电子显微镜用包埋树脂组合物及使用该组合物的利用电子显微镜观察试样的观察方法

摘要

本发明提供具有包埋性能、可切薄性等作为包埋剂的充分的性能且发挥优良的防静电能力的电子显微镜用包埋树脂组合物及使用该组合物的利用电子显微镜观察试样的观察方法。本发明的电子显微镜用包埋树脂组合物含有离子液体和包含环氧类树脂、甲基丙烯酸树脂或不饱和聚酯树脂的包埋剂，并且具有防静电能力。离子液体优选包含由式(I)表示的季铵化合物以及选自由BF4-、PF6-、(CF3SO2)2N-、卤化物离子、羧酸的共轭碱、磺酸的共轭碱和无机酸的共轭碱组成的组中的阴离子。

说明书

技术领域

本发明涉及电子显微镜用包埋树脂组合物及使用该组合物的利用电子显微镜观察试样的观察方法。

背景技术

作为细胞、组织等生物试样、高分子树脂试样、无机物等结晶性试样的超微观察，一般使用电子显微镜。作为电子显微镜，已知扫描电子显微镜(以下也称为SEM)和透射电子显微镜(以下也称为TEM)。

专利文献1中记载了将观察用试样用包埋剂包埋并利用切片机等切成薄片来进行制备的方法。作为包埋剂，使用环氧树脂、不饱和聚酯树脂、丙烯酸树脂等，但均为绝缘物。因此，存在利用电子显微镜进行观察时带电而难以观察对象物、或者由于电子显微镜内的放电现象而损坏检测器的问题。该问题在利用SEM对绝缘物进行观察时特别成为问题。

对于利用SEM进行观察时的带电，以往使用在观察方法上想办法的方法。例如，以往，在入射电子与发射电子获得平衡的特定角度条件下进行观察、在低真空条件下进行观察或者在低电流条件下进行观察等，但存在如下问题：可观察的范围窄，得不到足够的对比度、分辨率，不能进行元素分析。

另外，专利文献2中记载了通过在环氧树脂中添加碱金属盐和聚醚类高分子而具有防静电能力的环氧树脂组合物。但是，该组合物的机械强度不充分，因此，不满足包埋性能、可切薄性等作为包埋剂的性能。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：日本特开平5-26794号公报

专利文献2：日本特开平3-122165号公报

发明内容

发明所要解决的问题

本发明鉴于这样的现有技术所存在的问题而完成，其目的在于提供具有包埋性能、可切薄性等作为包埋剂的充分的性能且发挥优良的防静电能力的电子显微镜用包埋树脂组合物和使用该组合物的利用电子显微镜观察试样的观察方法。

用于解决问题的方法

为了解决上述问题，本发明包含以下的发明。

[1]一种电子显微镜用包埋树脂组合物，

其含有离子液体和包含环氧类树脂、甲基丙烯酸树脂或不饱和聚酯树脂的包埋剂，

并且具有防静电能力。

[2]如[1]所述的组合物，其中，

离子液体包含由式(I)表示的季铵化合物以及选自由BF₄^-、PF₆^-、(CF₃SO₂)₂N^-、卤化物离子、羧酸的共轭碱、磺酸的共轭碱和无机酸的共轭碱组成的组中的阴离子，

