具有抗菌和抗病毒活性的氯高铁血红素之新衍生物

摘要

本发明涉及通式(I)之氯高铁血红素的新衍生物并且涉及其生产以及作为抗菌剂和/或抗病毒剂的用途(包括在药物组合物的配制中)。基于氯高铁血红素衍生物之新的抗菌剂和抗病毒剂的优点包括其生物相容性和生物降解性及其对于对人有危险之抗性细菌和广泛传播病毒的高度有效性，以及无毒性。

说明书

技术领域

本发明涉及生物有机化学领域并涉及新的氯高铁血红素(гемина) 衍生物的获得以及抗菌剂和抗病毒剂及基于其的组合物的开发。

背景技术

已知人和动物中许多危险的疾病由细菌和病毒引起。细菌引起例如霍 乱、伤寒症、副伤寒、瘟疫、白喉、土拉菌病、布氏菌病以及结核、败血 症(血中毒)、麻风、梅毒等流行病。在动物中，细菌引起马鼻疽、炭疽、 结核以及其他疾病。对抗微生物的策略包括抗菌剂(包括抗生素)的施用。 然而，许多已知的药剂具有缺点，例如毒性、对蛋白水解酶的敏感性、溶 血作用以及抗菌活性的不充足范围。抗性菌株的持续发展(即菌株对已知 抗菌剂的抗性)是严重的问题。因此，此时例如，对许多β-内酰胺抗生素 有抗性的耐甲氧西林葡萄球菌(метициллинрезистентный  стафилококк，MRSA)目前是最危险的。耐甲氧西林葡萄球菌在人中引 起难以治疗的疾病，例如血液疾病和肺炎。其已经适应了甲氧西林、双氟 沙星(дифлоксацина)和苯唑西林(оксациллина)。所述病原体经常与 医院感染(внутрибольничные инфекции)相关。每年超过18,000名美 国患者由于耐甲氧西林葡萄球菌感染而死亡。

在这种情况下，寻找新的抗菌剂(包括对抗性菌株有活性的那些)仍 是极为感兴趣的。

病毒也引起不同的疾病，例如流行性感冒、急性呼吸病毒感染、病毒 性肝炎等。单纯疱疹病毒是已知最有代表性的疱疹病毒(疱疹病毒科)， 因为它们几乎感染了每个人。存在两种类型的单纯疱疹病毒——HSV-1 (口腔疱疹)和HSV-2(生殖器疱疹)。疱疹病毒可影响神经系统、眼睛 和内脏器官。在美国，疱疹病毒是急性病毒性脑炎最普遍的原因。1型单 纯疱疹病毒在超过95％的疱疹脑炎病例中是病原体。阿昔洛韦 (ацикловир)是公知的针对疱疹病毒的药剂。然而，因为已经存在阿昔 洛韦抗性的疱疹病毒毒株，所以对于新的抗疱疹剂的寻找仍然是目前的兴 趣。

已知氯高铁血红素具有针对金黄色葡萄球菌(золотистого  стафилококка)的抗微生物活性[Y.Nitzan，H.Ladan，S.Gozansky和Z. Malik，Characterization of hemin antibacterial action on Staphylococcus  aureus，FEMS Microbiol.Lett.，1987，Vol.48(3)，pp.401-406]。然而氯高铁 血红素作为抗菌剂的用途被其水不溶性、溶血活性以及短期抗菌作用所限 制。

进行了努力以通过将氯高铁血红素与氨基酸、肽及其衍生物缀合以对 其进行修饰来产生生物活性的衍生物。修饰氯高铁血红素的羧基基团来制 备对应的酰胺产生了所研究的通式(I)化合物

其中R₁和R₂相同或不同，表示-OH或者氨基酸或肽部分，且其中R₁和 R₂不能同时为-OH。Meⁿ⁺为Fe²⁺或Fe³⁺；Hal^-为F^-、Cl^-、Br^-或I^-，[RU 专利号2250906，在2005年4月27日公开]。已经发现这些衍生物表现出 多种生物活性，包括核酸酶[RU专利号2404191，在2010年11月20日 公开][RU专利号2250906，在2005年4月27日公开]、过氧化物酶、 催化[RU专利号2404191，在2010年11月20日公开]以及杀病毒活性[RU 专利号2404191，在2010年11月20日公开]。

在已经由本发明者之前合成的氯高铁血红素衍生物中，存在表现出抗 微生物(包括抗菌)活性的许多特定化合物[RU专利2415868C1，在2011 年4月10日公开]。这些化合物主要表现为氯高铁血红素与氨基酸酯和抗 微生物肽的缀合物，其中特别地已发现R₁＝R₂＝-GlyOMe、 R₁＝R₂＝-NHCH₂CH₂OH、SerOMe或-Glu(ArgOMe)-ArgOMe的氯高铁血 红素衍生物具有抗菌活性。然而，发现只有少数氯高铁血红素衍生物对于 抗性细菌菌株有效，所述衍生物也几乎不溶于水且活性较低。

现在已经发现了新的氯高铁血红素衍生物，其表现出抗菌和抗病毒活 性且具有改良的性质，特别地，具有针对MRSA菌株的活性。

发明内容

本发明涉及通式(I)的新的氯高铁血红素衍生物

或者其可药用盐，其中R₁和R₂均为ArgNH₂、Arg(NO₂)OMe、GlyNH₂、 SerNH₂、SerOH、GlyOH、Glu(OH)OH、Glu(ArgNH₂)ArgNH₂、 Glu(SerOMe)SerOMe、Glu(NHCH₂CH₂OH)NHCH₂CH₂OH、 Glu(SerNH₂)SerNH₂、Glu(GlyNH₂)GlyNH₂、Glu(GlyOMe)GlyOMe、 ArgSerOMe、ArgSerNH₂、ArgSerOH、SerArgOMe、SerArgNH₂或 SerArgOH，Meⁿ⁺为Fe²⁺或Fe³⁺；Hal^-为F^-、Cl^-、Br^-或I^-。

此外，本发明涉及基于上述化合物的药物组合物，以及这些化合物在 制备具有抗菌和/或抗病毒活性之药物中的用途。

附图说明

图1示出要求保护的和已知的通式1化合物的CLogP的比较。

发明详述

本发明者已发现上面通式(I)的新化合物比之前已知的类似物更有 效。

通式(I)之新氯高铁血红素衍生物的优点在于其高水溶性和高抗菌 效力(也包括针对抗性菌株)。

要求保护的新化合物与之前已知化合物的不同在于其针对危险的革 兰氏阳性细菌金黄色葡萄球菌No.5MRSA和金黄色葡萄球菌No.3797 MRSA以及革兰氏阴性的大肠杆菌4300抗性菌株的活性。已经出人意料 地发现具有未保护羧基基团或对应的酰胺作为取代基的通式I氯高铁血 红素衍生物表现出较高的抗菌活性。因此，在同样的条件下，化合物II、 IV和X表现出比在RU专利号2415868C1(在2011年4月10日公开) 中公开的其对应的酯更高的抗菌活性。

