一种新的普利多匹定盐酸盐多晶型形态

摘要

本发明涉及一种新的普利多匹定的结晶形态，目前正在被研发用于治疗亨丁頓舞蹈症的药物物质。更具体地说，本发明提供了普利多匹定盐酸盐的多晶型形态II，制备这种多晶型形态的方法，包括多晶型形态II的药物组合物和使用这种多晶型形态的方法。

说明书

技术领域

本发明涉及一种新的普利多匹定（Pridopidine）的结晶形态（crystalline form），目前正在被研发用于治疗亨丁頓舞蹈症（Huntington's disease）的药物物质。更具体地说，本发明提供了普利多匹定盐酸盐（Pridopidine hydrochloride salt）的多晶型形态II（polymorphic Form II），制备这种多晶型形态的方法，包括多晶型形态II的药物组合物和使用这种多晶型形态的方法。

背景技术

多晶型（polymorphism）是材料科学中固体材料能够以多于一种晶形（crystal form）存在，每种形态在晶格中具有不同的分子取向和/或构象。多晶型在药物成分的研发中很重要，因为晶体中结构排列（structural arrangements）的不同致使每个多晶型物（polymorph）显示出独特的一套物理化学性质。所以，多晶型物之间的溶解度和溶出速率（dissolution rate）的可能不同导致生物利用度的潜在差异。而且，影响化合物的加工性能的机械性能，例如流动性和可压缩性可能不同。化合物的稳定性和保存期限也可能取决于选择的多晶型物。由于这些原因，筛查存在的不同的多晶型形态和表征发现的形态是有价值的。从具有不同的多晶型形态中选择对改善药物产品的性能提供了新的机会。

化学合成的多晶型的结果是由结晶条件例如溶剂的选择，溶剂的加入速度，温度，搅拌速度，过饱和水平和杂质水平决定的。所以，不同的结晶过程可产生不同的多晶型物。多晶型物还具有不同的稳定性，可自发地从一种形态转换到另一种形态。

多晶型物彼此之间可以用多种技术区分。多晶型物显示出独特的光谱性质，利用红外光谱，拉曼光谱和13C-NMR光谱可被鉴定。由于每个晶形（crystal form）用不同的方式衍射X射线的事实，X射线粉末衍射(XRPD)也能用于该鉴定。并且，热量方法例如差示扫描量热法(DSC)和热重量分析法(TGA)能对具体的多晶型物提供特有的信息。

普利多匹定，即4-(3-甲磺酰基-苯基)-1-丙基-哌啶（4-(3-methanesulfonyl-phenyl)-1-propyl-piperidine）是目前正在被临床研发用于治疗亨丁頓舞蹈症的药物物质。WO01/46145中描述了4-(3-甲磺酰基-苯基)-1-丙基-哌啶盐酸盐和它的合成方法。WO2006/040155中描述了一种合成4-(3-甲磺酰基-苯基)-1-丙基-哌啶的替代方法。按照这些合成路线，结晶相（crystalline phase）结果具有199℃的熔点。这个结晶相被指定为形态I。

普利多匹定盐酸盐形态I是正交晶系空间群Pna2₁，晶格参数为α=90℃,β=90℃,γ=90℃,和晶胞体积为的晶体。形态I由X射线粉末衍射图表征，具有下表1所示的特征d-间距（d-spacing's），或大致如图1描述的衍射图；大致如图2所示的DSC热谱图，具有大约199℃的吸热（an endotherm withan onset of about199℃）；大致如图3描述的IR光谱；和大致如图4描述的TGA热谱图。

表1

动态蒸汽吸附(dynamic vapour sorption)(DVS)曲线显示在80%RH以下形态I是非吸湿的，但是超过80%RH是潮解的（图5）。TGA显示形态I是非溶剂化形态（图4）。形态I在含水液体中是高度可溶的，具有高于200mg/ml的水溶性。

使用影像分析（image analysis）研究了形态I的粒度大小和形状分布，如下表2所示。D₅₀是21μm，D₁₀和D₉₀分别是9和42μm。长宽比（aspect ratio）(AR)由微粒的最长的尺寸除以最短的尺寸得到。因为AR₅₀是3.1，所以该微粒是针状。

