公开/公告号CN104003999A
专利类型发明专利
公开/公告日2014-08-27
原文格式PDF
申请/专利权人 中国科学院华南植物园;
申请/专利号CN201410204144.9
申请日2014-05-14
分类号C07D493/18(20060101);
代理机构44001 广州科粤专利商标代理有限公司;
代理人刘明星
地址 510650 广东省广州市天河区五山乐意居
入库时间 2023-12-17 00:20:51
法律状态公告日
法律状态信息
法律状态
2016-01-13
授权
授权
2014-09-24
实质审查的生效 IPC(主分类):C07D493/18 申请日:20140514
实质审查的生效
2014-08-27
公开
公开
技术领域
本发明属于天然产物领域,具体涉及一种从荔枝叶中制备分离得到cinnamtannin B1的方法。
发明背景
荔枝属于无患子科,素有“岭南果王”之称,是广东四大名果之一。荔枝香甜可口,营养价值和保健功能较高,是传统的保健食品,深受广大消费者的喜爱。我国是世界上最早栽培荔枝的国家,历史悠久;也是世界上荔枝产量最大的国家,品种繁多。荔枝叶为荔枝树的枝叶,全年可采,资源丰富。研究发现,荔枝核和荔枝壳中富含黄酮类化合物,具有抗氧化、抗癌、降血糖等生物活性,然而目前外关于荔枝叶活性成分的研究极为有限,相关活性物质组成仍有待研究。
cinnamtannin B1,其结构式如式(Ⅰ)所示:
发明内容
本发明的目的是提供一种制备cinnamtannin B1的方法。
本发明的制备cinnamtannin B1的方法,其特征在于,包括以下步骤:用体积分数40~100%甲醇或乙醇水溶液浸提荔枝叶,将浸提液浓缩去除甲醇或乙醇后用水溶解,再先后分别用石油醚、乙酸乙酯萃取,将乙酸乙酯相浓缩得浸膏,浸膏经硅胶柱层析,以氯仿/甲醇为洗脱剂,从体积比100/0~60/40梯度洗脱,收集氯仿/甲醇体积比为75/25洗脱的馏分,该馏分再经反相柱层析,以甲醇/水为洗脱剂,从体积比5/95~45/55梯度洗脱,收集甲醇/水体积比为10/90洗脱的馏分,该馏分再经过Sephadex LH-20柱层析,甲醇作为洗脱溶剂,即可得到cinnamtannin B1。
所述的荔枝叶优选为荔枝叶粉末,进一步优选是将新鲜的荔枝叶晒干或烘干后,粉碎过20~120目筛的荔枝叶粉末。
所述的用体积分数40~100%甲醇或乙醇水溶液浸提荔枝叶,甲醇或乙醇水溶液的用量是5~20mL/g荔枝叶,浸提的温度优选为25~80℃,浸提时间为4~35小时。
所述的将浸提液浓缩去除甲醇或乙醇后用水溶解,优选是将浸提液在40~80℃下浓缩除去甲醇或乙醇,再加入1~3倍体积的水溶解。
所述的先后分别用石油醚、乙酸乙酯萃取,优选是先用石油醚萃取3~12次,再用乙酸乙酯萃取3~12次。
本发明还提供了荔枝叶在制备cinnamtannin B1中的应用。
本发明从荔枝叶中制备分离得到了cinnamtannin B1,其产率为51~196mg/kg(纯度为85~95%)。本发明对于推动荔枝的深加工利用,提升荔枝产品附加值,促进该行业的可持续发展具有重要的意义。同时也为cinnamtannin B1的制备提供了一种新的方法。
具体实施方式:
以下实施例是对本发明的进一步说明,而不是对本发明的限制。
实施例1:cinnamtannin B1制备分离和结构鉴定。
一、cinnamtannin B1的制备分离
1)选料:选择新鲜荔枝叶,清水洗涤;
2)干燥粉碎:将荔枝叶晒干或烘干,采用粉碎机粉碎成粉末,过20目筛,获得荔枝叶粉末;
3)浸提:将荔枝叶粉末加入5倍体积(即5mL/g荔枝叶粉末)的体积分数40%的甲醇水溶液中,在80℃浸提4小时,过滤,收集过滤液;
4)有机溶剂分级:将上述过滤液在40℃下浓缩除去甲醇,加入其1倍体积的水,先后分别用等体积的石油醚、乙酸乙酯分别萃取3次;选择乙酸乙酯相萃取液浓缩得浸膏用于后续纯化。
5)取乙酸乙酯相萃取液的浸膏(200g),采用硅胶柱(100~200目)层析,以氯仿/甲醇为洗脱溶剂,从体积比100/0~60/40梯度洗脱,收集氯仿/甲醇体积比为75/25洗脱的组分,再经C18反相柱层析,以甲醇/水为洗脱剂,从体积比5/95~45/55梯度洗脱,收集甲醇/水体积比为10/90洗脱的馏分,该馏分经过Sephadex LH-20柱层析,甲醇作为洗脱溶剂,最后收集组分在60℃蒸发浓缩干燥,即可得到化合物1(cinnamtannin B1)。