同时，新化合物的毒性保持较低。应注意包含酰胺化之羧基基团的化 合物比包含羧基或酯基的其类似物在水中具有更高的溶解度。这似乎是由 于这些化合物之取代基的较高亲水性，其通过辛醇-水分配系数表征。

本文已经获得并测试了以下新的式(I)化合物：

化合物(II)：R₁＝R₂＝-ArgNH₂；

化合物(III)：R₁＝R₂＝-Arg(NO₂)OMe；

化合物(IV)：R₁＝R₂＝-GlyNH₂；

化合物(V)：R₁＝R₂＝-SerNH₂；

化合物(VI)：R₁＝R₂＝-SerOH；

化合物(VII)：R₁＝R₂＝-GlyOH；

化合物(VIII)：R₁＝R₂＝-Glu(OH)OH；

化合物(IX)：R₁＝R₂＝-Glu(ArgNH₂)ArgNH₂；

化合物(X)：R₁＝R₂＝-Glu(SerOMe)SerOMe；

化合物(XI)：R₁＝R₂＝-Glu(NHCH₂CH₂OH)NHCH₂CH₂OH；

化合物(XII)：R₁＝R₂＝-Glu(SerNH₂)SerNH₂；

化合物(XIII)：R₁＝R₂＝-Glu(GlyNH₂)GlyNH₂；

化合物(XIV)：R₁＝R₂＝-Glu(GlyOMe)GlyOMe；

化合物(XIX)：R₁＝R₂＝-ArgSerOMe；

化合物(XX)：R₁＝R₂＝-ArgSerNH₂；

化合物(XXI)：R₁＝R₂＝-SerArgOMe：

化合物(XXII)：R₁＝R₂＝-ArgSerOH；

化合物(XXIII)：R₁＝R₂＝-SerArgNH₂；

化合物(XXIV)：R₁＝R₂＝-SerArgOH。

氯高铁血红素衍生物中的所有氨基酸都为L-氨基酸，除非另有指明。

包含ArgSer序列的二肽为已知化合物。因此，ArgSerOMe、 ArgSerNH₂和ArgSerOH的CAS号分别为147139-57-9、121185-78-2和 70921-62-9。二肽SerArgNH₂和SerArgOH也已知分别为CAS 1008793-14-3和13261-11-5。之前还描述了经保护的二肽衍生物 BocSer(Bzl)ArgOH，CAS88263-54-1。本文用作中间体以制备氯高铁血 红素衍生物的其他经保护的二肽衍生物Z₃ArgSerOMe、Z₃ArgSerNH₂、 Z₃ArgSerOH、BocSer(Bzl)ArgOMe、BocSer(Bzl)ArgNH₂和二肽 SerArgOMe是新的。这些肽通过肽化学方法合成，特别地，通过经活化 的N-氧琥珀酰亚胺酯(оксисукцинимидных эфиров)的方法。在钯催 化剂的存在下通过水解切割苄氧羰基(Z)和苄基(Bzl)保护基团，并用 氯化氢饱和的甲醇除去叔丁氧羰基(Boc)保护基团。

式(I)化合物可以以与可药用酸(例如乳酸、酒石酸、柠檬酸、盐 酸或其他酸)的盐形式或者以其羧基与碱金属或碱土金属离子(例如钠、 钾和钙)或与例如可药用碱(例如氨和乙醇胺)的盐的形式使用。

上述式(I)化合物对细菌有活性，特别地针对对已知抗菌剂有抗性 的细菌有活性，所述细菌例如葡萄球菌属(Staphylococcus)(例如，金黄 色葡萄球菌(Staphylococcus aureus))、杆菌属(Bacillus)(例如，枯草 芽孢杆菌(Bacillus subtilis))、肠球菌属(Enterococcus)(例如，粪肠球 菌(Enterococcus faecalis))、微球菌属(Micrococcus)(例如，藤黄微球 菌(Micrococcus luteus))和埃希氏菌属(Escherichia)(例如，大肠杆 菌(Escherichia coli))。优选地，上面列出的细菌为枯草芽孢杆菌BKM  B-501、金黄色葡萄球菌209P、粪肠球菌BKM B-871或藤黄微球菌BKM  Ac-2230菌株。更优选地，上面提到的化合物具有针对金黄色葡萄球菌 No.25923ATCC、金黄色葡萄球菌No.100KC、金黄色葡萄球菌No.5 MRSA、金黄色葡萄球菌No.3797MRSA、表皮葡萄球菌(Staphylococcus  epidermidis)No.533、粪肠球菌No.559、屎肠球菌(Enterococcus faecium) No.569或大肠杆菌4300的抗菌活性。

此外，根据本发明的化合物对病毒有活性，特别地，对疱疹病毒(例 如1型和/或2型单纯疱疹病毒)有活性。优选地，根据本发明的化合物 表现出针对1型单纯疱疹病毒EC毒株和/或2型单纯疱疹病毒G毒株(No. VR-734ATCC)的活性。

上面提到的式(I)化合物和/或其盐可用作药物组合物(例如，以固 体、半固体或液体形式)的活性剂，所述组合物与有机或无机载体或者赋 形剂一起配制。

组合物中的活性剂可与常规无毒的和可药用载体一起配制，所述载体 适于制备溶液剂、片剂、丸剂、胶囊剂、栓剂、乳剂、混悬剂、喷剂、吸 入剂、滴剂、软膏剂或任何其他剂型。可使用水、葡萄糖、乳糖、阿拉伯 胶、明胶、淀粉、三木糖醇镁(триксилит магния)、滑石粉、玉米淀粉、 尿素、聚乙二醇和其他适用于制备固体、软制剂或液体制剂作为载体。本 文中，可使用稳定剂、增稠剂、着色剂和调味剂作为添加剂。

式(I)化合物以足够提供抗菌和/或抗病毒作用的量包含在组合物中。

在制备单位剂型中，与载体一起配制之活性剂的量可根据治疗下的接 受者和治疗剂的特定施用途径而变化。

例如，当本发明的化合物作为溶液用于注射时，溶液中的活性剂含量 范围为按重量计0.001％至1％。化合物的稀释物可为0.9％的氯化钠溶液、 蒸馏水、注射用奴佛卡因(новокаина)溶液、林格氏溶液和葡萄糖溶液。 当通式(I)化合物用作片剂或栓剂时，所述化合物的量的范围为每单位 剂型1.0mg至100.0mg。对于片剂和栓剂，药物赋形剂可为任何药学上 合适的基质(основу)。