表2

形态I的体积密度（bulk density）和振实密度（tapped density）分别是0.212g/ml±2.2%和0.264g/ml±1.1%。

对普利多匹定盐酸盐进行多晶型物筛选，包括各种结晶方法例如在有机溶剂中制浆，溶剂蒸发，冷却结晶，快速冷却（crash cooling）和加入反溶剂。使用了大量的溶剂选择以增加找到新的多晶型形态的机会。但是，在该筛选中除了已知的形态I之外没有找到其它的形态。

发明内容

药物物质的新的多晶型形态的发现为改善药物的性能特征提供了新的机会。重要的参数例如熔点，吸湿性和结晶度在最合适的药物形态选择中具有至高无上的重要性。另外，体积特征（bulk properties）例如粒度大小和形状会影响药物产品的制备。

普利多匹定正在被研发成为盐酸盐，本发明针对的是该盐酸盐的结晶形态II。该结晶形态在上面的WO01/46145和WO2006/040155描述的合成研发期间没有被发现，在上面描述的多晶型物筛选中也没有被找到，该多晶型物筛选的目的是促进新的固体形式的结晶。所以，形态II的存在不是显而易见的。

根据本发明，鉴定了一种新的4-(3-甲磺酰基-苯基)-1-丙基-哌啶盐酸盐（4-(3-methanesulfonyl-phenyl)-1-propyl-piperidine hydrochloride salt）的多晶型物，提供了它的制备方法。

在另一方面，包括治疗有效量的根据本发明的4-(3-甲磺酰基-苯基)-1-丙基-哌啶盐酸盐和一种或多种佐剂、赋形剂、载体和/或稀释剂的药物组合物。

从另一个方面看，本发明涉及本发明的4-(3-甲磺酰基-苯基)-1-丙基-哌啶盐酸盐用作药剂。

在再一方面，本发明提供了一种治疗、预防或缓和多巴胺介导的失调的方法，该方法包括给予需要它们的此类活的动物体治疗有效量的本发明的4-(3-甲磺酰基-苯基)-1-丙基-哌啶盐酸盐的步骤。

本领域技术人员从以下的详细描述和例子很明白本发明的其它目的。

具体实施方式

普利多匹定是一种多巴胺能的稳定剂（dopaminergic stabilizer），目前正在被研发用于治疗亨丁頓舞蹈症。该药物物质是呈叔胺形式的弱碱，具有计算的pKa值为8.9。

4-(3-甲磺酰基-苯基)-1-丙基-哌啶；普利多匹定

在形态I的DSC分析期间发现了一种新的普利多匹定盐酸盐的结晶形态，形态II。对一些形态I批次来说，DSC热谱图显示了一额外的大约210℃的吸热（endotherm withan onset of about210℃），在形态I的熔化温度大约199℃（图6）之后。这表明有新的结晶相（crystalline phase）存在。为了分离这种晶体相，将形态I的样品加热到203℃，然后冷却。作为结果的固体相的XRPD显示一种新的固体形态形成了，这种形态被指定为形态II。

因此，在本发明的第一方面中，提供了一种4-(3-甲磺酰基-苯基)-1-丙基-哌啶盐酸盐或其溶剂化物的新的结晶形态，形态II。

在一个优选的具体实施方式中，该结晶形态II是以无水形式提供的。

在另一个优选的具体实施方式中，该结晶形态II是以无水形式和非溶剂化形式提供的。

本发明的结晶形态II由粉末X射线衍射图表征，具有下表3所示的d-间距或大致如图7描述的衍射图。

表3

因此，在第三个优选的具体实施方式中，本发明的结晶4-(3-甲磺酰基-苯基)-1-丙基-哌啶盐酸盐由具有X射线粉末衍射图表征，具有对应于d-间距（d-spacing）值6.1和4.9的反射。

在一更优选的具体实施方式中，本发明的结晶形态II由具有X射线粉末衍射图表征，具有对应于d-间距值8.9和4.1的反射。

在第三个更优选的具体实施方式中，本发明的结晶形态II可由具有X射线粉末衍射图表征，具有对应于d-间距值8.9、7.7、6.7、6.1、5.1、4.9、4.3、4.1和3.6的反射。

