙醇重结晶的步骤。

在另一方面，提供了获得多晶型物A1的方法，所述方法包括获取化合物A并由异丙醇、乙酸乙酯或乙酸异丙酯重结晶的步骤。

在另一方面，提供了获得多晶型物A1的方法，所述方法包括获取化合物A并由1,4-二氧六环、2-甲氧基乙醇、3-甲基-2-丁酮、甲基乙基酮或1,2-二甲氧基乙烷重结晶的步骤。

在另一方面，提供了药物组合物，其包含如上定义的多晶型物A1且还包含一种或多种选自载体、赋形剂、稀释剂、添加剂、填充剂、表面活性剂、粘合剂、抗微生物防腐剂、增粘剂以及缓冲剂的药学可接受的成分。

在一实施方案中，配制包含如上定义的多晶型物A1的药物组合物以用于眼部给药。

在其他方面，还提供了治疗需要选择性腺苷A₁激动剂的个体的方法，所述方法包括向需要其的个体给予治疗有效量的如上定义的多晶型物A1。

在其他方面，还提供了降低个体的眼内压的方法，所述方法包括向需要其的个体的眼睛局部给予治疗有效量的如上定义的多晶型物A1。

因此，在另一方面，提供了化合物A的多晶型物A2，其具有以下晶体数据，

C₁₅H₂₀N₆O₆；

Mr＝380.37；

正交晶系；

P2₁2₁2₁空间群；

a＝5.51796(17)

b＝7.14615(29)

c＝42.9738(29)以及

V＝1694.55(14)

因此，在另一方面，提供了化合物A的多晶型物A2，其在如表5所示的反射角2-θ处具有基本等值的峰。

在一实施方案中，提供了如上定义的分离的多晶型物，其至少约75％不含其他形式。

在一实施方案中，提供了如上定义的分离的多晶型物，其至少约80％不含其他形式。

在一实施方案中，提供了如上定义的分离的多晶型物，其至少约90％不含其他形式。

在一实施方案中，提供了如上定义的分离的多晶型物，其至少约95％不含其他形式。

在一实施方案中，提供了如上定义的分离的多晶型物，其至少约99％不含其他形式。

在一实施方案中，提供了如上定义的分离的多晶型物，其100％不含其他形式。

在另一方面，提供了获得多晶型物A2的方法，所述方法包括将化合物A置于液体介质中并加热至约40度且持续至少9小时的步骤。

在一实施方案中，将化合物A微粉化，然后添加到水性液体介质中。在一实施方案中，将化合物A微粉化成尺寸小于50微米的颗粒。

在一实施方案中，所述方法包括加热至约40摄氏度且持续15小时的步骤。

在一实施方案中，液体介质适于提供化合物A的水性悬浮液。在另一实施方案中，液体介质包含表面活性剂和防腐剂。在一实施方案中，表面活性剂选自聚山梨醇酯80、聚山梨醇酯60、聚山梨醇酯40、聚山梨醇酯20、聚乙二醇40硬脂酸酯、泊洛沙姆、泰洛沙泊、POE35和蓖麻油。在一实施方案中，防腐剂选自季铵盐、苯扎氯铵、溴化十六烷基三甲铵(cetrimide)、氯丁醇、山梨酸和硼酸。

在另一方面，提供了药物组合物，其包含如上定义的多晶型物A2且还包含一种或多种选自载体、赋形剂、稀释剂、添加剂、填充剂、表面活性剂、粘合剂、抗微生物防腐剂、增粘剂以及缓冲剂的药学可接受的成分。

在一实施方案中，配制包含如上定义的多晶型物A2的药物组合物以用于眼部给药。

在其他方面，还提供了治疗需要选择性腺苷A₁激动剂的个体的方法，所述方法包括向需要其的个体给予治疗有效量的如上定义的多晶型物A2。

在其他方面，还提供了降低个体的眼内压的方法，所述方法包括向需要其的个体的眼睛局部给予治疗有效量的如上定义的多晶型物A2。

前述简要概述泛泛地描述了本发明某些实施方案的特征和技术优势。本发明以下详述将描述其他技术优势。当与任何附图和实例一起考虑时，从本发明的详述会更好地理解被认为是本发明特性的新颖的特征。然而，本文提供的附图和实例旨在有助于例示本发明或协助对本发明进行理解，且不旨在成为对本发明范围的限定。