因为通式(I)化合物为水溶性和亲脂性的，所以其可用作水溶液、 醇溶液、软膏、乳膏等。

此外，本发明涉及基于上述式(I)化合物的抗菌和抗病毒治疗剂， 并且涉及用于治疗由上述细菌和/或病毒引起之疾病的方法，所述方法包 括向有此需要的患者施用所述式(I)化合物或其药物组合物。

所述方法旨在用于治疗哺乳动物患者，特别是人。式(I)化合物的 推荐剂量为0.01mg/kg至10mg/kg。

因为式(I)化合物具有抗菌和抗病毒活性，所以其同样可用作防腐 剂和/或消毒剂(或用于其中)。这些药剂可制备为例如含有多种溶剂的溶 液，所述溶剂例如水和低级醇(例如1-丙醇或2-丙醇)。

本发明的另一个方面涉及用于制备上述新的式(I)化合物的方法。

使用肽合成的常规方法通过羧基活化的氯高铁血红素衍生物与氨基 组分反应来制备式(I)化合物。

氨基组分可为肽、氨基酸(主要为α-氨基酸)或其类似物，特别地 为ArgNH₂、Arg(NO₂)OMe、GlyNH₂、SerNH₂、SerOH、GlyOH、 Glu(OH)OH、NH₂CH₂CH₂OH、GlyOMe和SerOMe以及二肽衍生物，例 如ArgSerOMe、ArgSerNH₂、ArgSerOH、SerArgOMe、SerArgNH₂和 SerArgOH。所述反应优选地在DMF中进行。

优选地，用氯高铁血红素双-N-氧琥珀酰亚胺酯对氨基组分的氨基基 团(例如，羧基保护之氨基酸的α-氨基)进行酰化。所述反应在-15℃至 +30℃的温度下通过使用三乙胺于DMF中进行0.5至2小时。在三乙胺和 多至10％的水存在下于DMF中用未保护的氨基酸进行类似的反应。此 外，通过在TBTU偶联剂的存在下向与谷氨酸(глутаминовой кислотой) 缀合的氯高铁血红素直接添加COOH基团经保护的氨基酸和肽的衍生物 来制备与分支肽缀合的氯高铁血红素。

因此，提供了基于氯高铁血红素衍生物的新的有效抗菌剂和抗病毒 剂。其优点在于生物相容性、生物降解性、针对抗性细菌菌株提高的活性、 低毒性以及无副作用，这使得它们有用作治疗剂的前景。

此外，本发明将通过不旨在以任何方式限制其范围的实施例进行说 明。

注释

HSV-1＝1型单纯疱疹病毒

HSV-2＝2型单纯疱疹病毒

IR＝红外光谱

GI＝生长抑制

MBC＝最小杀菌浓度

MIC＝最小抑制浓度

SAA＝表面活性剂

TLC＝薄层色谱

CLF＝氯仿

CPE＝致细胞病变效应

A＝光密度

Boc＝叔丁氧羰基

Bzl＝苄基

DMF＝N，N’-二甲基甲酰胺

DMSO＝二甲基亚砜

Et₃N＝三乙胺

MeOH＝甲醇

MH＝Mueller-Hilton培养基

MRSA＝耐甲氧西林金黄色葡萄球菌

OMe＝甲酯

PEG＝聚乙二醇

TBTU＝2-(1H-苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲四氟硼酸盐

TCID₅₀＝在单层中引起50％细胞死亡的组织致细胞病变剂量

Z＝苄氧羰基。

以下实施例举例说明了要求保护的发明。

使用的试剂为L-氨基酸及其衍生物，除了甘氨酸之外均购自Bachem (德国)和Reanal(匈牙利)；Et₃N购自(Fluka，德国)。中间体(即经 保护的二肽Z₃ArgSerOMe、Z₃ArgSerNH₂和Z₃ArgSerOH、 BocSer(Bzl)ArgOMe、BocSer(Bzl)ArgNH₂以及BocSer(Bzl)ArgOH)通 过肽化学的方法制备；其物理化学特征在表1中给出。所有溶剂都是无水 的，除了用于从水溶液中提取的那些。通过TLC在Kieselgel 60 F₂₅₄板 (Merck，德国)上于下列系统中检验所制备化合物的身份：(1)氯仿- 甲醇-乙酸-水(5∶4∶0.5∶0.5)，(2)氯仿-甲醇-乙酸-水(5∶4∶0.2∶0.2)以及 (3)氯仿-甲醇(9∶1)。通过紫外下的荧光用氯-联甲苯胺试剂进行色谱。

使用基质辅助激光解吸/电离(TOF MALDI)在Ultraflex(Bruker， 德国)飞行时间质谱仪上获得高分辨质谱；使用2，5-二羟基苯甲酸基质 (матрицы)。

在Magna 750(Nicolet，美国)傅立叶变换分光计上记录IR光谱。

在Jasco UV/VS 7800型(日本)分光光度计上记录电子光谱。

用于制备化合物II-V、XIX-XXIV的一般方法

将0.033mL(0.266mmol)Et₃N添加至氨基组分(0.26mmol)的 1.5mL DMF悬液中，并在室温下搅拌3分钟。向所得溶液中添加氯化血 红素IX6，7-为-N-氧琥珀酰亚胺酯(0.100g，0.118mmol)的5mL DMF 溶液，并在室温下搅拌30分钟。通过TLC在系统(3)中监测所述反应。 在真空下将反应物料浓缩至1.0mL。对于水不溶性化合物III、IV和V， 将10mL 0.01M的盐酸添加至经浓缩的反应物料，分离残留物并用水洗 涤至中性pH。残留物在干燥器中经氯化钙减压干燥1天。对于水溶性化 合物II和XIX-XXIV，添加甲醇中的2.55M盐酸以达到中性pH，随后 添加在饱和NaCl水溶液中的0.01M盐酸。分离残留物并在干燥器中经 氯化钙减压干燥1天，溶于1mL无水甲醇，并在过滤不溶的NaCl后在 装有Sephadex LH20的柱(20×2cm)上用甲醇作为洗脱剂纯化。合并含 有目标产物的级分；在真空下除去溶剂。目标产物在干燥器中经氯化钙减 压干燥1天。

实施例1

6，7-双-(酰胺N^α-精氨酰)-氯化血红素(IX)(II)

产量：0.1020g(70％)；FT-IR光谱，v，cm^-1，KBr压片：1656(酰 胺I)、1534(酰胺II)。质谱(MALDI)，m/z：926[M-Cl^-]⁺。电子光谱， DMSO，λ_max，nm，(ε×10^-3)：403.8(92.60)、499.2(6.3643)、623.6(1.553)。

实施例2

6，7-双-(甲酯N^α-(N^G-硝基)精氨酰)-氯化血红素(IX)(III)

