一种非水滴定测定米屈肼原料药中间体3-(2,2-二甲基肼基)丙酸甲酯含量的分析方法

摘要

一种非水滴定测定米屈肼原料药中间体3-(2，2-二甲基肼基)丙酸甲酯含量的分析方法，本发明提供了一种测定米屈肼原料药第一中间体含量的分析方法，其特征在于为了阻止其它相关杂质对非水测定方法的干扰，提高检测灵敏度，该方法上添加一种针对已知杂质的降解剂来消除干扰实现非水测定操作。分析过程为：以冰醋酸和少量醋酸酐混合液为溶剂，定量溶解被测样品并在混合物里加入一种杂质降解剂微量搅拌一段时间后，用高氯酸滴定液滴定，指示剂法确定滴定终点，使用该方法得到的检测结果与HPLC检测结果可以达到基本一致的效果。该方法简单、快速，测定结果精密，准确度高，可用于米屈肼原料药第一中间体C

说明书

技术领域

一种非水滴定测定米屈肼原料药中间体3-(2，2-二甲基肼基)丙酸甲酯含 量的分析方法，涉及米屈肼原料药第一中间体质量控制技术领域。

背景技术

国际非专利名称为米屈肼，化学名为3-(2，2，2-三甲基肼)丙酸盐二水合 物由于其心脏保护作用而著名。

已知有多种制备3-(2，2，2-三甲基胼)丙酸盐二水合物的方法，通常包括： 1，1-二甲基肼与丙烯酸甲酯反应形成3-(2，2-二甲基肼基)丙酸甲酯，进一步 甲基化，然后对其进行水解和去离子化后获得米屈肼二水合物内盐。获得用于 生产3-(2，2，2-三甲基肼)丙酸盐二水合物的高质量米屈肼原料药，第一中间 体3-(2，2-二甲基肼基)丙酸甲酯其含量高低将直接影响米屈肼原料药的质量， 因此建立一种简便快速质量控制检测方法非常重要。

目前检测3-(2，2-二甲基肼基)丙酸甲酯含量的方法除了拉脱维亚格林戴 克斯公司专利WO2009144221A1公开了一种3-(2，2-二甲基肼基)丙酸甲酯制备 方法上用到气-质联用(GC/MS)的方法检测该化合物含量外，目前国内外未见 其它测试方法的报道。3-(2，2-二甲基肼基)丙酸甲酯是一种液体状的肼类化 合物，虽然它的沸点在188-200℃之间但对热稳定性差，加热100℃左右开始降 解或易氧化，特别在使用气象色谱(GC)法检测时更为突出，导致每次的测试 结果的重复性及稳定性差不适于3-(2，2-二甲基肼基)丙酸甲酯含量测定。3- (2，2-二甲基肼基)丙酸甲酯化学结构式为：(CH₃)₂NNHCH₂CH₂COOCH₃，其分子中 含有肼基结构，可以与高氯酸反应，只要排除该化合物所含其它类型杂质的干 扰，即可用该方法测其含量。反应原理为

总体而言，该反应是：

发明内容

本发明的目的是提供一种快捷而精密的分析原料药米屈肼第一中间体含量 的方法。为了在实际生产中对原料药米屈肼进行质量控制，我们针对它所含的 杂质经过GC、GC/MS、PMR、TLC等测试手段、与杂质标准品的比较分析在肯定 了杂质类型的基础上，建立了一种适合于测定3-(2，2-二甲基肼基)丙酸甲酯 含量的方法。

本发明的技术方案：一种非水滴定改进测定米屈肼原料药第一中间体含量 的分析方法，其特征在于为了阻止其它相关杂质对非水测定方法的干扰，提高 检测灵敏度，在该方法上添加一种针对已知杂质的降解剂来消除干扰，实现非 水测定操作。分析过程为：以冰醋酸和少量醋酸酐混合液为溶剂，定量溶解3- (2，2-二甲基肼基)丙酸甲酯，在混合物里加入一种杂质降解剂微量搅拌一段 时间后，用高氯酸滴定液滴定，采用指示剂滴定法进行滴定，并计算3-(2，2- 二甲基肼基)丙酸甲酯含量。

计算公式：$W\%=\frac{(V-V_0)·C·0.1462}{m}\times 100\%$

其中：V---消耗的高氯酸标准溶液的体积ml；V₀---空白消耗高氯酸体积ml； C---高氯酸滴定液浓度mol/L；m---样品重g；

注：每1ml 0.1mol/L高氯酸滴定液相当于0.01462g 3-(2，2-二甲基肼基) 丙酸甲酯(C₆H₁₄N₂O₂)。

本发明的上述方法中，采用指示剂滴定法，用酚红或结晶紫为指示剂指示 终点。

本发明的上述方法3-(2，2-二甲基肼基)丙酸甲酯(C₆H₁₄N₂O₂)量为0.1～ 0.3g，加入冰醋酸的量为C₆H₁₄N₂O₂质量的50～200倍，优选C₆H₁₄N₂O₂量为0.16g， 杂质降解剂为：酰胺类、醋酸类、酸酐类或醛酮类其中的一种或两种的混合， 加入量为C₆H₁₄N₂O₂质量的5％-60％，冰醋酸和醋酸酐混合比例为(35∶1～10，V/V)， 加入量为25ml。指示剂酚红或结晶紫的加入量为0.05ml～0.10ml(1～2滴)。