在第三个优选的具体实施方式中，本发明的结晶形态II可由具有大致如图8所示的DSC热谱图表征。

在第四个优选的具体实施方式中，本发明的结晶形态II可由具有如用DSC得到的大约210℃的吸热表征。

在第五个优选的具体实施方式中，本发明的结晶形态II可由具有大致如图9描述的IR光谱图表征。

在第六个优选的具体实施方式中，本发明的结晶形态II可由具有大致如图10描述的TGA热谱图表征。

形态II是单斜晶系空间群P2₁/c，具有晶胞参数α=90℃，β=91.1℃，γ=90℃，晶胞体积的的晶体。动态蒸汽吸附（DVS）曲线显示在80%RH以下形态II是非吸湿的，但是超过80%RH是潮解的（图11）。TGA显示形态II是非溶剂化物形式（图10），卡尔·费休（Karl Fisher）分析证实了该盐的无水性质。因为当暴露于溶剂中时，形态II快速转换为形态I，所以形态II在室温下的溶解度不能确定。

在给定的温度下，只有一种多晶型形态是热力学稳定的。所以在环境温度下，确定哪个多晶型物是最稳定的和多晶型物之间的稳定性关系是如何受温度改变影响的具有重要意义。在环境温度下的稳定性是通过将两种形态暴露于溶剂中形成浆确定的。当暴露于溶剂中时，形态II快速转换成形态I，由此得出形态I是环境温度下的稳定形态。

基于热力学数据，研究了这些形态的相对热力学稳定性作为温度的函数。根据布格尔和瑞木伯格尔（Burger&Ramberger）（Burger A and Ramberger R:On thepolymorphism of pharmaceuticals and other molecular crystals;I.Mikrochim.Acta.II1979259-271）提出的熔解热法则，因为形态II比形态I具有较高的熔点和较低的熔解热，所以这些多晶型物对映性地相关。形态I具有熔点为199℃和熔解热为34.8KJ/mol，然而如DSC测定的，形态II具有熔点为210℃和熔解热为32.0KJ/mol。

在第七个优选的具体实施方式中，本发明的结晶4-(3-甲磺酰基-苯基)-1-丙基-哌啶盐酸盐由具有大致如图8所示的DSC热谱图和由具有210℃的吸热表征。

当两种形态是对映性地相关时，为了能够控制合成结果和药品加工，确定转换温度（T_t）是具有重要意义。禹莲（Lian Yu）（Yu L:Inferring thermodynamic stability relationshipof polymorphs from melting data;J.Pharm.Sci.199584966-974）提出了一种基于熔点和熔解热计算T_t的模型。使用这个模型，得到了T_t为127℃。为了从实验上证实这个发现，进行了晶种实验（seeding experiment），其中两种形态的混合物在多个温度下，在有机溶剂中成浆4个小时。

浆化后，通过XRPD确定产生的固体相的身份。在125℃以下的温度中，多晶型产物是形态I，在130℃以上，产物是形态II。所以该研究表明了形态I和形态II对映性地相关，在室温下形态I是最稳定的形式，在127℃以上的温度下，形态I是最稳定的形式。

用影像分析对形态II的粒度大小—和形状分布进行了研究，结果列于下表4中。D₅₀是170μm，D₁₀和D₉₀分别是49and363μm。通过微粒的最长尺寸除以最短的尺寸得到长宽比（AR）。因为和形态I的3.1相比形态II的AR50是1.6，所以形态II比形态I较少地呈针状。在已知针状微粒影响粉末的流动和压缩性能的情况下，这也许是药品加工方面的优势。

表4

形态II的体积密度和振实密度分别是0.382g/ml±0.3%和0.486g/ml±1.1%，远远大于形态I的密度（参见表2）。这也许暗示例如在制定胶囊过程中，较小的硬胶囊可被用于给予与形态I相同量的形态II。

制备方法

普利多匹定盐酸盐的形态II在127℃以上的温度下是热力学稳定的，因此，在高温下重结晶形态I制备形态II应该是可能的。但是，在没有添加形态II的晶种的情况下，通过在127℃以上的温度下重结晶形态I制备形态II的尝试失败了。

为了成功地制备形态II，有必要通过加热固体形态I到203℃以使形态I熔化，对形态II重结晶，然后冷却来制备形态II晶种。这是在TGA烘箱中完成的。以这种方式制备的晶种用于制备形态II。在165℃下形态I溶解在1,2-二氯苯中以形成澄清的溶液。加入形态II晶种，将加入晶种的溶液在165℃结晶。形成的悬浮液在150℃过滤，晶体在真空下干燥。