式(I)中，R¹、R²、R³和R⁴各自独立地为氢原子、烷基、炔基、烯基、链二烯基、链三烯基、环烷基或脂肪族杂环基，这些基团中的任意氢原子可以被取代基取代，

R¹、R²、R³和R⁴中的至少一个为烯基、链二烯基、链三烯基或含环氧基的基团，

R¹、R²、R³和R⁴可以相互键合而形成环。

[3]如[2]所述的组合物，其中，R¹为环氧基、缩水甘油基或碳原子数2～10的烯基。

[4]如[2]或[3]所述的组合物，其中，R²、R³和R⁴各自独立地为碳原子数1～6的烷基。

[5]如[2]～[4]中任一项所述的组合物，其中，季铵化合物为单体、低聚物或它们的混合物。

[6]如[2]～[5]中任一项所述的组合物，其中，阴离子为(CF₃SO₂)₂N^-。

[7]如[1]～[6]中任一项所述的组合物，其中，离子液体的添加量相对于组合物整体为5～35体积%。

[8]一种利用电子显微镜观察试样的观察方法，其包括：

使用[1]～[7]中任一项所述的组合物对试样进行包埋的包埋步骤。

[9]如[8]所述的观察方法，其中，

包括对试样进行染色的染色步骤，

在染色步骤后进行包埋步骤。

[10]如[8]或[9]所述的观察方法，其中，电子显微镜为扫描电子显微镜。

[11]如[8]～[10]中任一项所述的观察方法，其中，试样为生物试样。

[12]如[11]所述的观察方法，其中，生物试样为植物或动物的细胞或组织。

[13]如[8]～[10]中任一项所述的观察方法，其中，试样为非生物试样。

[14]如[13]所述的观察方法，其中，非生物试样为树脂、橡胶、合成树脂、颜料、涂料、化妆品、药品、陶瓷、磁体、磁性材料、半导体、金属、金属氧化物、矿物、有机盐或无机盐。

[15]如[8]～[14]中任一项所述的观察方法，其中，试样为粉体。

发明效果

本发明的电子显微镜用包埋树脂组合物具有包埋性能、可切薄性等作为包埋剂的充分的性能，发挥优良的防静电能力。

附图说明

图1是表示使用实施例1的电子显微镜用包埋树脂组合物包埋肝细胞时利用电子显微镜得到的观察结果的照片(倍率2000倍)。

图2是表示使用比较例1的电子显微镜用包埋树脂组合物包埋肝细胞时利用电子显微镜得到的观察结果的照片(倍率2024倍)。

图3是表示使用实施例4的电子显微镜用包埋树脂组合物包埋废调色剂时利用电子显微镜得到的二次电子图像的观察结果的照片(倍率200倍)。

图4是表示使用实施例4的电子显微镜用包埋树脂组合物包埋废调色剂时利用电子显微镜得到的反射电子图像的观察结果的照片(倍率2000倍)。

图5是表示使用比较例2的电子显微镜用包埋树脂组合物包埋废调色剂时利用电子显微镜得到的二次电子图像的观察结果(倍率200倍)。

图6是表示使用比较例2的电子显微镜用包埋树脂组合物包埋废调色剂时利用电子显微镜得到的反射电子图像的观察结果的照片(倍率2000倍)。

图7是表示使用实施例5的电子显微镜用包埋树脂组合物包埋塑料类便签纸时利用电子显微镜得到的二次电子图像的观察结果的照片(倍率200倍)。

图8是表示使用实施例5的电子显微镜用包埋树脂组合物包埋塑料类便签纸时利用电子显微镜得到的反射电子图像的观察结果的照片(倍率1200倍)。

图9是表示使用实施例5的电子显微镜用包埋树脂组合物包埋塑料类便签纸时塑料类便签纸的胶糊部分的反射电子图像的观察结果的照片(倍率5000倍)。

图10是表示使用比较例3的电子显微镜用包埋树脂组合物包埋塑料类便签纸时利用电子显微镜得到的二次电子图像的观察结果的照片(倍率200倍)。

图11是表示使用比较例3的电子显微镜用包埋树脂组合物包埋塑料类便签纸时利用电子显微镜得到的反射电子图像的观察结果的照片(倍率1200倍)。

图12是表示实施例6中的废调色剂的三维重构图像的照片。

具体实施方式

本发明的电子显微镜用包埋树脂组合物含有离子液体和包含环氧类树脂、甲基丙烯酸树脂或不饱和聚酯树脂的包埋剂，并且具有防静电能力。

离子液体

本发明中使用的离子液体是指在常温下呈液体状态的盐。

(阳离子)

本发明中使用的离子液体的阳离子只要是构成离子液体的阳离子则没有特别限定，可以使用例如咪唑、吡啶、吡咯烷、季、季铵化合物等。这些阳离子可以单独使用一种或者混合使用两种以上。

