具有光学活性的α-胺基β-羟基氨基酸衍生物及其制备方法和应用

摘要

本发明涉及一种如式(I)所示的具有光学活性的α-胺基-β-羟基氨基酸衍生物及其制备方法和应用，通过以重氮化合物、N-芳基取代甘氨酸酯、2，3-二氯-5，6-二氰基-1，4-苯醌和水为原料，以醋酸铑、手性磷酸为催化剂，以有机溶剂为溶剂，在-10℃下经过三组分反应，得到本发明光学活性α-胺基-β-羟基氨基酸衍生物。本发明原料价廉易得，同时构建两个手性碳，制备路线短，操作安全简单，反应条件温和，具有高原子经济性，高选择性，便于获得α-胺基-β-羟基氨基酸衍生物，提供多样性化合物骨架，广泛应用于新药筛选和制药领域。

说明书

技术领域

本发明属于药物合成化学技术领域，涉及具有光学活性的α-胺基-β-羟基氨基酸衍生物及其制备方法和应用。>

背景技术

具有光学活性α-胺基-β-羟基氨基酸衍生物是一类具有特殊药用化合物的重要骨架结构，如以下所示，例如，vancomycin(Angew.Chem.，Int.Ed.1999，38，2096)和sphingofungin系列(J.Antibiot.1992，45，1692)等。>

现有技术中大多数合成策略是利用化学或者酶催化的方法合成该类化合物，例如，Sharpless双羟基化反应(J.Am.Chem.Soc.1997，119，11734)，环氧化反应(J.Org.Chem.1996，61，2582)，不对称Adol反应(Chem.Soc.Rev.2010，39，1600)和不对称氢化亚胺反应(J.Am.Chem.Soc.1989，111，9134)等。例如，以重氮化合物，芳胺，乙醛酸酯，水为原料的四组分反应(Chem.Commun.，2013.DOI：10.1039／C3CC40546J)，其机理是重氮化合物在金属催化下与水形成氧叶立德，芳胺与乙醛酸酯在体系中原位制备亚胺，亚胺在手性磷酸的催化作用下手性捕捉氧叶立德，得到光学活性α-胺基-β-羟基氨基酸衍生物。但是，现有技术的这些合成方法都具有多步操作、反应底物复杂等缺点。>

发明内容

针对现有技术的上述不足，本发明提供一种具有光学活性的α-胺基-β-羟基氨基酸衍生物，其结构如式(I)所示，>

其中，>

R₁为苯基、带有取代基团的苯基、或烷基；>

R₂为甲基、乙基、或苄基；>

Ar为对溴苯基、对氯苯基、对氟苯基、3，4-二氯苯基、3，5-二氯苯基、3，4-二氟苯基、或苯基。>

具有光学活性α-胺基-β-羟基氨基酸衍生物是一类具有特殊药用化合物的重要骨架结构。现有技术中大多数合成策略是利用化学或者酶催化的方法合成该类化合物，例如，Sharpless双羟基化反应(J.Am.Chem.Soc.1997，119，11734)，环氧化反应(J.Org.Chem.1996，61，2582)，不对称Adol反应(Chem.Soc.Rev.2010，39，1600)和不对称氢化亚胺反应(J.Am.Chem.Soc.1989，111，9134)等。但是，现有技术的这些合成方法都具有多步操作、反应底物复杂，反应条件苛刻等明显的缺点。>

本发明还提供了如式(I)所示的一种具有光学活性的α-胺基-β-羟基氨基酸衍生物的合成方法，制备方法所用的原料价廉易得，制备路线短，操作简单。>

本发明具有光学活性的α-胺基-β-羟基氨基酸衍生物的制备方法，以重氮化合物、N-芳基取代甘氨酸酯、2,3-二氯-5,6-二氰基-1，4-苯醌和水为原料，以醋酸铑、手性磷酸为催化剂，以有机溶剂为溶剂，经过三组分反应合成得到如式(I)所示的具有光学活性α-胺基-β-羟基氨基酸衍生物。>

其中，>

R₁为苯基、带有取代基团的苯基、或烷基等；>

R₂为甲基、乙基、或苄基等；>

Ar为对溴苯基、对氯苯基、对氟苯基、3，4-二氯苯基、3，5-二氯苯基、3，4-二氟苯基、或苯基等。>

本发明制备方法的反应式为：>

其中，R₁为苯基、带有取代基团的苯基、或烷基等；>

R₂为甲基、乙基、或苄基等；>

Ar为对溴苯基、对氯苯基、对氟苯基、3，4-二氯苯基、3，5-二氯苯基、3，4-二氟苯基、或苯基等。>

本发明中，重氮化合物：N-芳基取代甘氨酸酯：2，3-二氯-5，6-二氰基-1，4-苯醌：醋酸铑：手性磷酸的摩尔比为(3.0-1.0)：1.0：(2.0-1.0)：(0.1-0.01)：(0.2-0.01)。>