附图简述

图1：示出化合物A-A1形式的分子结构和原子编号方案。

图2：示出化合物A-A1形式晶体的堆积排列和H-键。

图3：示出化合物A-A2形式的分子结构和原子编号方案。

图4：示出化合物A-A2形式晶体的堆积排列和H-键。

图5：示出所观察到的本文所述的化合物A的形式的x-射线粉末光谱的叠加。较低的灰线表示A1形式，而较高的黑线表示A2形式。

图6：示出A1形式(黑色)和A2形式(灰色)的分子的叠加。

图7：示出在40℃下多晶型物A1随时间转变成多晶型物A2的XRPD数据图。

发明详述

本发明的实施方案提供了化合物A的无水多晶型物。

定义

使用粗线和虚线表示化学键，从而描述本文的一些化学结构。这些粗线和虚线描述了绝对立体化学。粗线表示取代基在其连接的碳原子的平面之上，而虚线表示取代基在其所连接的碳原子的平面之下。

本文所用的术语“有效量”是指选择性腺苷A1激动剂的量，其有效地(i)治疗或预防IOP升高；或(ii)降低人类的IOP。

术语“个体”旨在包括可遭受与IOP升高有关的疾病、病症或病状或者受其折磨的生物体，例如原核生物和真核生物。个体的实例包括哺乳动物，例如，人类、狗、牛、马、猪、绵羊、山羊、猫、小鼠、兔、大鼠和转基因非人类动物。在某些实施方案中，个体是人类，例如遭受IOP增高、处于遭受IOP增高的风险、或潜在能够遭受IOP增高的人类。在另一实施方案中，所述个体为细胞。

术语“治疗(treat)”、“经治疗的(treated)”、“治疗(treating)”或“治疗(treatment)”包括减弱或缓解至少一种与正在治疗的状态、病症或疾病相关或由其诱发的症状。在某些实施方案中，治疗包括诱导IOP升高，随后活化本发明的化合物，其转而会减弱或缓解至少一种与IOP升高相关或由其诱发的症状。例如，治疗可以是病症的一种或多种症状的减弱或病症的完全消除。

术语“约”或“基本”通常表示给定的值或范围的20％以内、更优选10％以内且最优选5％以内。

制备方法和研究

化合物A的合成

以下方案1示出制备化合物A的反应方案。详细地描述化合物A的制备。

计算约40gms化合物A的生产批次的详细量。所述的生产可以按比例放大。

步骤1：将1升乙醇装入反应器并快速搅拌。向反应器中的乙醇添加0.3kg的6-氯腺苷和0.267kg的环戊胺。将反应器加热至回流，持续2小时，然后冷却至8℃，并在这些条件下保持12小时。从母液滤除结晶的物质，并用0.33L乙醇洗涤固体滤饼以产生湿滤饼。将湿滤饼干燥以获得N6-环戊基腺苷(0.249kg)。