作为咪唑，可以列举例如：1,3-二甲基咪唑、1-乙基-3-甲基咪唑、1-乙基-3-甲基咪唑、1-甲基-3-丙基咪唑、1-丁基-3-甲基咪唑、1-己基-3-甲基咪唑、1-丁基-2,3-二甲基咪唑等。

作为吡啶，可以列举例如：1-乙基吡啶、1-丁基吡啶、1-丁基-4-甲基吡啶、1-乙基-3-甲基吡啶、1-乙基-3-(羟甲基)吡啶等。

作为吡咯烷，可以列举例如：N-甲基-N-丙基吡咯烷、N-甲基-N-丁基吡咯烷等。

作为季，可以列举例如：三丁基月桂基、三丁基肉豆蔻基、三丁基鲸蜡基、三丁基硬脂基、三苯基月桂基、三苯基肉豆蔻基、三苯基鲸蜡基、三苯基硬脂基、苄基二甲基月桂基、苄基二甲基肉豆蔻基、苄基二甲基鲸蜡基、苄基二甲基硬脂基等。

作为季铵化合物，可以列举：四甲基铵、四乙基铵、三乙基甲基铵等四烷基铵；三唑、哒嗪、噻唑、唑、嘧啶、吡嗪等。

作为本发明中使用的离子液体中使用的阳离子，优选季铵化合物，其中，更优选为由式(I)表示的季铵化合物。

式(I)中，R¹、R²、R³和R⁴各自独立地为氢原子、烷基、炔基、烯基、链二烯基、链三烯基、环烷基或脂肪族杂环基，这些基团中的任意氢原子可以被取代基取代，

R¹、R²、R³和R⁴中的至少一个为烯基、链二烯基、链三烯基或含环氧基的基团，

R¹、R²、R³和R⁴可以相互键合而形成环。

作为由R¹、R²、R³和R⁴表示的烷基，可以为直链状，也可以为支链状，可以列举例如碳原子数1～20的直链状或支链状的烷基，可以列举例如：甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基、叔丁基、正戊基、新戊基、叔戊基、异戊基、2-甲基丁基、1-乙基丙基、己基、异己基、4-甲基戊基、3-甲基戊基、2-甲基戊基、1-甲基戊基、3,3-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、1,1-二甲基丁基、1,2-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基、2,3-二甲基丁基、1-乙基丁基、2-乙基丁基、庚基、辛基、壬基、癸基、鲸蜡基、硬脂基等直链状或支链状的烷基等。上述烷基的碳原子数优选为1～12，更优选为1～6。

作为由R¹、R²、R³和R⁴表示的炔基，可以为直链状，也可以为支链状，可以列举例如碳原子数2～15、优选碳原子数2～10、更优选碳原子数2～6的炔基，具体而言，可以列举：乙炔基、1-丙炔基、2-丙炔基、1-丁炔基、3-丁炔基、戊炔基、己炔基等。

作为由R¹、R²、R³和R⁴表示的烯基，可以为直链状，也可以为支链状，可以列举例如碳原子数2～15、优选碳原子数2～10、更优选碳原子数2～6的烯基，具体而言，可以列举：乙烯基、1-丙烯基、烯丙基、1-丁烯基、2-丁烯基、3-丁烯基、戊烯基、己烯基、异丙烯基、2-甲基-2-丙烯基、1-甲基-2-丙烯基、2-甲基-1-丙烯基等。

作为由R¹、R²、R³和R⁴表示的链二烯基，可以为直链状，也可以为支链状，可以列举例如碳原子数3～15、优选碳原子数4～10的链二烯基，具体而言，可以列举：丁二烯、戊二烯、己二烯等。

作为由R¹、R²、R³和R⁴表示的链三烯基，可以为直链状，也可以为支链状，可以列举例如碳原子数4～15、优选碳原子数6～12的链三烯基，具体而言，可以列举：己三烯、庚三烯、辛三烯等。

作为由R¹、R²、R³和R⁴表示的环烷基，可以列举例如碳原子数3～14、优选碳原子数5～12、更优选碳原子数6～12的环烷基，具体而言，可以列举：环丙基、环丁基、环戊基、甲基环戊基、环己基、环庚基、环辛基、1,2-二甲基环戊基、1,3-二甲基环戊基、1-乙基-2-甲基环戊基等。