优选地，重氮化合物：N-芳基取代甘氨酸酯：2，3-二氯-5，6-二氰基-1，4-苯醌：醋酸铑：手性磷酸的摩尔比=1.5：1.0：1.0：0.01：0.05。>

本发明中，所述N-芳基取代甘氨酸酯是N-对氯苯基甘氨酸乙酯，N-对氯苯基甘氨酸甲酯，N-对氯苯基甘氨酸苄酯，N-对溴苯基甘氨酸乙酯，N-对氟苯基甘氨酸乙酯，N-3,4-二氯苯基甘氨酸乙酯，N-3,5-二氯苯基甘氨酸乙酯，N-3,4-二氟苯基甘氨酸乙酯，N-3-氯-4-氟苯基甘氨酸乙酯，或N-苯基甘氨酸乙酯。>

本发明中，所述重氮化合物是苯乙酮重氮，对溴苯乙酮重氮，对氯苯乙酮重氮，对甲基苯乙酮重氮，对甲氧基苯乙酮重氮，间溴苯乙酮重氮，或环己基乙酮重氮。>

本发明中，所述手性磷酸如结构式(III)所示，包括R型和S型，(添加实例15).式中的Ar为三苯基硅基，苯基，对甲苯基，对甲氧苯基，对氟苯基，3，5-二氟苯基，对三氟甲苯基，3，5-二三氟苯基或9-菲基；>

本发明中，所述有机溶剂是氯代烷烃、甲苯或二甲苯。>

本发明制备方法一步制备具有光学活性α-胺基-β-羟基氨基酸衍生物，制备方法包括：在反应瓶中加入N-芳基取代甘氨酸酯、2，3-二氯-5，6-二氰基-1，4-苯醌、醋酸铑、手性磷酸、以及有机溶剂，室温下搅拌混合；其中，所述有机溶剂的加入量为25-30ml／mmolN-芳基取代甘氨酸酯。将重氮化合物溶解于有机溶剂中得到重氮溶液；其中，用于溶解重氮化合物的有机溶剂的加入量为25-30ml／mmol重氮化合物。在-10℃下通过蠕动泵将重氮溶液滴加入反 应瓶中，搅拌过夜，旋蒸去除溶剂得到粗产品，经柱层析，得到如式(I)的所述具有光学活性的α-胺基-β-羟基氨基酸衍生物。>

本发明所用的有机溶剂和制备N-芳基取代甘氨酸酯的原料溴乙酸乙酯和芳胺，重氮原料取代苯乙酮、叠氮化合物，乙酸乙酯，乙醇均可市场购得。>

具体实例之一中，制备的反应条件为1mol％Rh₂(OAc)₄，5mol％PPA，1.0eqv.DDQ。>

本发明还提供了具有光学活性的α-胺基-β-羟基氨基酸衍生物在制备蛋白酪氨酸磷酸酯酶抑制剂中的应用。实例表明，具有光学活性的α-胺基-β-羟基氨基酸衍生物2A～20均表现出显著良好的对PTP1B的抑制，可作为有效的组蛋白酪氨酸磷酸酯酶抑制剂应用于医药领域。>

本发明具有优点及有益效果为：本发明所用原料重氮化合物、N-芳基取代甘氨酸酯、水以及有机溶剂都价廉易得，成本低，大大提高原料利用率。本发明合成路线简单，一步构建目标产物。本发明具有原子经济性，高选择性，高收率等，符合绿色化学的要求。本发明能简单快捷地合成具有光学活性α-胺基-β-羟基氨基酸衍生物，有利于进一步衍生，从而提供多样性的化合物骨架，对新药筛选和制药工艺具有非常重要的意义。>

具体实施方式

结合以下具体实施例，对本发明作进一步详细说明，本发明的保护内容不局限于以下实施例。在不背离发明构思的精神和范围下，本领域技术人员能够想到的变化和优点都被包括在本发明中，并且以所附的权利要求书为保护范围。实施本发明的过程、条件、试剂、实验方法等，除以下专门提及的内容之外，均为本领域的普遍知识和公知常识，本发明没有特别限制内容。>

本发明具有光学活性的α-胺基-β-羟基氨基酸衍生物的制备方法，具体地，先按摩尔比称取N-芳基取代甘氨酸酯：2，3-二氯-5，6-二氰基-1，4-苯醌：醋酸铑：手性磷酸，将N-芳基取代甘氨酸酯，2，3-二氯-5，6-二氰基-1，4-苯醌，醋酸铑，手性磷酸和有机溶剂加入反应瓶中，有机溶剂的加入量为25-30ml／mmolN-芳基取代甘氨酸酯；将混合物在室温下搅拌4小时，接着将重氮化合物溶解于有机溶剂中，得到重氮溶液，用于溶解重氮的有机溶剂的量为25-30ml／mmol；然后在-10℃下，通过蠕动泵将重氮溶液滴加到反应瓶中，1小时滴加完毕，继续搅拌过夜，40℃-50℃旋蒸去除溶剂，得到粗产品；将粗产品用体积比为乙酸乙酯：石油醚=1：10～1：5溶液进行柱层析，得到具有光学活性α-胺基-β-羟基氨基酸衍生物纯品。>