生物活性

WO01/46145、WO01/46146、WO2005/121087、WO2007/042295、WO2008/127188和WO2008/155357都描述了取代的4-苯基-N-烷基-哌嗪（4-phenyl-N-alkyl-piperazines）和4-苯基-N-烷基-哌啶（4-phenyl-N-alkyl-piperidines），它们被报道是多巴胺神经传递的调节器，对中枢神经系统的各种失调症状的治疗中很有用。本发明的4-(3-甲磺酰基-苯基)-1-丙基-哌啶盐酸盐被认为可用于像这些公开案描述的同样的医学适应症。因此，这些公开案通过引用被并入本发明。

根据这些公开案，预期的神经学上的主治包括亨丁頓舞蹈症和其他运动障碍，以及药物诱发的运动障碍的治疗。

因此，在一个优选的具体实施方式中，本发明涉及将本发明的4-(3-甲磺酰基-苯基)-1-丙基-哌啶盐酸盐用作治疗亨丁頓舞蹈症的药剂。

药物组合物

从另一个方面看，本发明提供呈结晶形态的4-(3-甲磺酰基-苯基)-1-丙基-哌啶盐酸盐，或其溶剂化物用作药剂。因此，在另一个方面，本发明提供新颖的包括治疗有效量的本发明的化合物的药物组合物。

虽然本发明的化合物物在治疗中可以以未经加工的化合物形式给予，但是，首选采用活性成分，可选择地呈药学上可接受的盐的形式，在药物组合物中和一种或多种佐剂、赋形剂、载体、缓冲剂、稀释剂和/或其它常用的药物辅助剂。

本发明的药物组合物可具体地被配制成如WO01/46145所描述的。

制剂和给药技术的进一步的细节可在最新版本的雷明顿药物科学（Remington'sPharmaceutical Sciences）（Maack出版公司，伊斯顿（Easton），宾夕法尼亚（PA））中找到。

给药剂量当然必须针对年龄、体重和治疗个体的状况，以及给药途径、剂型和方案，和想要的结果小心地调整，准确的剂量当然应该由从业医生决定。

实际剂量取决于所要治疗疾病的性质和严重程度，在医师的自行决定之内，并针对本发明的具体情况通过剂量滴定可被改变以产生想要的治疗效果。但是，目前正在预计包含每个人剂量从大约1到大约500mg的活性成分，优选地，从大约10到大约100mg，最优选地，从大约25到大约50mg的药物组合物适合用于治疗。日剂量优选地以个人剂量每天1到4次给予。

治疗方法

在另一方面，本发明提供治疗、预防或缓和多巴胺介导的活的动物体，包括人的失调，该方法包括给予需要它们的此类活的动物体治疗有效量的本发明的4-(3-甲磺酰基-苯基)-1-丙基-哌啶盐酸盐的步骤。

在一优选的具体实施方式在，该多巴胺介导的失调是亨庭顿舞蹈症。

附图说明

通过引用附图进一步说明本发明，其中：

图1显示了结晶的普利多匹定盐酸盐形态I的特征X射线粉末衍射图；

图2显示了结晶的普利多匹定盐酸盐形态I的特征DSC热谱图；

图3显示了结晶的普利多匹定盐酸盐形态I的特征FT-IR光谱；

图4显示了结晶的普利多匹定盐酸盐形态I的特征TGA热谱图；

图5显示了在相对湿度范围0-95%内结晶的普利多匹定盐酸盐形态I的特征动态蒸汽吸附（DVS）曲线；

图6显示了结晶的普利多匹定盐酸盐形态I的DSC热谱图，其中显示了形态I的特征吸热(199℃)和形态II的特征吸热(210℃)；

图7显示了结晶的普利多匹定盐酸盐形态II的特征X射线粉末衍射图；

图8显示了结晶的普利多匹定盐酸盐形态II的特征DSC热谱图；

图9显示了结晶的普利多匹定盐酸盐形态II的特征FT-IR光谱；

图10显示了结晶的普利多匹定盐酸盐形态II的特征TGA热谱图；

图11显示了在相对湿度范围0-95%内结晶的普利多匹定盐酸盐形态II的特征动态蒸汽吸附（DVS）曲线；

实施例

通过引用下面的实施例进一步说明本发明，这些实施例并不以任何方式限制本发明请求保护的范围。

实施例1

制备普利多匹定形态II

为了较大（克）规模地制备形态II，有必要首先制备毫克级的形态II晶种。这可以通过加热固体形态I到203℃使形态I熔化，随后重结晶形态II，然后冷却完成。这可以在TGA烘箱内进行。用这种方法制备了大约10mg的形态II。