作为由R¹、R²、R³和R⁴表示的脂肪族杂环基，可以列举例如碳原子数2～14且含有至少1个、优选1～3个例如氮原子、氧原子、硫原子等杂原子作为杂原子的、5～8元、优选5或6元的单环的脂肪族杂环基、多环或稠环的脂肪族杂环基。作为脂肪族杂环基，可以列举例如：吡咯烷基-2-酮基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、四氢呋喃基、四氢吡喃基、四氢噻吩基等。

由R¹、R²、R³和R⁴表示的烷基、炔基、烯基、链二烯基、链三烯基、环烷基或脂肪族杂环基的任意氢原子可以被取代基取代。作为上述取代基，没有特别限定，可以列举例如：烷基、炔基、烯基、链二烯基、链三烯基、芳基、烷氧基、亚烷基二氧基、芳氧基、芳烷基氧基、杂芳氧基、烷硫基、环烷基、脂肪族杂环基、芳硫基、芳烷基硫基、杂芳基硫基、氨基、取代氨基、氰基、羟基、氧代基、环氧基、缩水甘油基、硝基、巯基或卤素原子等。上述取代基的个数优选为1～3个，更优选为1或2个。

作为取代基的烷基可以为直链状，也可以为支链状，可以列举例如碳原子数1～20的直链状或支链状的烷基。具体而言，与上述作为R¹、R²、R³和R⁴的烷基相同。

作为取代基的炔基可以为直链状，也可以为支链状，可以列举例如碳原子数2～15、优选碳原子数2～10、更优选碳原子数2～6的炔基。具体而言，与作为上述R¹、R²、R³和R⁴的炔基相同。

作为取代基的烯基可以为直链状，也可以为支链状，可以列举例如碳原子数2～15、优选碳原子数2～10、更优选碳原子数2～6的烯基，具体而言，与上述作为R¹、R²、R³和R⁴的烯基相同。

作为取代基的链二烯基可以为直链状，也可以为支链状，可以列举例如碳原子数3～15、优选碳原子数4～10的链二烯基，具体而言，与上述作为R¹、R²、R³和R⁴的链二烯基相同。

作为取代基的链三烯基可以为直链状，也可以为支链状，可以列举例如碳原子数4～15、优选碳原子数6～12的链三烯基，具体而言，与上述作为R¹、R²、R³和R⁴的链三烯基相同。

作为取代基的环烷基可以列举例如碳原子数3～14、优选碳原子数5～12、更优选碳原子数6～12的环烷基，具体而言，与上述作为R¹、R²、R³和R⁴的环烷基相同。

作为取代基的脂肪族杂环基可以列举例如碳原子数2～14且含有至少1个、优选1～3个例如氮原子、氧原子、硫原子等杂原子作为杂原子的、5～8元、优选5或6元的单环的脂肪族杂环基、多环或稠环的脂肪族杂环基。具体而言，与上述作为R¹、R²、R³和R⁴的脂肪族杂环基相同。

作为取代基的芳基可以列举例如碳原子数6～20的芳基，具体而言，可以列举：苯基、1-萘基、2-萘基、蒽基、菲基、2-联苯基、3-联苯基、4-联苯基、三联苯基等。

作为取代基的芳氧基可以列举例如碳原子数6～14的芳氧基，具体而言，可以列举：苯氧基、甲苯氧基、二甲苯氧基、萘氧基、蒽氧基等。

作为取代基的芳烷基可以列举上述烷基的至少1个氢原子被上述芳基取代的基团，具体而言，可以列举碳原子数7～18的芳烷基，具体而言，可以列举：苄基、苯乙基、1-苯基丙基、3-萘基丙基、二苯基甲基、1-萘基甲基、2-萘基甲基、2,2-二苯基乙基、3-苯基丙基、4-苯基丁基、5-苯基戊基等。