实施例1>

称取N-对氯苯基甘氨酸乙酯(0.20mmol)，醋酸铑(0.002mmol)，2，3-二氯-5，6-二氰基-1，4-苯醌(0.20mmol)和手性磷酸A(0.01mmol)将它们放入小试管反应器，加入2.0ml1，2-二氯乙烷，在室温下搅拌4小时后，放置于-10℃中。称取苯乙酮重氮(0.30mmol)溶于 1.0ml1，2-二氯乙烷中，并通过蠕动泵1小时注入反应体系中，注入完毕后继续搅拌过夜，50℃-60℃旋蒸去除溶剂，得到粗产品；再通过柱层析(洗脱剂：石油醚：乙酸乙酯=1：20～1：5)分离出得到具有光学活性α-胺基-β-羟基氨基酸衍生物纯品2A。收率80％，dr值95：5，ee为93％。>

本实施例中，手性磷酸A为：结构式

产物2A为：结构式

2A表征为：¹H>13C NMR(CDC13，100MHz)δ13.88，60.52，61.62，74.24，115.52，123.90，128.28,129.09，129.24，134.15，134.21，144.86，169.08,198.20；>

HRMS(ESI)计算值：C₁₈H₁₈ClNNaO₄[M+Na]+：370.0822，测量值：370.0802.>

实施例2>

称取N-对氯苯基甘氨酸乙酯(0.20mmol)，醋酸铑(0.002mmol)，2，3-二氯-5，6-二氰基-1，4-苯醌(0.20mmol)和手性磷酸A(0.01mmol)将它们放入小试管反应器，加入2.0ml1，2-二氯乙烷，在室温下搅拌4小时后，放置于-10℃中。称取对甲基苯乙酮重氮(0.30mmol)溶于1.0ml1，2-二氯乙烷中，并通过蠕动泵1小时注入反应体系中，注入完毕后继续搅拌过夜，50℃-60℃旋蒸去除溶剂，得到粗产品；再通过柱层析(洗脱剂：石油醚：乙酸乙酯=1：20～1：5)分离出得到具有光学活性α-胺基-β-羟基氨基酸衍生物纯品2B。收率85％，dr值90：10，ee为92％。>

本实施例中，手性磷酸A为：结构式

产物2B为：结构式

2B表征为：¹H>3)δ1.03(t，J=8.0Hz，3H)，2.39(s，3H)，3.90-3.99(comp，3H)，4.40(dd，J=4.0，8.0Hz，1H)，4.70(d，J=12.0Hz，1H)，5.29(d，J=2.0Hz，1H)，6.53(d，J=8.0Hz，2H)，7.06(d，J=8.0Hz，2H)，7.27(d，J=8.0Hz，2H)，7.76(d，J=8.0Hz，2H)；>

¹³C>3)δ13.90，21.80，60.67，61.59，74.09，115.55，123.93，128.41，129.26，129.83，131.53，144.92，145.43，169.12，197.63；>

HRMS(ESI)计算值：C19H20C1NNaO₄[M+Na]⁺：384.0979，测量值：384.0954.>

实施例3>

称取N-对氯苯基甘氨酸乙酯(0.20mmol)，醋酸铑(0.002mmol)，2，3-二氯-5，6-二氰基-1，4-苯醌(0.20mmol)和手性磷酸A(0.01mmol)将它们放入小试管反应器，加入2.0ml1，2-二氯乙烷，在室温下搅拌4小时后，放置于-10℃中。称取对甲氧基苯乙酮重氮(0.30mmol)溶于1.0ml1，2-二氯乙烷中，并通过蠕动泵1小时注入反应体系中，注入完毕后继续搅拌过夜，50℃-60℃旋蒸去除溶剂，得到粗产品；再通过柱层析(洗脱剂：石油醚：乙酸乙酯=1：20～1：5)分离出得到具有光学活性α-胺基-β-羟基氨基酸衍生物纯品2C。收率74％，dr值85：15，ee为94％。>

本实施例中，手性磷酸A为：结构式

产物2C为：结构式

2C表征为：¹H>3)δ1.10(t，J=8.0Hz，3H)，3.91(s，3H)，3.97-4.09(comp，3H)，4.46(dd，J=4.0，12.0Hz，1H)，4.79(d，J=12.0Hz，1H)，5.34(d，J=4.0Hz，1H)，6.60(d，J=8.0Hz，2H)，7.01(d，J=8.0Hz，2H)，7.13(d，J=8.0Hz，2H)，7.93(d，J=8.0Hz，2H)；>13C>3)δ13.90，55.60，60.75，61.54，73.75，114.38，115.52.>