步骤2：二甲氧基丙烷用于保护糖单元上的2’和3’羟基。将3.7升丙酮装入反应器并快速搅拌。向反应器中的丙酮(3.7L)添加0.249kg的N6-环戊基腺苷；0.386kg的二甲氧基丙烷和0.148kg的对甲苯磺酸。将反应器加热至40℃，持续1.5小时。然后，通过在40℃的真空蒸馏来除去溶剂，从而制备干燥的粗制物质。然后，向所获得的干燥的粗制物质添加3.1L乙酸乙酯。然后，将溶液冷却至6℃，并滴加0.5N NaOH溶液，直至达到pH为8。其等同于约1.55L的NaOH溶液。在完成相分离之后，向有机相添加0.78L的20％饱和氯化钠溶液。再添加0.78L的20％饱和氯化钠溶液。搅拌该两相30分钟。分离基于乙酸乙酯的有机相，并用0.157kg硫酸钠干燥并用1L乙酸乙酯洗涤。将溶液过滤，并在55℃真空蒸发成油状物。向剩余的油状物添加1.2L己烷和0.3L乙酸乙酯。将反应混合物加热至55℃，持续3小时，然后将溶液冷却至5℃并在该温度下保持12小时。过滤固体，并用0.625L的乙酸乙酯:己烷(1:4)溶液洗涤所得的滤饼。在干燥固体后，获得140g的2’,3’-亚异丙基-N⁶-环戊基腺苷。

步骤3：用硝酸乙酸酐混合物实施步骤2获得的2’,3’-亚异丙基-N⁶-环戊基腺苷的5’位的硝化。将0.127L二氯甲烷装入反应器并快速搅拌。添加140g2’,3’-亚异丙基-N⁶-环戊基腺苷，并将反应溶液冷却至-20℃。以保持反应混合物低于-15℃(已发现-23℃至-18℃的温度范围是优选的靶标范围)的速率添加由在0.420L乙酸酐中的0.127L65％硝酸组成的0.547L溶液。如果温度升高，则发现产生杂质。历时约0.5小时添加所述酸混合物。将混合物搅拌20分钟，然后在0.35L的冷饱和碳酸氢钠溶液中淬灭。通过向后一水溶液添加固体碳酸氢钠来将pH修正为7。分离有机相，并用0.4L二氯甲烷萃取水层。将有机相合并，并用0.6L饱和氯化钠溶液洗涤。然后，将含2’,3’-亚异丙基-N⁶-环戊基腺苷-5’-硝酸酯的有机相分离以用于以下步骤4。

步骤4：由于其不稳定性，在不纯化的情况下直接水解受保护的2’,3’-亚异丙基-N⁶-环戊基腺苷-5’-硝酸酯。将来自步骤3的溶液在20℃真空蒸发成油状物。将油状物冷却至低于2℃。添加1.95L三氟乙酸:水(3:1)溶液。将反应混合物搅拌0.5小时并使其边搅拌边升温至室温。此后，制备碳酸氢钠溶液并将其冷却至低于10℃。向反应混合物添加碳酸氢钠溶液以淬灭反应。向反应容器添加乙酸乙酯，调节pH，将有机层后处理(worked up)并用硫酸钠干燥。然后，用硫酸镁和脱料器(material stripper)干燥所得的产物溶液数次以形成粗制化合物A。

然后，由乙醇重结晶粗制化合物A。将粗制化合物A物质溶于乙醇，然后浓缩至一半体积以结晶36小时。此后，通过过滤分离所得的产物以提供化合物A。¹H-NMR(DMSO-d₆):δ1.49–1.58(m,4H),1.66–1.72(m,2H),1.89–1.94(m,2H),4.12–4.17(m,1H),4.28–4.33(m,1H),4.48(bs,1H),4.65–4.87(m,3H),5.5(d,J＝5.1Hz,1H),5.63(d,J＝5.7Hz,1H),5.91(d,J＝5.1Hz,1H),7.75(d,J＝7.5Hz,1H),8.17(bs,1H),8.30(s,1H)；MS(ES⁺):m/z381.35(M+1)；对C₁₅H₂₀N₆O₆分析计算:C,47.37；H,5.30；N,22.10；实测:C,47.49；H,5.12,N,21.96。

方案1：

多晶型物A1和A2的制备

在制备化合物A的眼用溶液期间，在颗粒生长尺寸和稳定性方面观察到可变性。由于所述可变性，已努力确立一种或多种多晶型物是否可被分离和纯化，从而克服粒径生长和稳定性方面的可变性。