产量：0.083g(65％)、Rf0.26(1)、0.71(2)。FT-IR光谱，v，cm^-1， KBr压片：1737(CO酯(cл.зф.))、1648(酰胺I)、1539(酰胺II)。质 谱，m/z：[M]⁺1001[M-NO₂-Cl^-]⁺956[M-2NO₂-Cl^-]⁺。电子光谱，DMSO， λ_max，nm，(ε×10^-3)：404(1.163)、500.2(0.986)、623.4(0.540)。

实施例3

6，7-双-(酰胺N^α-甘氨酰)-氯化血红素(IX)(IV)

产量：0.092g(68％)。FT-IR光谱，v，cm^-1，KBr压片：1654(酰 胺I)、1536(酰胺II)。质谱(MALDI)，m/z：728[M-Cl^-]⁺。电子光谱， DMSO，λ_max，nm，(ε×10^-3)：402.0(101.2)、504.2(7.417)、628.6(4.201)。

实施例4

6，7-双-(酰胺N^α-丝氨酰)-氯化血红素(IX)(V)

产量：0.105g(72％)。FT-IR光谱，v，cm^-1，KBr压片：1651(酰 胺I)、1530(酰胺II)。质谱(MALDI)，m/z：788[M-Cl^-]⁺。电子光谱， DMSO，λ_max，nm，(ε×10^-3)：404.8(207.12)、499.2(6.547)、623.4(3.603)。

实施例5

6，7-双-[(甲酯N^α-L-丝氨酰)-L-精氨酰]-氯化血红素IX(XIX)

产量：30mg(65％)、Rf0.43(5)。FT-IR光谱，v，cm^-1，KBr压 片：3338(NH)、1740(C＝O酯)、1653(酰胺I)、1545(酰胺II)。质 谱(MALDI)：[M-Cl^-]⁺1131.5。电子光谱，DMSO，λ_max，nm，(ε×10^-3)： 401.8(63)、585(3.18)。

实施例6

6.7-双-[(酰胺N^α-L-丝氨酰)-L-精氨酰]-氯化血红素IX(XX)

产量：27mg(58％)、Rf0.25(6)。FT-IR光谱，v，cm^-1，KBr压 片：3338(NH)、1652(酰胺I)、1544(酰胺II)。质谱(MALDI)：[M-Cl^-]⁺1100。电子光谱，DMSO，λ_max，nm，(ε×10^-3)：400.8(47)、581.6(3.34)。

实施例7

6，7-双-[(甲酯N^α-L-精氨酰)-L-丝氨酰]-氯化血红素IX(XXI)

产量：22mg(55％)、Rf0.6(9)。FT-IR光谱，v，cm^-1，KBr压片： 3326(NH)、1738(C＝O酯)、1627(酰胺I)、1577(酰胺II)。质谱(MALDI)： [M-Cl^-]⁺1132。电子光谱，DMSO，λ_max，nm，(ε×10^-3)：404.8(61)、495.6 (3.44)、619.6(1.9)。

实施例8

6，7-双-[(N^α-L-丝氨酰)-L-精氨酰]-氯化血红素IX(XXII)

产量：30mg(65％)、Rf0.18(5)。FT-IR光谱，v，cm^-1，KBr压 片：3396(NH)、1645(酰胺I)、1550(酰胺II)。质谱(MALDI)：[M-Cl^-]⁺1102.5。电子光谱，DMSO，λ_max，nm，(ε×10^-3)：404(76)、495(5.11)、 610(3.1)。

实施例9

6，7-双-[(酰胺N^α-L-精氨酰)-L-丝氨酰]-氯化血红素IX(XXIII)

产量：27mg(58％)、Rf0.3(9)。FT-IR光谱，v，cm^-1，KBr压片： 3365(NH)、1655(酰胺I)、1542(酰胺II)。质谱(MALDI)：[M-Cl^-]⁺ 1100。电子光谱，DMSO，λ_max，nm，(ε×10^-3)：402.2(65.3)、496.4(4.0)、 618.2(2.1)。

实施例10

6，7-双-[(N^α-L-精氨酰)-L-丝氨酰]-氯化血红素IX(XXIV)

产量：22mg(55％)、Rf0.2(9)。FT-IR光谱，v，cm^-1，KBr压片： 3340(NH)、1659(酰胺I)、1550(酰胺II)。质谱(MALDI)：[M-Cl^-]⁺1102。电子光谱，DMSO，λ_max，nm，(ε×10^-3)：403.8(146)、498.4(8.1)、 620.4(4.9)。

表1 经保护的中间体二肽的物理化学特征

式 R_f，(色谱系统编号) 质谱[M⁺] BocSer(Bzl)Arg 0，5(7) 466 BocSer(Bzl)Arg 0，2(10) 452 BocSer(Bzl)Arg 0，2(11) 453 Z₃ArgSerNH₂0，29(4) 662，7 Z₃ArgSerOH 0，29(4) 663，1 Z₃ArgSerOMe 0，64(4) 677，7

用于制备经保护的肽(表1)的一般方法

将对应氨基组分(0.7mmol)和三乙胺(0.83mmol)在2mL DMF 和0.3mL水的混合物溶液添加至0.64mmol BocSer(Bzl)ONSu或 Z₃ArgONSu的3mL DMF溶液。反应混合物在室温下搅拌1小时。在真 空下除去溶剂；残留物溶解于10mL正丁醇中并用3×10mL饱和NaCl 水溶液萃取。有机层经无水硫酸钠干燥并过滤。在真空下除去溶剂，残留 物在干燥器中经氯化钙减压干燥，然后溶解于1mL无水甲醇中，并过滤 盐。在真空下除去溶剂。如果需要，通过重结晶或硅胶柱色谱纯化目标化 合物。

用于制备化合物VI-VIII的一般方法

将0.130mL(对于丝氨酸和甘氨酸)或0.260mL(对于谷氨酸以及 精氨酸和组氨酸的二盐酸盐)三乙胺添加至氨基酸(0.945mmol)的0.5mL 水溶液或悬液。将所得溶液添加至含氯高铁血红素6，7-双-N-氧琥珀酰亚 胺酯(100mg，0.118mmol)的6mL DMF中，并搅拌30分钟。在真空 下将反应物料浓缩至1mL。对于水不溶性化合物VI-VIII，将10mL盐 酸水溶液(0.01M)添加至经浓缩的反应物料；分离残留物并用水洗涤升 至中性pH。所述残留物在干燥器中经氯化钙减压干燥1天。

实施例11

6，7-双-(N^α-丝氨酰)-氯化血红素(IX)(VI)

产量：84.7mg(87％)。FT-IR光谱(KBr，v_max/cm^-1)：1727(COOH)、 1656(C＝O酰胺I)、1530(C＝O酰胺II)。质谱(MALDI)，m/z：790 [M-Cl^-]⁺。电子光谱，DMSO，λ_max，nm，(ε×10^-3)：403(188)、497(8.51)、 622(4.49)。