123.89，126.79，129.24，130.70，144.98，164.45，169.21，196.23；>

HRMS(ESI)计算值：C₁₉H₂₀C1NNaO₅[M+Na]⁺：400.0928，测量值：400.0920.>

实施例4>

称取N-对氯苯基甘氨酸乙酯(0.20mmol)，醋酸铑(0.002mmol)，2，3-二氯-5，6-二氰基-1，4-苯醌(0.20mmol)和手性磷酸A(0.01mmol)将它们放入小试管反应器，加入2.0ml1，2-二氯乙烷，在室温下搅拌4小时后，放置于-10℃中。称取对溴苯乙酮重氮(0.30mmol)溶于1.0ml1，2-二氯乙烷中，并通过蠕动泵1小时注入反应体系中，注入完毕后继续搅拌过夜，50℃-60℃旋蒸去除溶剂，得到粗产品；再通过柱层析(洗脱剂：石油醚：乙酸乙酯=1：20～1：5)分离出得到具有光学活性α-胺基-β-羟基氨基酸衍生物纯品2D。收率78％，dr值92：8，ee为83％。>

本实施例中，手性磷酸A为：结构式

产物2D为：结构式

2D表征为：¹H>3)δ1.02(t，J=8.0Hz，3H)，3.91-4.01(comp，3H)，4.38(s，1H)，4.68(br，1H)，5.24(d，J=4.0Hz，1H)，6.52(d，J=8.0Hz，2H)，7.05(d，J=8.0Hz，2H)，7.61(d，J=8.0Hz，2H)，7.72(d，J=8.0Hz，2H)；>

¹³C>3)δ13.92，60.53，61.74，74.25，115.50，115.60，124.14，129.30，129.53，129.77，129.89，132.47，132.91，144.80，169.07，197.33；>

HRMS(ESI)计算值：C₁₈H₁₆BrClNNaO₄[M+Na]⁺：447.9927，测量值：447.9907.>

实施例5>

称取N-对氯苯基甘氨酸乙酯(0.20mmol)，醋酸铑(0.002mmol)，2，3-二氯-5，6-二氰基-1，4-苯醌(0.20mmol)和手性磷酸A(0.01mmol)将它们放入小试管反应器，加入2.0ml1，2-二氯乙烷，在室温下搅拌4小时后，放置于-10℃中。称取间溴苯乙酮重氮(0.30mmol)溶于1.0ml1，2-二氯乙烷中，并通过蠕动泵1小时注入反应体系中，注入完毕后继续搅拌过夜，50℃-60℃旋蒸去除溶剂，得到粗产品；再通过柱层析(洗脱剂：石油醚：乙酸乙酯=1：20～1：5)分离出得到具有光学活性α-胺基-β-羟基氨基酸衍生物纯品2E。收率72％，dr值80：20，ee为78％。>

本实施例中，手性磷酸A为：结构式

产物2E为：结构式

2E表征为：¹H NMR(400MHz，CDC13)δ1.06(t，J=8.0Hz，3H)，3.83(br，1H)，3.93-4.06(m，2H)，4.41(s，1H)，4.67(br，1H)，5.26(d，J=2.0Hz，1H)，6.55(d，J=8.0Hz，2H)，7.08(d，J=8.0Hz，2H)，7.35(t，J=8.0Hz，1H)7.71(d，J=8.0Hz，1H)，7.77(d，J=8.0Hz，1H)，8.00(s，1H)；>

¹³C NMR(101MHz，CDCl3)δ13.93，60.60，61.85，74.39，115.71，123.40，124.21，126.74,129.37，130.66，131.40，136.04，137.00，144.71，169.01，197.21；>

HRMS(ESI)计算值：C₁₈H₁₇BrNNaO₄[M+Na]⁺：447.9927，测量值：447.9907.>

实施例6>

称取N-对氯苯基甘氨酸乙酯(0.20mmol)，醋酸铑(0.002mmol)，2，3-二氯-5，6-二氰基-1，4-苯醌(0.20mmol)和手性磷酸A(0.01mmol)将它们放入小试管反应器，加入2.0ml1，2-二氯乙烷，在室温下搅拌4小时后，放置于-10℃中。称取环己基乙酮重氮(0.30mmol)溶于1.0ml1，2-二氯乙烷中，并通过蠕动泵1小时注入反应体系中，注入完毕后继续搅拌过夜，50℃-60℃旋蒸去除溶剂，得到粗产品；再通过柱层析(洗脱剂：石油醚：乙酸乙酯=1：20～1：5)分离出得到具有光学活性α-胺基-β-羟基氨基酸衍生物纯品2F。收率81％，dr值76：24，ee为73％。>

本实施例中，手性磷酸A为：结构式

产物2F为：结构式

2F表征为：¹H>3)δ1.17(t，J=8.0Hz，3H)，1.24-1.88(m，12H)，2.75(m，1H)，3.71(br，1H)，4.11-4.15(m，2H)，4.50(dd，J=4.0，12.0Hz，1H)，4.64(s，1H)，4.70(d，J=12.0Hz，1H)，6.63(d，J=8.0Hz，2H)，7.15(d，J=8.0Hz，2H)；>