作为取代基的芳香族杂环基可以列举例如碳原子数2～15且含有至少1个、优选1～3个氮原子、氧原子、硫原子等杂原子作为杂原子的、5～8元、优选5或6元的单环式杂芳基、多环式或稠环式杂芳基。作为5或6元的单环式杂芳基、多环式或稠环式杂芳基，可以列举例如：呋喃基、噻吩基、吡咯基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、吡唑基、咪唑基、唑基、噻唑基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、喹啉基、异喹啉基、喹喔啉基、酞嗪基、喹唑啉基、萘啶基、噌啉基、苯并咪唑基、苯并唑基、苯并噻唑基等。

作为取代基的烷氧基可以为直链状，也可以为支链状，或者还可以为环状，可以列举例如碳原子数1～6的烷氧基，具体而言，可以列举：甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、仲丁氧基、异丁氧基、叔丁氧基、正戊氧基、2-甲基丁氧基、3-甲基丁氧基、2,2-二甲基丙氧基、正己氧基、2-甲基戊氧基、3-甲基戊氧基、4-甲基戊氧基、5-甲基戊氧基、环己基氧基、甲氧基甲氧基、2-乙氧基乙氧基等。

作为取代基的亚烷基二氧基可以列举例如碳原子数1～3的亚烷基二氧基，具体而言，可以列举：亚甲基二氧基、亚乙基二氧基、三亚甲基二氧基、亚丙基二氧基、亚异丙基二氧基等。

作为取代基的烷硫基可以为直链状，也可以为支链状，或者还可以为环状，可以列举例如碳原子数1～6的烷硫基，具体而言，可以列举：甲硫基、乙硫基、正丙硫基、异丙硫基、正丁基硫基、2-丁基硫基、异丁硫基、叔丁硫基、戊硫基、己硫基、环己硫基等。

作为取代基的芳烷基氧基可以列举例如碳原子数7～12的芳烷基氧基，具体而言，可以列举：苄基氧基、1-苯基乙氧基、2-苯基乙氧基、1-苯基丙氧基、2-苯基丙氧基、3-苯基丙氧基、1-苯基丁氧基、3-苯基丁氧基、4-苯基丁氧基、1-苯基戊氧基、2-苯基戊氧基、3-苯基戊氧基、4-苯基戊氧基、5-苯基戊氧基、1-苯基己氧基、2-苯基己氧基、3-苯基己氧基、4-苯基己氧基、5-苯基己氧基、6-苯基己氧基等。

作为取代基的芳硫基可以列举例如碳原子数6～14的芳硫基，具体而言，可以列举：苯基硫基、甲苯基硫基、二甲苯基硫基、萘基硫基等。

作为取代基的杂芳氧基可以列举例如含有至少1个、优选1～3个氮原子、氧原子、硫原子等杂原子作为杂原子的、碳原子数2～14的杂芳氧基，具体而言，可以列举：2-吡啶基氧基、2-吡嗪基氧基、2-嘧啶基氧基、2-喹啉基氧基等。

作为取代基的芳烷基硫基可以列举例如碳原子数7～12的芳烷基硫基，具体而言，可以列举：苄基硫基、2-苯乙基硫基等。

作为杂芳基硫基，可以列举例如含有至少1个、优选1～3个氮原子、氧原子、硫原子等杂原子作为杂原子的、碳原子数2～14的杂芳基硫基，具体而言，可以列举例如：2-吡啶基硫基、4-吡啶基硫基、2-苯并咪唑基硫基、2-苯并唑基硫基、2-苯并噻唑基硫基等。

作为取代氨基，可以列举例如：氨基的1个或2个氢原子被烷基、芳基或芳烷基等取代基取代的氨基。

作为被烷基取代的氨基、即烷基取代氨基，可以列举例如：N-甲基氨基、N,N-二甲基氨基、N,N-二乙基氨基、N,N-二异丙基氨基、N-环己基氨基等单烷基氨基或二烷基氨基。

作为被芳基取代的氨基、即芳基取代氨基，可以列举例如：N-苯基氨基、N,N-二苯基氨基、N,N-二甲苯基氨基、N-萘基氨基、N-萘基-N-苯基氨基等单芳基氨基或二芳基氨基。