实施例12

6，7-双-(N^α-甘氨酰)-氯化血红素(IX)(VII)

产量：77.7mg(86％)。FT-IR光谱(KBr，v_max/cm^-1)：3294(NH)、 1724(COOH)、1656(C＝O酰胺I)、1543(C＝O酰胺II)。质谱(MALDI)， m/z：730.1[M-Cl^-]⁺。电子光谱，DMSO，λ_max，nm，(ε×10^-3)：404(126)、 498(8.02)、622(4.48)。

实施例13

6，7-双-(N^α-谷氨酰)-氯化血红素(IX)(VIII)

产量：88mg(82％)。FT-IR光谱(KBr，v_max/cm^-1)：3286(NH)、 172(COOH)、1644(C＝O酰胺I)、1544(C＝O酰胺II)。质谱(MALDI)， m/z：874[M-Cl^-]⁺。电子光谱，DMSO，λ_max，nm，(ε×10^-3)：404(76.7)、 496(8.79)、615(6.02)。

用于制备化合物IX-XIV的一般方法

将0.148g(0.462mmol)TBTU和0.086mL(0.462mmol)Et₃N添 加至含0.070g(0.077mmol)6，7-双-N^α-谷氨酰-氯化血红素(IX)的5mL DMF中。将所得溶液搅拌30分钟。向0.462mmol氨基组分盐酸盐的1.5 mL DMF悬液中添加0.086mL(0.462mmol)Et₃N，并在室温下搅拌3 分钟，然后将所得溶液添加至预活化的6，7-双-N^α-谷氨酰-氯化血红素(IX) 溶液。将反应物料搅拌1天并在真空下浓缩至1.0mL。对于水不溶性化 合物(XI和XIV)，将10mL的0.1M盐酸水溶液添加至经浓缩的反应物 料，分离残留物并用水洗涤至中性pH。残留物在干燥器中经氯化钙减压 干燥1天。对于水溶性化合物(IX、X和XIII)，将0.01M在饱和NaCl 水溶液中的盐酸添加至经浓缩的反应物料。分离残留物并在干燥器中经氯 化钙减压干燥1天，并溶解于1mL无水甲醇中，在过滤不溶的NaCl后， 在装有Sephadex LH20的柱(20×2cm)上用甲醇作为洗脱剂纯化。合并 含有目标产物的级分；在真空下除去溶剂。目标产物在干燥器中经氯化钙 减压干燥1天。

实施例14

6，7-双-[(二酰胺(Ди-амид)N^α-L-精氨酰)-L-谷氨酰]-氯化血红素IX(IX)

产量：0.082g(71％)。FT-IR光谱，v，cm^-1，KBr压片：1658(酰 胺I)、1541(酰胺II)。质谱(MALDI)，m/z：1495[M-Cl^-]⁺。电子光谱， DMSO，λ_max，nm，(ε×10^-3)：396.8(137.83)、505.6(13.404)、623.2(6.419)。

实施例15

6，7-双-[(二甲酯N^α-L-丝氨酰)-L-谷氨酰]-氯化血红素IX(X)

产量：0.068g(67％)。FT-IR光谱，v，cm^-1，KBr压片：1747(CO 酯)、1646(酰胺I)、1542(酰胺II)。质谱(MALDI)，m/z：1313[M-Cl^-]⁺。 电子光谱，DMSO，λ_max，nm，(ε×10^-3)：404.6(124.25)、500(7.434)、 622.2(4.032)。

实施例16

6，7-双-[(二-2-羟乙基酰胺)-L-谷氨酰]-氯化血红素IX(XI)

产量：0.054g(64％)。FT-IR光谱，v，cm^-1，KBr压片：1654(酰 胺I)、1547(酰胺II)。质谱(MALDI)，m/z：1046[M-Cl^-]⁺。电子光谱， DMSO，λ_max，nm，(ε×10^-3)：403.2(107.83)、502.3(9.041)、635.2(6.591)。

实施例17

6，7-双-[(二酰胺N^α-L-丝氨酰)-L-谷氨酰]-氯化血红素IX(XII)

产量：0.074g(76％)。FT-IR光谱，v，cm^-1，KBr压片：1651(酰 胺I)、1537(酰胺II)。质谱(MALDI)，m/z：1218[M-Cl^-]⁺。电子光谱， DMSO，λ_max，nm，(ε×10^-3)：398.6(89.41)、497.4(4.162)、619.4(2.124)。

实施例18

6，7-双-[(二酰胺N^α-L-甘氨酰)-L-谷氨酰]-氯化血红素IX(XIII)

产量：0.077g(87％)。FT-IR光谱，v，cm^-1，KBr压片：1652(酰 胺I)、1539(酰胺II)。质谱(MALDI)，m/z：1098[M-Cl^-]⁺。电子光谱， DMSO，λ_max，nm，(ε×10^-3)：404.4(88.0)、497.8(5.184)、621.8(2.728)。

实施例19

6，7-双-[(二甲酯N^α-L-甘氨酰)-L-谷氨酰]-氯化血红素IX(XIV)

产量：0.072g(78％)。FT-IR光谱，v，cm^-1，KBr压片：1738(CO 酯)、1652(酰胺I)、1535(酰胺II)。质谱(MALDI)，m/z：1158[M-Cl^-]⁺。 电子光谱，DMSO，λ_max，nm，(ε×10^-3)：404.4(88.0)、497.8(5.184)、 621.8(2.728)。

实施例20

通式(I)化合物的亲水性

通过使用软件ACDLabs8.0计算以下化合物的辛醇-水分配系数 (CLogP)：要求保护的式(I)化合物，特别是化合物I、II、IV、V、IX、 X、XII、XIII、XIV以及已知的通式I化合物，其中R₁和R₂为ArgOMe (XV)、Glu(ArgOMe)ArgOMe(XVI)、GlyOMe(XVII)、SerOMe(XVIII) [RU专利2415868C1，在2011年4月10日公开]。

如下图1，用NH₂-基团取代-OMe基团导致氯高铁血红素衍生物亲水 性的改善。因此，与已知化合物相比，要求保护的新的通式I化合物具有 改善的亲水性。

实施例21

通式I化合物的抗菌活性，包括抗性细菌菌株

实施例21.1

测定了化合物针对以下菌株的抗菌活性：革兰氏阳性细菌，例如金黄 色葡萄球菌209P、粪肠球菌BKM B-871、藤黄微球菌BKM Ac-2230、 枯草芽孢杆菌BKM B-501，以及革兰氏阴性细菌，例如铜绿假单胞菌 (Pseudomonas aeruginosa)PAO1和大肠杆菌KM MGU C-600。BKM 菌株从俄罗斯科学院微生物生物化学和生理研究所的全俄罗斯微生物保 藏中心获得。菌株金黄色葡萄球菌209P从莫斯科国立大学生物学院之微 生学系的微生物保藏中心获得，且铜绿假单胞菌PAO1从俄罗斯科学院生 物有机化学研究所的微生物保藏中心获得。