¹³C>3)δ14.06，25.12，25.64，25.90，27.24，30.08，46.74，59.56，61.92，75.32，115.25，123.88，129.31，129.66，144.75，169.34，211.13；>

HRMS(ESI)计算值：C₁₈H₂₄C1NNaO₄[M+Na]⁺：376.1292，测量值：376.1331.>

实施例7>

称取N-对氯苯基甘氨酸乙酯(0.20mmol)，醋酸铑(0.002mmol)，2，3-二氯-5，6-二氰 基-1，4-苯醌(0.20mmol)和手性磷酸A(0.01mmol)将它们放入小试管反应器，加入2.0ml1，2-二氯乙烷，在室温下搅拌4小时后，放置于-10℃中。称取2-萘基乙酮重氮(0.30mmol)溶于1.0ml1，2-二氯乙烷中，并通过蠕动泵1小时注入反应体系中，注入完毕后继续搅拌过夜，50℃-60℃旋蒸去除溶剂，得到粗产品；再通过柱层析(洗脱剂：石油醚：乙酸乙酯=1：20～1：5)分离出得到具有光学活性α-胺基-β-羟基氨基酸衍生物纯品2G。收率83％，dr值82：18,ee为94％。>

本实施例中，手性磷酸为A：结构式

产物2G为：结构式

2G表征为：¹H>3)δ1.11(t，J=8.0Hz，3H)，3.96-4.12(comp，3H)，4.58(m，1H)，4.82(m，1H)，5.54(d，J=4.0Hz，1H)，6.62(d，J=8.0Hz，2H)，7.14(d，J=8.0Hz，2H)，7.62(m，2H)，7.92(d，J=8.0Hz，2H)，7.98(m，3H)，8,46(s，1H)；>

¹³C>3)δ13.92，60.78，61.65，74.32，115.60，123.70，123.98，127.37，127.96，129.23，129.29，129.53，130.03，131.43，132.37，136.01，144.86，169.08，198.06；>

HRMS(ESI)计算值：C₂₂H₂₀ClNNaO₄[M+Na]⁺:420.0979，测量值：420.1002.>

实施例8>

称取N-对溴苯基甘氨酸乙酯(0.20mmol)，醋酸铑(0.002mmol)，2，3-二氯-5，6-二氰基-1，4-苯醌(0.20mmol)和手性磷酸A(0.01mmol)将它们放入小试管反应器，加入2.0ml1，2-二氯乙烷，在室温下搅拌4小时后，放置于-10℃中。称取苯乙酮重氮(0.30mmol)溶于1.0mll，2-二氯乙烷中，并通过蠕动泵1小时注入反应体系中，注入完毕后继续搅拌过夜，50℃-60℃旋蒸去除溶剂，得到粗产品；再通过柱层析(洗脱剂：石油醚：乙酸乙酯=1：20～1：5)分离出得到具有光学活性α-胺基-β-羟基氨基酸衍生物纯品2H。收率82％，dr值88： 12，ee为93％。>

本实施例中，手性磷酸A为：结构式

产物2H为：结构式

2H表征为：¹H NMR(CDCl3，500MHz)δ1.11(t，J=7.0Hz，3H)，3.99-4.09(comp，3H)，4.50(dd，J=2.5，10.5Hz，1H)，4.83(d，J=10.5Hz，1H)，5.39(dd，J=2.5，6.5Hz，1H)，6.56(d，J=8.7Hz，2H)，7.27(d√=8.7Hz，1H)，7.54(t，J=7.7Hz，2H)，7.66(t，J=7.0Hz，1H)，7.94(d，J=7.7Hz，2H)；>

¹³C NMR(CDCl3，100MHz)δ13.89，60.36，61.64，74.23，110.98，115.94，128.29，129.10，132.12，134.15，134.22，145.32，169.04，198.19；>

HRMS(ESI)计算值：C₁₈H₁₈BrNNaO₄[M+Na]⁺:414.0317，测量值：414.0303.>

实施例9>

称取N-对氟苯基甘氨酸乙酯(0.20mmol)，醋酸铑(0.002mmol)，2，3-二氯-5，6-二氰基-1，4-苯醌(0.20mmol)和手性磷酸A(0.01mmol)将它们放入小试管反应器，加入2.0mll，2-二氯乙烷，在室温下搅拌4小时后，放置于-10℃中。称取苯乙酮重氮(0.30mmol)溶于1.0ml1，2-二氯乙烷中，并通过蠕动泵1小时注入反应体系中，注入完毕后继续搅拌过夜，50℃-60℃旋蒸去除溶剂，得到粗产品；再通过柱层析(洗脱剂：石油醚：乙酸乙酯=1：20～1：5)分离出得到具有光学活性α-胺基-β-羟基氨基酸衍生物纯品2I。收率88％，dr值90：10，ee为92％。>