作为被芳烷基取代的氨基、即芳烷基取代氨基，可以列举例如：N-苄基氨基、N,N-二苄基氨基等单芳烷基氨基或二芳烷基氨基。

上述取代基的一个或两个以上氢原子可以被卤素原子取代。作为卤素原子，可以列举：氟原子、氯原子、溴原子、碘原子等。

式(I)中、R¹、R²、R³和R⁴中的至少一个为烯基、链二烯基、链三烯基或含环氧基的基团。

作为含环氧基的基团，可以列举例如环氧基、缩水甘油基等，从反应性的观点考虑，优选缩水甘油基。

作为烯基、链二烯基、链三烯基，可以列举与上述作为R¹、R²、R³和R⁴的烯基相同的基团。

R¹、R²、R³和R⁴可以相互键合而形成环。作为上述环，可以列举3～10元环、更优选5元或6元的单环或多环，可以含有氮原子、氧原子、硫原子等杂原子。R¹、R²、R³和R⁴可以任意2个基团键合而形成环，也可以3个以上键合而形成环。作为上述环，可以列举例如甲基环戊基、环己基、呋喃基、噻吩基、吡咯基、吡啶基等。

R¹优选为环氧基、缩水甘油基或碳原子数2～10的烯基。这是因为，通过使其为环氧基、缩水甘油基或碳原子数2～10的烯基等反应性高的基团，在与包埋剂混合时发挥优良的防静电能力。

作为由R¹表示的碳原子数2～10的烯基，可以列举：乙烯基、1-丙烯基、烯丙基、1-丁烯基、2-丁烯基、3-丁烯基、戊烯基、己烯基、异丙烯基、2-甲基-2-丙烯基、1-甲基-2-丙烯基、2-甲基-1-丙烯基等。

从反应性的观点出发，特别优选R¹为缩水甘油基或碳原子数1～6的烯基。

R²、R³和R⁴优选各自独立地为碳原子数1～6的烷基，更优选为碳原子数1～4的烷基，特别优选为甲基或乙基。通过使R²、R³和R⁴为上述基团，能够防止R¹的空间位阻，能够确保充分的反应性。

季铵化合物优选为单体或低聚物或它们的混合物。作为季铵化合物为低聚物的情况，可以列举例如季铵化合物为二聚物、三聚物或分子量约1000以下的低聚物等的情况等。作为季铵化合物为低聚物或单体与低聚物的混合物的情况下，可以列举例如季铵化合物中的烯基、链二烯基、链三烯基或环氧基在分子间相互键合而形成低聚物的情况等。

作为由式(I)表示的季铵化合物，优选为缩水甘油基三甲基铵、乙基缩水甘油基二甲基铵、二乙基缩水甘油基甲基铵、三乙基缩水甘油基铵，特别优选为缩水甘油基三甲基铵。

(阴离子)

本发明中使用的离子液体的阴离子只要是构成离子液体的路易斯酸的共轭碱则没有特别限定，优选BF₄^-、PF₆^-、(CF₃SO₂)₂N^-、卤化物离子、羧酸的共轭碱、磺酸的共轭碱或无机酸的共轭碱。其中，从熔点低的观点和耐热性高的观点出发，更优选BF₄^-、PF₆^-或(CF₃SO₂)₂N^-，特别优选(CF₃SO₂)₂N^-。

这些阴离子可以使用市售品，也可以通过公知方法或基于该公知方法的方法来制造。

(离子液体)

本发明中使用的离子液体只要是上述阳离子和阴离子的混合物则没有特别限定。作为离子液体，优选缩水甘油基三甲基铵双(三氟甲磺酰基)酰亚胺、乙基缩水甘油基二甲基铵双(三氟甲磺酰基)酰亚胺、二乙基缩水甘油基甲基铵双(三氟甲磺酰基)酰亚胺、三乙基缩水甘油基铵双(三氟甲磺酰基)酰亚胺，特别优选缩水甘油基三甲基铵双(三氟甲磺酰基)酰亚胺。