表征抗菌活性的主要参数是最小抑制浓度(MIC)和最小杀菌浓度 (MBC)。MIC为受试化合物在液体培养基中完全抑制细菌繁殖的最低 浓度。MBC为引起所有细胞死亡的最低浓度。

使用改进的程序通过用化合物的系列稀释物抑制液体培养基中的培 养物生长来量化MIC[Amsterdam，D.，1966."Susceptibility testing of  antimicrobials in liquid media，″pp.52-111.见Loman，V.，编 Antibiotics in laboratory medicine，第四版，Williams and Wilkins， Baltimore]。

在37℃、100％湿度下且在搅拌下，于MH液体培养基 (Mueller-Hinton培养基：牛肉汤的干提取物，4g/L；淀粉，1.5g/L；酪 蛋白水解产物，17.5g/L；Sigma-Fluka目录号70192)上培养细菌并测试。 将处于指数生长期的培养物(在解冻后传代4至7次内)用于测试。

所有受试化合物都吸收595nm的光，所述波长用于评估细菌培养物 生长。因此，在估计细菌悬液的光密度中根据每种化合物在孔中的浓度来 对吸收进行校正。使用下面的等式，在波长595nm下由每个孔中测量的 光密度(A)得到用化合物孵育细胞20小时后的细菌生长抑制(GI)百 分比：

GI_i＝[(A_ct-A_c0)-(A_it-A_i0)]×100/(A_ct-A_c0)，   (1)

其中下标具有以下含义：i表示孔编号，c表示未加入受试化合物的含有 细菌的对照孔，0是指一旦向孔中加入受试化合物立即进行的测量，t是 指加入化合物之后20小时进行的测量。

受试化合物的实验抗菌活性的测定方案如下。迅速解冻在液氮中保存 的冷冻小瓶，其具有含7％DMSO的培养基中的测试菌株培养物，用100 μL细胞悬液接种1.5mL新鲜MH培养基。细胞在37℃生长1天，并以 150rpm在定轨摇床上摇动。如下验证菌株的形态特征并且不存在外来细 菌的污染：(a)接种到加入琼脂的(15g/L琼脂)MH培养基上，并观察生 长菌落的形状和颜色；以及(b)在配有40×物镜的显微镜(Mikmed-2， LOMO，俄罗斯)下，检查特性形态特征。此外，在搅拌下于37℃在1mL 液体MH培养基中培养细菌。每天重新接种细胞。从第3次重新接种开 始，将细胞培养物用于测试中，并在第6次重新接种时结束。

为了测试，将5μL处于静止生长期的细菌悬液转移至1mL无菌MH 培养基并孵育直至达到指数生长期(3-5小时，37℃，以150rpm搅拌)。 为了估计微生物浓度，在595nm波长处测量所得细菌培养物的光密度 (A)。将由96孔板中200-μL份的细胞悬液测得的A＝0.2的值(并进行 培养基吸收校正)设定成对应于使用的两种菌株的4×10⁸细胞/mL。考虑 到细胞浓度测量，用MH培养基稀释悬液到5×10⁴至1×10⁵细胞/mL的 浓度，并以100μL/孔的量转移至无菌96孔板。然后，向细胞添加受试化 合物，并使得板的孔中为这些化合物的2倍系列稀释物。所述系列中化合 物的最大浓度是10^-4M；最小浓度是1.6×10^-6M。对于每种化合物，一式 两份地进行抗菌活性研究，并对结果求平均值。

使用的对照是：100μL不含添加剂的细菌培养物(4个孔)；添加1％ DMSO或水的细菌培养物，其体积与具有最大浓度之受试化合物的孔中 的体积相同(4个孔)；以及100μL不含细菌且不含受试化合物的无菌 MH培养基，其用作板中偶然污染的对照(4个孔)。

一旦加入化合物，就立即使用Uniplan(Picon，俄罗斯)板光度计测 量每个孔中的A_i0，并测量对照孔中的A_c0(这两个值是通过等式(1)计 算所必需的)。在37℃下孵育板20小时，并以150rpm搅拌。然后，测 量每个孔中的A_it和对照孔中的A_ct，并由等式(1)计算细菌生长抑制。 MIC测定为生长抑制是100％时的受试化合物的最低浓度。

在MBC测定中，将来自其中受试化合物浓度等于MIC、MIC×2和 MIC×4之孔的培养基转移至含有加入琼脂之MH培养基(15g/L琼脂) 的培养皿中，并使用无菌刮铲将其均匀地铺展在培养皿区域上。将培养皿 孵育2天。MBC测定为在培养皿上无菌落生长时的受试化合物的最低浓 度。

表2 通式(I)化合物针对革兰氏阳性细菌枯草芽孢杆菌BKM B-501、 金黄色葡萄球菌209P、粪肠球菌BKM B-871和藤黄微球菌BKM Ac-2230 的抗菌活性特征

＊＊-未达到MIC。值为使用的化合物最大浓度。

n/t-未测试

表2中的比较化合物为已知的通式(I)化合物，其中R₁＝R₂＝ArgOMe (XV)、Glu(ArgOMe)ArgOMe(XVI)、GlyOMe(XVII)、SerOMe(XVIII) [RU专利2415868C1，在2011年4月10日公开]。因此，化合物II、III、 IV、V、IX、X和XIV在微摩尔浓度范围内抑制了革兰氏阳性细菌金黄 色葡萄球菌的生长(表2)。这些化合物在浓度高达25μM下还表现出杀 菌活性。

藤黄微球菌在亚微摩尔浓度下对所有化合物高度敏感(在一些情况下 MIC＜0.8μM)。

与藤黄微球菌或金黄色葡萄球菌相比，粪肠球菌(平均)对受试化合 物有更高抗性。化合物II和V具有针对粪肠球菌最高的效力：MIC＜7μM。

事实上，所有受试化合物都对革兰氏阳性细菌枯草芽孢杆菌有活性。

实施例21.2

还测定了化合物针对以下细菌菌株的特异活性：例如金黄色葡萄球菌 No.25923 ATCC(美国典型培养物保藏中心)；金黄色葡萄球菌No.100 KC；表皮葡萄球菌No.533、粪肠球菌No.559、屎肠球菌No.569、金黄 色葡萄球菌No.5(MRSA)、金黄色葡萄球菌No.3797(MRSA)。金黄 色葡萄球菌在商业可得的胰酶大豆琼脂(Trypticase Soy Agar，BBL)干 培养基上培养。粪肠球菌在商业可得的哥伦比亚琼脂基质(Columbia Agar  Base，BBL)干培养基上培养。这些培养基通过高压灭菌在121℃下灭菌 15分钟。细菌接种物恒定且为5×10⁵CFU/ml(10⁵CFU/0.2ml)。对于水 溶性化合物，以每孔15μL的量向第二到第八个孔添加溶剂(水)，然后 向第一个孔添加30μL在水中的受试化合物储备溶液，其浓度为1×10³M， 并通过系列2倍稀释将浓度调节至0.007×10³M，从每个孔取出10-μL份， 向每个孔添加190μL细菌培养物(10⁵CFU)，对于DMSO可溶性化合物， 以每孔10μL的量向第二至第八个孔添加溶剂(DMSO)，然后向第一个 孔添加20μL在水中的受试化合物储备溶液，其浓度为5×10³M，并通过 系列2倍稀释将浓度调节至0.039×10³M。从每个孔取出2-μL份，向每个 孔添加198μL细菌培养物(10⁵CFU)。