采用该方法获得的cinnamtannin B1产率为51~95mg/kg,纯度为85~95%。
二、化合物cinnamtannin B1的结构鉴定
化合物1(cinnamtannin B1)为黄色粉末,可溶于甲醇,ESI-MS质谱结果表明该化合物分子量为864。该化合物的1H NMR(500MHz,CD3OD)和13C NMR(125MHz,CD3OD)见表1:
表1.化合物1(Cinnamtannin B1)的13C与1H谱化学位移
综上所述,鉴定该化合物1的结构式如式(Ⅰ)所示,名称为:cinnamtannin B1,该化合物易溶于甲醇。
实施例2:
1)选料:选择新鲜荔枝叶,清水洗涤;
2)干燥粉碎:将荔枝叶晒干或烘干,采用粉碎机粉碎成粉末,过120目筛,获得荔枝叶粉末;
3)浸提:将荔枝叶粉末加入20倍体积(20mL/g荔枝叶粉末)的体积分数为90%甲醇水溶液,在室温浸提35小时,过滤,收集滤过液;
4)有机溶剂分级:将上述滤过液在60℃浓缩除去甲醇,加入其3倍体积的水,先后分别用等体积的石油醚、乙酸乙酯分别萃取12次;选择乙酸乙酯相萃取液浓缩后得浸膏用于后续纯化。
后续纯化步骤与实施例1相同,由此得到化合物并鉴定为cinnamtannin B1。
采用该方法获得的cinnamtannin B1产率为150~196mg/kg,纯度均为85~95%。
实施例3:
1)选料:选择新鲜荔枝叶,清水洗涤;
2)干燥粉碎:将荔枝叶晒干或烘干,采用粉碎机粉碎成粉末,过60目筛,获得荔枝叶粉末;
3)浸提:将荔枝叶粉末加入10倍体积(10mL/g荔枝叶粉末)的体积分数为40%乙醇水溶液,在50℃浸提20小时,过滤,收集滤过液;
4)有机溶剂分级:将上述滤过液在60℃浓缩除去乙醇,加入其2倍体积的水,先后分别用等体积的石油醚、乙酸乙酯分别萃取6次;选择乙酸乙酯相萃取液浓缩后得浸膏用于后续纯化。
后续纯化步骤与实施例1相同,得到化合物并鉴定为cinnamtannin B1。
采用该方法获得的cinnamtannin B1的产率为90~142mg/kg,纯度均为85~95%。
实施例4:
1)选料:选择新鲜荔枝叶,清水洗涤;
2)干燥粉碎:将荔枝叶晒干或烘干,采用粉碎机粉碎成粉末,过60目筛,获得荔枝叶粉末;
3)浸提:将荔枝叶粉末加入10倍体积(10mL/g荔枝叶粉末)的体积分数100%乙醇溶液,在25℃浸提15小时,过滤,收集滤过液;
4)有机溶剂分级:将上述滤过液在70℃浓缩除去乙醇,加入1倍体积的水,先后分别用等体积的石油醚、乙酸乙酯、正丁醇分别萃取6次;选择乙酸乙酯相萃取液浓缩后得浸膏用 于后续纯化。
后续纯化步骤与实施例1相同,得到化合物并鉴定为cinnamtannin B1。
采用该方法获得的cinnamtannin B1的产率为82~129mg/kg,纯度均为85~95%。
机译: 疫苗诱导的乙型肝炎病毒株,核酸编码的分子编码丙型肝炎病毒的突变株主要表面抗原,用于制备多肽的矢量和矢量系统,一种用于制备多肽(多肽)(多变体)的方法寡核苷酸,一种抗体(变体)的制备方法,抗体(多种),一种测定治疗乙型肝炎病毒感染的化学成分的方法,一种成分,一种制备方法,一种方法乙型肝炎病毒的有机液体筛查,一种抗体使用方法,疫苗接种疫苗
机译: 用于对流体进行生物修饰的装置,用于对生物体内的流体进行生物修饰的装置,为生物提供具有一种或多种肝功能的体外装置,向生物体提供生命的体内装置一种或多种具有肝功能的生物,一种提供具有一种或多种肾功能的生物的体内装置,一种或多种具有肾脏和肝功能的生物的体内装置,为生物提供一种或多种肾功能,对生物进行流体生物学修饰的方法,制备连续平面器官的方法,为生物提供一种或多种肝功能的方法,方法提供具有一种或多种肾脏功能的生物,通过低温技术制备和使用保存的器官微粒的方法和方法提供具有一种或多种肾脏和生命的生物
机译: 需要一种制备至少一种化合物的方法,使用至少一种化合物取代基,一种制备化合物衍生物的方法,一种化合物n-alc n己二醇,一种制备化合物的方法,使用该化合物,具有至少37%的化合物生物学起源和组成漂移