本实施例中，手性磷酸A为：结构式

产物2I为：结构式

2I表征为：¹H>3)δ7.99-7.78(m，2H)，7.67-7.52(m，1H)，7.48(t，J=7.7Hz，3H)，6.83(dd，J=11.9，5.5Hz，2H)，6.61-6.49(m，2H)，5.32(d，J=2.7Hz，1H)，4.41(s，1H)，4.10-3.82(m，3H)，1.05(t，J=7.1Hz，3H).>

¹³C>3)δ197.31，168.30，157.01，154.65，141.50，133.24，133.15，128.12，127.32，115.03，114.86，114.79，73.28，60.59，60.40，12.91.>

HRMS(ESI)计算值：C₁₈H₁₈FNNaO₄[M+Na]⁺：331.1220，测量值：331.1023.>

实施10>

称取N-3,4-二氯苯基甘氨酸乙酯(0.20mmol)，醋酸铑(0.002mmol)，2，3-二氯-5，6-二氰基-1，4-苯醌(0.20mmol)和手性磷酸A(0.01mmol)将它们放入小试管反应器，加入2.0ml1，2-二氯乙烷，在室温下搅拌4小时后，放置于-10℃中。称取苯乙酮重氮(0.30mmol)溶于1.0ml1，2-二氯乙烷中，并通过蠕动泵1小时注入反应体系中，注入完毕后继续搅拌过夜，50℃-60℃旋蒸去除溶剂，得到粗产品；再通过柱层析(洗脱剂：石油醚：乙酸乙酯=1：20～1：5)分离出得到具有光学活性α-胺基-β-羟基氨基酸衍生物纯品2J。收率85％，dr值84：16，ee为91％。>

本实施例中，手性磷酸A为：结构式

产物2J为：结构式

2J表征为：¹H>3)δ1.12(t，J=7.0Hz，3H)，3.98-4.10(comp，3H)，4.48(s，1H)，4.86(br，1H)，5.39(s，1H)，6.53(d，J=12.0Hz，1H)，6.75(s，1H)，7.22(d，J=8.0Hz，1H)，7.57(t，J=8.0Hz，2H)，7.69(t，J=8.0Hz，1H)，7.93(d，J=8.0Hz，1H)；>

¹³C>3)13.94，60.88，61.80，74.26，103.28，103.48，109.76，117.66，117.84，128.31，129.22，134.06，134.39，143.24，169.00，198.10；>

HRMS(ESI)计算值：C₁₈H₁₇C1₂NNaO₄[M+Na]⁺：404.0432，测量值：404.0437.>

实施例11>

称取N-3,5-二氯苯基甘氨酸乙酯(0.20mmol)，醋酸铑(0.002mmol)，2，3-二氯-5，6-二氰基-1，4-苯醌(0.20mmol)和手性磷酸A(0.01mmol)将它们放入小试管反应器，加入2.0ml1，2-二氯乙烷，在室温下搅拌4小时后，放置于-10℃中。称取苯乙酮重氮(0.30mmol)溶于1.0ml1，2-二氯乙烷中，并通过蠕动泵1小时注入反应体系中，注入完毕后继续搅拌过夜，50℃-60℃旋蒸去除溶剂，得到粗产品；再通过柱层析(洗脱剂：石油醚：乙酸乙酯=1：20～1：5)分离出得到具有光学活性α-胺基-β-羟基氨基酸衍生物纯品2K。收率84％，dr值92：8，ee为94％。>

本实施例中，手性磷酸A为：结构式

产物2K为：结构式

2K表征为：¹H NMR(CDCl3，400MHz)δ1.06(t，J=8.0Hz，3H)，3.93-4.02(comp，3H)，4.38(dd，J=4.0，12.0Hz，1H)，4.88(d，J=12.0Hz，1H)，5.29(dd，J=4.0，8.0Hz,，1H)，6.47(d，J=4.0Hz，2H)，6.68(t，J=2.0Hz，1H)，7.49(t，J=8.0Hz，2H)，7.60(t，J=8.0Hz，1H)，7.85(m，2H)；>13CNMR(CDCl3，100MHz)δ13.89，59.80，61.92，74.16，112.37，112.43，118.82，128.22，129.24，134.13，134.35，135.65，147.93，168.51，198.00；>

HRMS(ESI)计算值：C₁₈H₁₇C1₂NNaO₄[M+Na]⁺：404.0432，测量值：404.0437.>

实施例12>

称取N-3,4-二氟苯基甘氨酸乙酯(0.20mmol)，醋酸铑(0.002mmol)，2，3-二氯-5，6-二氰基-1，4-苯醌(0.20mmol)和手性磷酸A(0.01mmol)将它们放入小试管反应器，加入2.0ml1，2-二氯乙烷，在室温下搅拌4小时后，放置于-10℃中。称取对甲氧基苯乙酮重氮(0.30mmol)溶于1.0ml1，2-二氯乙烷中，并通过蠕动泵1小时注入反应体系中，注入完毕后继续搅拌过夜，50℃-60℃旋蒸去除溶剂，得到粗产品；再通过柱层析(洗脱剂：石油醚：乙酸乙酯=1：20～1：5)分离出得到具有光学活性α-胺基-β-羟基氨基酸衍生物纯品2L。收率86％，dr值大于95：5，ee为95％。>