对照包含不含受试化合物的孔(培养物生长对照)。此外，使用营养 培养基和溶剂的纯度对照。在恒温器中于36℃下孵育板24小时。

通过目视比较在受试化合物存在和不存在的情况下微生物如何生长 来评价培养物生长。将MIC设定为等于抑制细菌培养物生长之受试药剂 的最后稀释度。

表3 通式I化合物针对革兰氏阳性细菌金黄色葡萄球菌25923、金黄 色葡萄球菌100KC、表皮葡萄球菌533、粪肠球菌559、万古霉素 (ванкомицин)抗性的屎肠球菌569以及革兰氏阴性万古霉素抗性细菌 大肠杆菌4300的抗菌活性特征(MIC，μM)

表3中的比较化合物为已知的通式(I)化合物，其中R₁＝R₂＝ArgOMe (XV)或GlyOMe(XVII)[RU专利2415868C1，在2011年4月10日公开]。

新化合物对革兰氏阳性细菌金黄色葡萄球菌25923、金黄色葡萄球菌 100KC和表皮葡萄球菌533有效，其中MIC值不超过13μM。一些氯高 铁血红素之二肽衍生物的水溶性和抗菌活性高于另一些氯高铁血红素衍 生物的水溶性和抗菌活性。因此，化合物XIX针对表皮葡萄球菌533的 抗菌活性高出一个数量级(MIC＝1.3μM)。

要求保护的化合物针对粪肠球菌559表现出的抗菌活性稍低。

观察到化合物II(MIC＝3.12μM)、IV(MIC＝50μM)、V(MIC＝ 25μM)、IX(MIC＝6.25μM)和XIX-XXI(MIC＝6.25μM)针对万古 霉素抗性的屎肠球菌569的显著抗菌活性。

化合物II(MIC＝41.6μM)和IX(MIC＝16.6μM)对革兰氏阴性 的大肠杆菌4300有活性。

化合物II(MIC＝41.6μM)和IX(MIC＝16.6μM)对革兰氏阴性 的大肠杆菌有活性。

表4 通式I化合物针对甲氧西林抗性革兰氏阳性细菌金黄色葡萄球 菌5号、金黄色葡萄球菌3797的抗菌活性特征(MIC，μM)

从表4中可见，新化合物具有针对MSRA菌株的高抗菌活性，其中 MBC范围是0.78至13μM。

实施例22

氯高铁血红素衍生物针对疱疹病毒科病毒的抗病毒活性

本研究中使用1型单纯疱疹病毒(病毒学科学研究所的微生物保藏中 心，EC毒株)、2型单纯疱疹病毒G毒株(No.VR-734ATCC)和人巨细 胞病毒毒株AD169(No.VR-538ATCC)。1型和2型单纯疱疹病毒在Vero 细胞中培养。所述细胞在Sanyo MCO-15AC气流恒温器(37℃，5％CO₂) (东京，日本)中于MEM Eagle生长培养基(MEM，BioloT， St-Petersburg，1.3.3)中孵育，所述培养基补充有10％胎牛血清(BioloT， St-Petersburg，1.1.12)。在起始接种物中的接种剂量为2×10⁵细胞/ml或 者2×10⁴细胞/孔。在不含血清的MEM培养基(维持培养基)中于相同 条件下培养单纯疱疹病毒。起始病毒滴度(титры)为10⁷TCID₅₀/ml。

对于DMSO可溶性制剂，制备在DMSO中浓度为10mM的储备溶 液。对于水溶性制剂，制备的储备溶液具有与细胞培养的MEM培养基(最 低必需培养基(Minimal Essential Medium))中相同的浓度。为控制细胞 毒性(见下)，储备溶液在培养基中稀释至100μM的浓度且在MEM培 养基中进行制剂的10倍系列稀释(对于DMSO可溶性化合物，在含有 3％DMSO的MEM培养基中)。在抗菌作用的研究中使用以下浓度的制 剂：如果未发现毒性，则100μM制剂的浓度为100、10和1μM；如果检 测到了毒性，则100μM制剂的浓度为10、1和0.1μM。对于两种类型的 单纯疱疹病毒，使用阿昔洛韦(10μg/ml)作为参考制剂以控制病毒模型 的有效性。

为研究抗病毒活性，以0.1ml/孔的量向具有细胞单层的板孔中添加 制剂。为补偿发生在之后添加病毒中的制剂浓度之降低，使用了两倍浓度 的化合物(即对于毒性和非毒性浓度的100μM制剂分别为200、20和2 或20、2和0.2μM)，孵育1小时，然后用检验的每孔0.1ml病毒以1、 10和100TCID₅₀(50％组织感染剂量)的剂量感染。

经感染的细胞孵育48小时(37℃，5％CO₂)，并在Leica DMIL HC 显微镜下评估单层情况，考虑致细胞病变作用的性质，其对于病毒和毒性 浓度之制剂的作用来说显著不同。病毒特异性致细胞病变作用表现在细胞 尺寸、其圆形化(округлении)和从底物中分离的增加。这些形态特征 显著不同于受到高浓度检验制剂之毒性作用的细胞。后者获得纺锤样形 状，失去与单层临近细胞的接触，且其边界变得更清楚。

使用4分体系对细胞中病毒特异性变化的强度进行半量化：0-未检 测到CPA(致细胞病变作用)；1-病毒感染单层高达25％；2-25％至 50％；3-50％至75％；以及4-75％至100％。与对照值相比，根据化合 物在板孔中降低致细胞病变作用之表现的能力评价其抗病毒活性。与对照 值的差异为1分和更大就认为是显著的。

表5 要求保护的通式(I)化合物针对1型和2型单纯疱疹病毒的 抗病毒活性：在不同浓度的氯高铁血红素衍生物(μM)中病毒CPA的表 现(得分)