结晶研究：

用于结晶实验的化合物A物质得自基本如以上步骤1至4所述的那样制备的CMC批次，随后发现其包含约67％A1形式和约33％A2形式的混合物。

A1形式

使用用于确立如图1和图2所示的A1形式的晶体和分子结构的溶剂乙酸乙酯、乙酸异丙酯、MEK和2-甲氧基乙醇，以下表1详述的多个缓慢蒸发结晶产生晶体。还已发现上述步骤4获得的化合物A的由乙醇的第二次重结晶也产生基本纯形式的多晶型物A1。使用乙醇的进一步重结晶的关键之处在于不使来自大气的水分冷凝在化合物A的湿滤饼上。这是因为在水的存在下可能形成杂质。优选的由乙醇的重结晶过程则在室温下于冷冻干燥器中干燥重结晶的化合物。

表1.缓慢蒸发结晶实验的结果

*为溶解物质，将混合物升温至60℃并在该温度下保持约30分钟。之后，使其在室温(RT)下结晶。MEK：甲基乙基酮。DMF：二甲基甲酰胺

将约3-8mg化合物A置于8ml小瓶中，向该小瓶添加400μL表1详述的溶剂。在室温下进行实验。将每一8ml小瓶置于20ml小瓶中，然后将20ml小瓶封闭，并在20ml小瓶的盖中刺穿小孔。将小瓶置于室温下。从乙酸乙酯溶液直接收集尺寸约0.35×0.25×0.05mm的单一无色晶体(片形)，并放置在测角仪上。在室温下(296K)进行测量。最终晶体学数据如以下表2所示。

表2：化合物A-A1形式的晶体数据和结构精修

在装备有使用MO K辐射的Oxford Cryostream Liquid NitrogenCooler的Nonius Kappa-CCD衍射仪上进行单晶测量。在296K下，采集A1形式的数据，直至θ＝27.5°，产生5868个反射。使用HKLScalepack(Otwinowski & Minor1997)进行数据归约，并使用Denzo andScalepak(Otwinowski & Minor1997)在θ范围1-27.5°内从2569个之中获得晶胞参数。通过SHELXZ-97(Sheldrick,G.M.1997a)使用直接法解析结构。

除了单x-射线晶体学数据，在室温下，还通过锗单色仪使用CuK_α1辐射(1.54016)，在D8 Advance衍射仪上采集粉末衍射数据。在固态LynxEye检测器上，从2.5-32.5°θ以0.016°θ阶跃(step)来采集数据。在直径为0.5mm的8mm长毛细管中测量样品。

结晶无水多晶型物A1形式的特征优选在于具有在约17.5、20.5、21.2、22.7、24.8、33.2和42.1+0.2度2θ处的峰的PXRD谱。

在表3中，列出强度、2θ和D间距以及HKL指数。因为强度和2θ值取决于所用的辐射，因此应用D间距。所用的辐射是CuK_α1。2

表3.A1形式(P2₁)的粉末衍射的HKL、2θ、D间距和强度

A2形式

尝试的结晶试验或技术没有一个产生适于单晶分析的A2形式的晶体，所述结晶试验或技术包括(i)溶剂的缓慢蒸发，(ii)非极性溶剂蒸汽扩散入化合物A的液体溶液，以及(iii)极性溶剂和具有缓慢冷却速率的温度受控结晶。在一些实验中，例如，在温度受控结晶中，使用乙醇/水的各种混合物，获得非常纤细的针状物。在大部分情况中，晶体看起来是孪晶，然而这些晶体没有一个产生足以获得适当晶胞参数的反射。然而，将这些晶体用于尝试X-射线粉末衍射。因此，获得了X-射线粉末衍射图样(XRPD)，随后尝试从粉末数据解析A2形式的结构。第一步骤是获得适当晶胞。在多次试验后，获得两种可能的晶胞设定。二者均是正交晶系的，尽管具有不同的布拉维面心。这些晶胞之一是面心晶胞C，而另一个是初基P。基于晶胞C可转换成更小晶胞(即P)的事实，后者被精修，并尝试解析具有该构型设定的结构。另外，对于P晶胞，不对称单元降低至1个分子，对于C，其涉及2个对称的独立分子。对于晶胞精修，使用Pawley拟合。基于高分辨率X-射线衍射图样的Pawley拟合用于检验样品的纯度。Pawley拟合的主要目的是从完整图样中精修晶胞参数。在Pawley方法中，线形是分析的，约束它们的宽度以遵循Caglioti定律，其使用在大部分Rietveld衍生软件中所定义的三个可精修参数U、V、W。在该项目中用于计算的软件是具有以下拟合标准的Topas：