本实施例中，手性磷酸A为：结构式

产物2L为：结构式

2L表征为：¹H>13C NMR(CDCl3，100MHz)δ13.94，60.88，61.80，74.26，103.28，103.48，109.76，117.66，117.84，128.31，129.22，134.06，134.39，143.24，169.00,198.10；>

HRMS(ESI)计算值：C₁₈H₁₇F₂NNaO₄[M+Na]⁺：372.1023，测量值：372.1103.>

实施例13>

称取N-3-氯-4-氟苯基甘氨酸甲酯(0.20mmol)，醋酸铑(0.002mmol)，2，3-二氯-5，6-二氰基-1，4-苯醌(0.20mmol)和手性磷酸A(0.01mmol)将它们放入小试管反应器，加入2.0ml1，2-二氯乙烷，在室温下搅拌4小时后，放置于-10℃中。称取苯乙酮重氮(0.30mmol)溶于1.0mll，2-二氯乙烷中，并通过蠕动泵1小时注入反应体系中，注入完毕后继续搅拌过夜，50℃-60℃旋蒸去除溶剂，得到粗产品；再通过柱层析(洗脱剂：石油醚：乙酸乙酯=1：20～1：5)分离出得到具有光学活性α-胺基-β-羟基氨基酸衍生物纯品2M。收率79％，dr值90：10，ee为95％。>

本实施例中，手性磷酸A为：结构式

产物2M为：结构式

2M表征为：¹H>3)δ7.87(d，J=7.5Hz，2H)，7.61(d，J=7.3Hz，1H)，7.50(t，J=7.4Hz，2H)，6.90(t，J=8.7Hz，1H)，6.63(d，J=3.1Hz，1H)，6.54-6.34(m，1H)，5.31(d，J=4.2Hz，1H)，4.63(d，J=10.4Hz，1H)，4.37(d，J=10.5Hz，1H)，3.98(dd，J=15.3，7.3Hz，2H)，3.88(d，J=6.7Hz，1H)，1.07(t，J=7.1Hz，3H).>

¹³C>3)δ197.11，167.92，142.17，133.35，133.09，128.21，127.28，116.20，115.98，114.68，113.09，113.02，73.21，60.78，59.89，12.92>

HRMS(ESI)计算值：C₁₈H₁₇C1FNNaO₄[M+Na]⁺：365.0830，测量值：365.1083.>

实施例14>

称取N-对氯苯基甘氨酸甲酯(0.20mmol)，醋酸铑(0.002mmol)，2，3-二氯-5，6-二氰基-1，4-苯醌(0.20mmol)和手性磷酸A(0.01mmol)将它们放入小试管反应器，加入2.0ml1，2-二氯乙烷，在室温下搅拌4小时后，放置于-10℃中。称取苯乙酮重氮(0.30mmol)溶于1.0ml1，2-二氯乙烷中，并通过蠕动泵1小时注入反应体系中，注入完毕后继续搅拌过夜，50℃-60℃旋蒸去除溶剂，得到粗产品；再通过柱层析(洗脱剂：石油醚：乙酸乙酯=1：20～1：5)分离出得到具有光学活性α-胺基-β-羟基氨基酸衍生物纯品2N。收率86％，dr值80：20，ee为87％。>

本实施例中，手性磷酸A为：结构式

产物2N为：结构式

20表征为：¹H>3)δ7.87(d，J=7.2Hz，2H)，7.60(t，J=7.4Hz，1H)，7.49(t，J=7.7Hz，2H)，7.08(d，J=8.8Hz，2H)，6.54(d，J=8.8Hz，2H)，5.32(dd，J=7.0，2.9Hz，1H)，4.67(d，J=10.7Hz，1H)，4.45(dd，J=10.8，2.9Hz，1H)，3.86(d，J=7.0Hz，1H)，3.50(s，3H).>

¹³C>3)δ197.21，168.67，143.78，133.31，133.15，128.31，128.17，127.25，123.06，114.50，73.14，59.76，51.12.>

HRMS(ESI)计算值：C₁₇H₁₆C1NNaO₄[M+Na]⁺：333.0768，测量值：333.1034.>

实施例15>

称取N-对氯苯基甘氨酸乙酯(0.20mmol)，醋酸铑(0.002mmol)，2，3-二氯-5，6-二氰基-1，4-苯醌(0.20mmol)和手性磷酸A(0.01mmol)将它们放入小试管反应器，加入2.0ml1，2-二氯乙烷，在室温下搅拌4小时后，放置于-10℃中。称取苯乙酮重氮(0.30mmol)溶于1.0ml1，2-二氯乙烷中，并通过蠕动泵1小时注入反应体系中，注入完毕后继续搅拌过夜，50℃-60℃旋蒸去除溶剂，得到粗产品；再通过柱层析(洗脱剂：石油醚：乙酸乙酯=1：20～1：5)分离出得到具有光学活性α-胺基-β-羟基氨基酸衍生物纯品2O。收率82％，dr值95：5，ee为93％。>