¹-与不合制剂对照孔的差异：CPA表现减少了1分或更多。

从表5可以看出，大多数经检验的所要求保护化合物在亚微摩尔和微 摩尔浓度下对1型单纯疱疹病毒有活性。

实施例23

新化合物的毒性

新化合物基本上是无毒的；在12至50μM浓度下观察到1％至5％ 白细胞的死亡。

经检验的新化合物也不引起从人血液红细胞的显著血红蛋白释放(在 浓度高达50μM下观察到不超过2至3％的释放)。

得到的结果证实所要求保护的化合物用于制备基于其的无毒生物相 容性抗菌剂和抗病毒剂以及用于预防和治疗由多种微生物引起之疾病的 潜力。

因此，与已知化合物[RU专利号2415868C1，在2011年4月10日公 布；RU专利2404191C2，在2010年11月20日公布]相比，要求保护的化 合物的特征在于高水溶性，在较低浓度下表现出针对革兰氏阳性和革兰氏 阴性抗性细菌菌株二者的抗菌活性，以及针对1型和2型单纯疱疹病毒的 抗病毒活性，这增加了其作为抗感染剂的潜在和实用价值。

实施例24

根据本发明的组合物可用作包含所提出要求保护之化合物作为活性 剂的消毒制剂、防腐制剂和药物制剂(例如以固体、半固体或液体形式)， 所述化合物与适于肌内、静脉内、鼻内、经口、舌下、吸入和直肠内施用 的有机或无机载体或者赋形剂组合。可将活性剂与常规使用的无毒可药用 载体一起引入组合物，所述载体适于制备溶液剂、片剂、丸剂、胶囊剂、 栓剂、乳剂、混悬剂、喷剂、吸入剂、滴剂、软膏剂或其他药物剂型。载 体可为水、葡萄糖、乳糖、阿拉伯胶、明胶、淀粉、三木糖醇镁、滑石粉、 玉米淀粉、尿素、聚乙二醇以及其他适于制备固体、软制剂和液体制剂的 载体。本文中可使用稳定剂、增稠剂、着色剂和调味剂作为添加剂。

通式(I)化合物以足够提供期望之抗菌和/或抗病毒作用的量包含于 组合物中。

在制备单位剂型中，与载体一起配制之活性剂的量可根据受到治疗的 接受者和治疗剂的特定施用途径而变化。

例如，当本发明的化合物作为溶液用于注射时，溶液中的活性剂含量 范围是按重量计0.001％至1％。化合物的稀释剂可为0.9％的氯化钠溶液、 蒸馏水、注射用奴佛卡因溶液、林格氏溶液和葡萄糖溶液。当通式(I) 化合物用作片剂或栓剂时，所述化合物量的范围为每单位剂型1.0mg至 100.0mg。对于片剂和栓剂，药物赋形剂可为任何药物合适的基质。

实施例剂量

A.明胶胶囊

如下配制待引入胶囊的粉末：

对应于通式(I)的一种化合物 1至50mg 氧化镁 50mg 淀粉 100至200mg

将上面列出的成分混合，并将所述混合物以151至285mg的量引入 硬明胶胶囊中。

B.片剂剂型

使用下列成分制备片剂剂型：

对应于通式(I)的一种化合物 1至50mg

土豆淀粉 100mg 聚乙烯吡咯烷酮 10mg 硬脂酸镁 2mg 乳糖 48至82mg 微粉硅胶 5mg

将这些组分混合并压制以生产每个重200mg的片剂。

C.气雾剂(Аэрозольная)剂型

如下配制旨在10次施用的气雾剂混合物：

对应于通式(I)的一种化合物 10至100mg 氧化镁 150mg 乳糖 110至140mg

化合物与赋形剂混合，并将所述混合物转移至特殊的喷雾装置中。

D.栓剂

可使用以下栓剂基质：

水不溶性基质(可可脂)；

水溶性或可与水混溶的基质(明胶-甘油或聚氧乙烯)；以及

组合(皂-甘油(мыльно-глицериновые))基质。

栓剂制剂的一个实例：

对应于通式(I)的一种化合物的量为1至50mg，并且可可脂的量为得 到栓剂必需的量。

当需要时，可制备含有合适赋形剂的直肠、阴道或尿道栓剂。

E.软膏剂

可使用以下软膏基质：

烃软膏基质，例如白凡士林和黄凡士林(Vaselinum album和Vaselinum  fiavum)、凡士林油(Oleum Vaselini)以及白软膏和液体软膏(分别为 Unguentum album和Unguentum fiavum)，并具有增稠添加剂(例如固 体石蜡和蜡)；

吸收性软膏基质，例如亲水性凡士林(Vaselinum hydrophylicum)、羊毛 脂(Lanolinum)和冷霜(Unguentum Leniens)；

水可去除的软膏基质，例如亲水性软膏(Unguentum hydrophylum)；水 溶性软膏基质，例如聚乙二醇软膏(Unguentum Glycolis Polyaethyleni)； 膨润土基质等。

乳膏制剂的一个实例：

对应于通式(I)的一种化合物 0.01至0.1g 凡士林 10g

通过合适的技术制备软膏剂。

E.注射用溶液

用来制备注射用溶液的溶剂包括0.9％的氯化钠溶液、蒸馏水和奴佛 卡因溶液。单位剂型可制备为安瓿、小瓶和注射器管(шприц-тюбики)。

注射用溶液的制剂如下：

对应于通式(I)的一种化合物 l至50mg 蒸馏水 l至2ml

注射剂型可制备为无菌溶液、无菌粉末和无菌片剂。

用于消毒剂和防腐剂的制剂实例

F.一种制剂的实例

对应于通式(I)的一种化合物 0.001至1％ 1-丙醇 30至40％ 2-丙醇 10至70％ 蒸馏水 10至60％

G.一种制剂的实例

对应于通式(I)的一种化合物 0.001至1％ 季铵碱(或其混合物) 2至10％ 蒸馏水 至100％

H.一种制剂的实例

对应于通式(I)的一种化合物 0.001至1％ 二甲基亚砜(DMSO) 1至20％

或MM＝200至12000的聚乙二醇(PEG) 1至20％ 蒸馏水 至100％

I.一种制剂的实例

对应于通式(I)的一种化合物 0.001至1％ 醇、DMSO、PEG和表面活性剂以多种组合和比例的混合物 1至80％ 蒸馏水 至100％

J.一种制剂的实例

对应于通式(I)的一种化合物 0.001至1％ 蒸馏水 至100％

因此，本发明中所要求保护的通式(I)氯高铁血红素衍生物具有提 高的水溶性、抗菌(包括针对抗性细菌菌株)和抗病毒(包括疱疹病毒) 活性。此外，在所述新的氯高铁血红素衍生物中，已揭示了对革兰氏阳性 细菌菌株有活性的氯高铁血红素衍生物。新的通式I化合物单独成员的效 力证明其在用于配制具有抗菌和/或抗病毒作用之消毒剂、防腐剂和治疗 剂中的适合性。