Y_o,m和Y_c,m是分别在数据点m处观察到的数据和计算的数据。

M数据点的数量，

P参数的数量，

W_m数据点m的加权，其计数统计由w_m＝1/σ(Y_o,m)²给定，其中σ(Y_o,m)是Y_o,m的误差

$>\left(\begin{array}{c}{R}_{\exp }=\sqrt{\frac{M-P}{\Sigma w_m{Y}_{o,m}^2}};R_{\mathrm{wp}}=\sqrt{\frac{\Sigma w_m{(Y_{o,m}-Y_{c,m})}^2}{\Sigma w_m{Y}_{o,m}^2}};R_p=\sqrt{\frac{\Sigma |Y_{o,m}-Y_{c,m}|}{\Sigma Y_{o,m}}}\\ \mathrm{GOF}={\mathrm{chi}}^2=\frac{R_{\mathrm{wp}}}{R_{\exp }}=\sqrt{\frac{\Sigma w_m{(Y_{o,m}-Y_{c,m})}^2}{M-P}}\end{array}\right)$>

表4：化合物A-A2形式的Pawley拟合的参数

对于结构解析，采用Topas3.0软件(Bruker-AXS,2005)，使用模拟退火法。基于Z矩阵建立模型，并且多个扭转角设定为自由变量。获得的模型不进行精修，但晶胞除外。基于几何结构和H-键方案来包括H-原子。图3示出A2形式的化合物A的分子结构，并且图4示出晶体堆积和H-键方案。

使用高通量XRPD设置来获得XRPD图样。将板置于装备有Hi-Star面积检测器的Bruker GADDS衍射仪上。对于长d-间距使用Silver Behenate且对于短d-间距使用Corundum，从而校正XRPD平台。

在室温下，在1.5度至41.5度的2-θ区域内(其是多晶型物形式之间XRPD图样最具有区别性的部分)，使用单色CuKα辐射，实施数据采集。在2θ范围(对于第一框架，1.5度≤2θ≤21.5度，且对于第二框架，19.5度≤2θ≤41.5度)内，对于每一框架通过30秒的暴露时间，采集每一孔的衍射图样。不向该XRPD图样应用背景减除或曲线修匀。在XRPD分析期间使用的载体材料对X-射线是透明的，并且仅稍微促成背景。

结晶无水多晶型物A2形式的特征优选在于具有在约16.9、18.1、19.1、20.8、21.3、22.0、22.8、23.8、24.9、25.0、29.1、29.8、34.2和35.8+0.2度2θ处的峰的PXRD光谱。

在表5中，列出强度、2θ和D间距以及HKL指数。因为强度和2θ值取决于所用的辐射，因此应用D间距。所用的辐射是CuK_α1。2

表5.A2形式(P2₁2₁2₁)的粉末衍射的HKL、2θ、D间距和强度

控制多晶型物形式的形成

已发现可以控制特定多晶型形式的形成。如上所述，可以通过由乙醇重结晶或在缓慢蒸发条件下重结晶来主要获得A1形式。还已经确立，在40℃下，悬浮在用于眼部递送而配制的水性悬浮液中的化合物A颗粒的熟化(ripening)或熟化(curing)在相对短的时间内由多晶型物A1形成多晶型物A2。将水性悬浮液样品在40℃保持至多108小时，并通过粒径测量、XRPD和显微照相术来监测。粒径测量表明平均尺寸在15小时内显著增加。之后，尺寸有效保持恒定，直至108小时。XRPD分析指出在40℃下，多晶型物含量从约74％A1比26％A2(在零时)变成0％A1比100％A2(在108小时)。图7示出随时间的A1形式至A2形式的转变。另外，在XRPD图样中反应了习性改变外加A2的生长，并可通过与c轴垂直的晶格内平面的所选峰强度之差异来监测，其随晶体习性改变而改变强度。强度差异改变直至9小时，此后保持恒定，表明在该时间内完成了习性改变。显微照片示出悬浮液中颗粒的刀片状或片状晶体习性。