为了制备形态II，约180℃加热回流下，15g普利多匹定形态I溶解在375ml的1,2-二氯苯中。在约165℃时形成了澄清的溶液。该溶液被转移到165℃的油浴中，加入普利多匹定形态II的晶种，一旦晶种开始生长，就开始搅拌。经过30分钟温度降低到150℃。再经另一个30分钟后，在150℃下过滤悬浮液，随后用庚烷洗涤。真空干燥晶体：熔点210℃。下表5显示了CHN的分析结果。

NMR1H NMR(DMSO-d6):0.93(3H,t),1.73-1.79(2H,m),2.00-2.13(4H,m),2.96-3.06(5H,m),3.23(3H,s),3.54-3.57(2H,m),7.61-7.67(2H,m),7.79-7.84(2H,m),10.52(1H,bs)

表5

实施例2

普利多匹定的多晶型物筛选

对普利多匹定进行多晶型物筛选，看看使用不同的溶剂通过不同的结晶方法能否形成形态I的替代固体形态。采用了下列溶剂和溶剂混合物。

乙醇乙醇：水90:10丙酮丙酮：水90:10二甲亚砜（DMSO）N，N-二甲基乙酰胺（DMA）N-甲基吡咯烷酮（NMP）1-丁醇2-丙醇甲苯四氢呋喃（THF）乙腈乙腈：水90:10乙酸乙酯

下面对每个实验进行了描述。

在溶剂中制浆

初始量的普利多匹定被加入到小型、干净的艾本德（Eppendorf）塑料瓶中，加入适的溶剂/溶剂混合物，将小瓶放在旋转式混合器（rotamixer）上过夜。如果在那时观察到澄清的溶液，加入更多的化合物，将小瓶放回到旋转式混合器。继续这个过程直至在所有的小瓶中都能观察到含有固体普利多匹定的溶液。总的平衡时间是7天。干燥的沉淀物由XPRD表征。

溶剂蒸发

在制浆实验过程中产生的上层清液用穿孔封口膜覆盖，放在室温阴暗处。在真空烘箱中在40℃下蒸发高沸点溶剂，干燥的沉淀物由XRPD分析。

冷却结晶

用水浴，在50℃下在优良的溶剂中制备普利多匹定的饱和溶液。该溶液被覆盖且放置在冰箱中一周。干燥的沉淀物由XRPD分析。

快速冷却

用水浴，在50℃下在优良的溶剂中制备普利多匹定的饱和溶液。通过将它们放置在干的冰盐混合物中几分钟快速冷却该溶液。如果没有立即发生沉淀，该溶液被保持在冰箱中直到第二天。上层清液被转移走，干燥的物质由XRPD分析。

非溶剂沉淀

用水浴，在50℃下在优良的溶剂中制备普利多匹定的饱和溶液。向这些溶液中逐滴加入冷的（室温）非溶剂直至溶液体积翻倍。上层清液被转移走，干燥的物质由XRPD分析。

压缩

普利多匹定粉末被填充到液压IR-压片机（hydraulic IR-press）的压模（die）中。该压模被放置在压片机中，粉末在10吨下压24小时。压缩的材料由XRPD分析。

XRPD分析显示，所有的形成的材料都是形态I。

实施例3

分析方法

X射线粉末衍射

使用布鲁克D8高级衍射仪（Bruker D8Advance diffractometer）进行X射线粉末衍射（XRPD）实验，该衍射仪的配置列表如下：

测角仪（Goniometer）角-角法（Theta-theta）几何学（Geometry）布拉格-布伦塔诺（Bragg-Brentano geometry）几何学主要狭缝（Primary slit）1.0mm和2.5°索勒狭缝（soller slit）次级准直仪1.0mm和2.5°索勒狭缝探测器狭缝0.1mm单色仪Ni-滤波器（Ni-filter）探测器闪烁计数器扫描范围3-30°,2θ扫描速度5秒/步长（step），0.020°2θ/步长放射源CuK发生器40kV,40mA抽样阶段9位置（position），自旋模式

将样品放置在一薄层凡士林中的零衬底硅单晶样品架（zero back ground siliconsingle crystal sample holder）上。使用布鲁克（Bruker）“XRD管理器（XRD Commander）”，2.6.1版本获得衍射图样，并且使用“布鲁克评价（Bruker Evaluation）”，11,0,0,3版本评估。