本实施例中，手性磷酸A为：结构式

产物2O为：结构式

20表征为：¹H>13C NMR(CDCl3，100MHz)δ13.88，60.52，61.62，74.24，115.52，123.90，128.28,129.09，129.24，134.15，134.21，144.86，169.08,198.20；>

HRMS(ESI)计算值：C₁₈H₁₈ClNNaO₄[M+Na]+：370.0822，测量值：370.0802.>

实施例16本发明具有光学活性的α-胺基-β-羟基氨基酸衍生物对PTP1B的抑制>

生物活性测试所用筛选模型：>

名称：PTP1B>

别名：PTPN1>

英文全称：protein tyrosine phosphatase1B>

中文全称：蛋白酪氨酸磷酸酶PTP1B>

PTP1B是第一个被鉴定的蛋白酪氨酸磷酸酯酶(protein tyrosine phosphatase)，通过PTP1B剔除的老鼠实验表明，PTP1B通过对胰岛素受体的脱磷酰化，进而在调节胰岛素敏感性和脂肪代谢过程中起着非常重要的作用。因而，选择性的、高活性的PTP1B抑制剂在糖尿病和肥胖症的治疗中有重要的价值。>

筛选方法：>

Protocol id：25>

Protocol name：PTP1B activity assay，absorbance>

仪器：>

VERSAmax(Molecular Devices，USA).>

材料：PTP1B，本实验室应用大肠杆菌表达系统得到GST融合蛋白。>

底物，pnPP.>

过程：采用光吸收检测法，在96孔或384孔平底透明微孔板中检测酶活性。底物pNPP经PTP1B水解得到的游离产物在405nm处有很强的光吸收。通过酶标仪监测405nm处光吸收强度的变化，计算得到反应初速度。实验中采用的对照化合物为Na3V04。>

样品处理：样品用DMSO溶解，低温保存，DMSO在最终体系中的浓度控制在不影响检测活性的范围之内。>

数据处理及结果说明：>

初筛选择单浓度条件下，例如20μg／ml，对样品的活性进行测试。对于在一定条件下表现出活性的样品，例如抑制率％Inhibition大于50，测试活性剂量依赖关系，即IC50／EC50值，通过样品活性对样品浓度进行非线性拟和得到，计算所用软件为Graphpad Prism4，拟合所使用的模型为sigmoidaldose-response(varible slope)，对于大多数抑制剂筛选模型，将拟合曲线底部和顶部设定为0和100。一股情况下，每个样品在测试中均设置复孔(n≥2)，在结果中以标准偏差(Standard Deviation，SD)或者标准误差(Standard Error，SE)表示。有活性的结果均在活性列以*加以标注。每次测试均有已报道的化合物作为参照。>

参照化合物(oleanolic acid)对蛋白酪氨酸磷酸酯酶PTP1B的抑制，见下表1。>

本发明化合物对蛋白酪氨酸磷酸酯酶PTP1B的抑制，见下表2>

表2>

ID 样品编号 Protocolid 浓度 类型 单位 结果 误差 备注 1 2A 25 20μg／mL IC50 μg／mL 2.31 0.62 2 2B 25 20μg／mL IC50 μg／mL 0.89 0.51 3 2C 25 20μg／mL IC50 μg／mL 1.42 0.88 4 2D 25 20μg／mL IC50 μg／mL 7.89 2.65 5 2E 25 20μg／mL IC50 μg／mL 0.76 0.11 6 2F 25 20μg／mL IC50 μg／mL 1.31 0.24 7 2G 25 20μg／mL IC50 μg／mL 5.57 1.61 8 2H 25 20μg／mL IC50 μg／mL 13.51 8.16 9 2I 25 20μg／mL IC50 μg／mL 4.81 1.01 10 2J 25 20μg／mL IC50 μg／mL 1.62 0.18 11 2K 25 20μg／mL IC50 μg／mL 1.76 0.93 12 2L 25 20μg／mL IC50 μg／mL 2.20 0.21 13 2M 25 20μg／mL IC50 μg／mL 7.21 1.31 14 2N 25 20μg／mL IC50 μg／mL 4.18 0.21 15 20 25 20μg／mL IC50 μg／mL 5.26 1.81

以上实验结果表明：与参照化合物对比，本发明具有光学活性的α-胺基-β-羟基氨基酸衍生物2A～20均表现出显著良好的对PTP1B的抑制，可作为有效的组蛋白酪氨酸磷酸酯酶抑制剂应用于医药领域。>