本发明的非水滴定含量测定方法中，所述的用于滴定C₆H₁₄N₂O₂的高氯酸滴定 液浓度为0.01～0.1mol/L，本发明选用0.1mol/L。

此外，在上述分析方法中采用指示剂滴定法进行滴定后，还包括将其滴定 结果进行空白校正。

本发明提供的3-(2，2-二甲基肼基)丙酸甲酯含量测定的分析方法，其为 非水滴定法，该方法和高效液相色谱法(HPLC)进行了比较，高效液相色谱法 分离能力高，专属性强，消耗样品量少；该非水电位滴定法具有操作简单、快 速、测定结果精密、准确度高等优点，可用于米屈肼原料药第一中间体C₆H₁₄N₂O₂的常规分析及质量控制。

具体实施方式

以下实施例将有助于对本发明的了解，但这些实施例仅为了对本发明加以 说明，本发明并不限于这些内容。

实施例1

1、0.1mol/L高氯酸滴定液的配制：取无水冰醋酸(按含水量计算，每1g水 加醋酸酐5.22ml)750ml，加入高氯酸(70％～72％)8.5ml，摇匀，在室温下缓 缓滴加醋酸酐13ml，边加边摇，加完后再振摇均匀，放冷，加无水冰醋酸使成 1000ml，摇匀，放置24小时。

2、0.1mol/L高氯酸滴定液的标定：取在105℃干燥至恒重的基准邻苯二甲 酸氢钾约0.16g，精密称定加无水冰醋酸20ml使溶解，加结晶紫指示液1滴， 用本液缓缓滴定至蓝色，并将滴定的结果用空白试验校正。每1ml高氯酸滴定 液(0.1mol/L)相当于20.42mg的邻苯二甲酸氢钾，根据本液消耗量与邻苯二甲 酸氢钾的取用量，算出本液的浓度，即得。

高氯酸滴定液浓度：

其中C为高氯酸滴定液浓度，mol/L；m为基准邻苯二甲酸氢钾的称取量， mg；V为标定中本滴定液的用量，ml；V₀为空白试验中本滴定液的用量，ml。

3、重复性试验：精密称取C₆H₁₄N₂O₂中间体样品，按照电位滴定法连续测定6 次，高氯酸滴定液在25℃时实际浓度为0.1092mol/L，空白消耗高氯酸溶液为 0.020ml，测定结果为98.62％，相对标准偏差为0.19％，试验结果表明，本方法 重复性好，完全符合含量测定的质量控制要求，C₆H₁₄N₂O₂含量测定精密度实验结 果见表1。

表1 C₆H₁₄N₂O₂中间体样品含量测定精密度试验结果

实施例2

精密称取C₆H₁₄N₂O₂中间体样品约0.15g，分别加入冰醋酸和醋酐(35∶5)25ml 和7ml丙酮和二甲基甲酰胺(2∶1，V/V)混合液并用电磁搅拌使其溶解，在30℃ 的温度下继续搅拌10min左右，加结晶紫指示剂3滴，用高氯酸滴定液(0.1092 mol/L)滴定由紫色变为蓝色为终点，并将滴定结果以空白试验校正。每1ml的 高氯酸滴定液(0.10mol/L)相当于14.62mg的C₆H₁₄N₂O₂。本发明的非水滴定法及 高效液相色谱法C₆H₁₄N₂O₂测定结果见表2。

表2 样品测定数据

高效液相色谱法：色谱柱为Krom asilC18(250mm×4.6mm，5μm)；流动相为 甲醇-水-乙酸酐(36∶60∶1.0，v/v/v)，流速1.0mL/min，检测波长为254nm； 柱温30℃。C₆H₁₄N₂O₂，r＝0.9999；方法精密度RSD为0.45％(n＝5)；平均回收 率为98.7％(n＝7)。

技术效果：

本发明的技术效果是高效液相色谱法和非水电位滴定法的测定结果在统 计学上无显著性差异。高效液相色谱法分离能力高，专属性强，消耗样品量少； 本发明的非水电位滴定法简单、快速，测定结果精密，准确度高，可用于米屈 肼原料药第一中间体C₆H₁₄N₂O₂的常规分析及质量控制。