按照这个步骤，得到了表2所示的d-间距和图8所示的衍射图。

差示扫描量热法

差示扫描量热法(DSC)实验是在梅特勒托莱多DSC821e（Mettler Toledo DSC821e）示差扫描热量计上进行的，使用梅特勒-托莱多（Mettler-Toledo）StarE ver.9.2软件包。样品（约3mg）在带孔的（pinholed）铝制平底锅中以，10℃/min从30℃加热到300℃。DSC不断地用干燥的氮气净化，通常用铟和锌校准。

按照这个步骤，获得了图9所示的DSC热谱图。

热解重量分析法

热解重量分析法（TGA）实验是在梅特勒托莱多（Mettler Toledo）TGA/SDTA851e上进行的。样品（约10mg）在敞开的铝坩埚中，以10℃/min从30℃加热到300℃。TGA不断地用干燥的氮气净化，且通常用铟和铝校准。使用梅特勒-托莱多（Mettler-Toledo）StarE ver.9.2软件包评估数据。

按照这个步骤之，获得了图11中所示的TGA热谱图。

傅里叶变换红外光谱学

傅里叶变换红外光谱学（FTIR）实验是在铂金埃尔默（Perkin-Elmer）Spectrum OneFTIR仪器上进行，该仪器配备有衰减全反射（ATR）单元Goldengate，该单元由Specac提供。该系统使用光谱5.0.1版本（Spectrum Ver.5.0.1）软件控制。将样品（约1-2mg）直接放置在ATR单元的金刚石表面上，铁砧紧压样品。在4000-600cm-1波数范围内分析样品。仪器通常对着内置聚苯乙烯滤波器被校准。

按照这个步骤，获得了图10所示的结晶的普利多匹定盐酸盐形态II的FT-IR光谱。

卡尔费舍尔滴定法

采用卡尔费舍尔（KF）滴定法（Karl Fischer(KF)titrations）使用瑞士万通KF756KF电量计（Metrohm KF756KF Coulometer）测定水分，该电量计装备有不带有隔膜的发生器电极（generator electrode）。滴定仪配备有瑞士万通832KF Thermoprep炉（Metrohm832KF Thermoprep oven）。样品在小型的HPLC玻璃瓶中测重，密封，然后放到烘箱中（130℃）。这里用针刺穿HPLC瓶的橡胶隔片，且干燥的载气（N2）被用来将释放出的水分通过加热的管带到滴定室。

在样品滴定之前，滴定一系列空白以确定空白标准（blank level）。对空白试验值（blank value）来说，结果被自动地校正。仪器通常通过使用可靠的标准用具有证实的水分含量被控制。

动态蒸汽吸附测量

动态蒸汽吸附（DVS）测量是使用来自TA仪器的Q5000SA进行的。

实验是在0%RH和95%RH之间的两个吸附/脱附循环中进行的。在第一个吸附循环之前，样品在20%RH中平衡，记录初始重量。在铝平底锅中分析样品。将湿度降低到0%RH，干燥样品直到重量稳定在一个给定的范围内。温度在25℃保持不变。最大的阶跃时间（step time）是720分钟，气流量是200cm³/min。

按照这个步骤，获得了图12所示的DVS曲线。

CHN测量

CHN测量是在哥本哈根大学化学学院Mikroanalytisk实验室（MikroanalytiskLaboratorium,Kemisk Institut,University of Copenhagen）中进行的，利用Flash EA1112分析器。

约2mg化合物在小型锡制烧杯中称重并且被放到燃烧室中。产生的气体收集在柱上并通过气相色谱分析。该分析以一式两份进行。

影像分析

利用蔡司Axiolab显微镜（Zeiss Axiolab microscope）（卡尔蔡司(Carl Zeiss),哥廷根，德国）进行显微镜分析。利用DeltaPix数码相机和Deltapix软件版本1.6（Maaloev，丹麦）捕获显微照片。没有浸没油时，使用5x放大率物镜（1.626μm/像素），具有液体石蜡作为浸没油时，使用40x放大率物镜（0.208μm/像素）。粒度大小是利用Motic Image Plus2.0软件（麦克奥迪（Motic）集团股份有限公司，中国）测定的，并针对用使用过的物镜拍摄的基准标度（reference scales）的图片进行校准。利用Matlab版本2009b（Mathworks股份有限公司，美国）计算粒度大小分布和长宽比分布。

体积密度和振实密度

如Ph.Eur.2.9.34描述的，进行密度测定。该方法被修改为：放置在250ml体积的玻璃量筒中的样品量是50.0g，以100敲击/分钟，进行了2500次敲击。该测定是以一式三份地进行。