当在2-8℃(即，在长时间储存期间限制化合物A的分解所需的温度)储存含A1多晶型物形式的化合物A的水性悬浮液眼部制剂时，在6至12个月的时段内，悬浮颗粒的习性缓慢改变。在该时间内，悬浮药物的小的不规则颗粒变成棒状习性，并且许多颗粒的长度沿最长尺寸超过100微米。这些改变使得更加难以通过超声处理和摇动来再悬浮化合物A颗粒以形成用于给药的均匀悬浮液。

已发现当适于眼部递送药物的水性悬浮液在5℃或25℃下储存6个月时段时，A1形式到A2形式的转变限制了颗粒习性、尺寸或多晶型物含量的任何进一步改变。另外，熟化的水性悬浮液更易于通过摇动而再悬浮，即，用于眼部药物递送的悬浮液制剂的有利特性。

在Cilas1180粒径分析仪上进行粒径分析。所用的参数是液体模式，样品折射率＝1.62(使用Cargille浸油测定)，液体折射率＝1.333(水的值)，30秒测量，180rpm搅拌，120rpm泵循环，无超声处理，5次重复测量。

配制实施例

根据“化合物A的合成”，如上所述那样制备一批化合物A的无菌物质。然后，用至多40kGray的γ辐射来使所得的化合物A物质灭菌，然后配制成以下水性制剂：

水性制剂

以0.152％、0.30％、0.61％、0.91％、2.42％、0.46％、0.76％(W/V)制备多种浓度的化合物A制剂批次以提供递送每滴制剂不同量的化合物A的能力。例如，一滴0.152％(W/V)化合物A将递送50mcg/滴，0.30％(W/V)则将递送100mcg/滴，向右直至0.76％(W/V)递送250mcg/滴。然后，将制剂批次加热以经历熟化步骤，并使化合物A的A1多晶型物形式转变成化合物A的A2多晶型物形式。通过将制剂批次置于40℃下48小时来实施熟化步骤，然后使制剂批次返回到稳定性研究所期望的长期储存条件。

研究制剂批次中的两种(即，0.46％(W/V)的化合物A和0.76％(W/V))的长期稳定性以及在5摄氏度和25摄氏度下6个月的粒径生长。研究制剂批次中的两种(即，0.46％(W/V)的化合物A和0.76％(W/V))的长期稳定性以及在5摄氏度下18个月的粒径生长。结果在表6中列表显示。

表6

从表6的结果可以看出，在测试的条件下，两种制剂批次的粒径分布随时间是稳定的。结果还表明对于在5摄氏度下18个月的制剂，杂质的量和pH保持稳定，而对于在25摄氏度下保持6个月的制剂，杂质缓慢增加。

已详细地描述本发明及其实施方案。然而，本发明的范围不旨在受限于本说明书所述的任何过程、制造、物质组合物、化合物、手段、方法和/或步骤的特定实施方案。在不背离本发明的主旨和/或必要特征的情况下，可以对所公开的物质进行多种修改、替换和变化。因此，本领域普通技术人员由公开内容会容易地认识到，可根据本发明相关实施方案应用实施与本文所述实施方案基本相同的功能或实现与本文所述实施方案基本相同的结果的此后的修改、替换和/或变化。因此，以下权利要求旨在包括在其范围内的对本文公开的过程、制造、物质组合物、化合物、手段、方法和/或步骤的修改、替换和改变。