离子液体通过公知的方法制造，例如可以通过将阳离子与阴离子混合等的方法来制造。

作为离子液体的添加量，相对于组合物整体为1～50体积%即可，优选为5～35体积%，更优选为7.5～25体积%，特别优选为10～20体积%。

包埋剂

本发明中使用的包埋剂包含环氧类树脂、甲基丙烯酸树脂或不饱和聚酯树脂。本发明中使用的包埋剂可以使用进行聚合反应后的环氧类树脂、甲基丙烯酸树脂或不饱和聚酯树脂，也可以使用进行聚合反应前的环氧类树脂、甲基丙烯酸树脂或不饱和聚酯树脂。

从强度、包埋性能、可切薄性的观点出发，本发明中使用的包埋剂优选含有环氧类树脂。

环氧类树脂、甲基丙烯酸树脂或不饱和聚酯树脂的添加量相对于组合物整体为50～99体积%即可，优选为65～95体积%，更优选为75～92.5体积%，特别优选为80～90体积%。

(环氧类树脂)

环氧类树脂例如可以通过将单体、聚合引发剂、固化剂等混合来制备。

作为环氧类树脂中使用的单体，没有特别限定，可以使用脂肪族环氧单体、芳香族环氧单体中的任意一种。另外，各单体可以单独使用一种，也可以混合使用两种以上。

作为脂肪族类环氧单体，可以列举例如：3,4-环氧基环己基甲基羧酸酯、3,4-环氧基-6-甲基环己基甲基羧酸酯、二聚酸缩水甘油酯、六氢邻苯二甲酸缩水甘油酯、二缩水甘油醚、丁二醇二缩水甘油醚、六氢双酚A二缩水甘油醚、聚乙二醇二缩水甘油醚、聚丙二醇二缩水甘油醚、新戊二醇二缩水甘油醚、三羟甲基丙烷三缩水甘油醚、丙三醇三缩水甘油醚、季戊四醇三缩水甘油醚、三缩水甘油基异氰脲酸酯、四缩水甘油基-1,3-双氨基甲基己烷、二季戊四醇六缩水甘油醚等。

作为芳香族单体，可以列举例如：双酚A型、双酚F型、双酚AD型、双酚S型、酚醛清漆型、联苯基型、缩水甘油醚型、缩水甘油胺型的环氧单体等。

环氧类树脂中使用的单体可以使用市售品，也可以通过公知的方法制造。作为环氧类树脂中使用的单体的市售品，可以列举例如アラルダイトCY-212、Epon812、Epok812(以上为ABBA公司制造)等。

(甲基丙烯酸树脂)

甲基丙烯酸树脂例如可以通过将单体、聚合引发剂、固化剂等混合来制备。

作为甲基丙烯酸树脂中使用的单体，没有特别限定，优选混合使用甲基丙烯酸甲酯、甲基丙烯酸丁酯等甲基丙烯酸酯和苯乙烯单体。

(不饱和聚酯树脂)

聚酯树脂例如可以通过将单体、聚合引发剂、固化剂等混合来制备。

作为不饱和聚酯树脂中使用的单体，没有特别限定，优选混合使用リゴラック(商品名)和苯乙烯单体。

(固化剂)

本发明中使用的包含环氧树脂的包埋剂优选含有固化剂。作为固化剂，没有特别限定，可以列举：羧酸酐、胺类、含硫化合物、双氰胺、有机酰肼类等。固化剂可以单独使用一种，也可以混合使用两种以上。

作为羧酸酐，只要是含有2个以上羧基的羧酸的酐即可，优选含有2个羧基的羧酸的酐。羧酸酐可以为脂肪族羧酸酐、环状脂肪族羧酸酐、芳香族羧酸酐中的任意一种。

作为脂肪族羧酸酐，可以列举：乙酸酐、马来酸酐、丙酸酐、琥珀酸酐、乙酰基琥珀酸酐、3-十二碳烯基琥珀酸酐(DDSA)、己二酸酐、壬二酸酐、柠苹酸酐、丙二酸酐、戊二酸酐、柠檬酸酐、酒石酸酐、氧代戊二酸酐、庚二酸酐、癸二酸酐、衣康酸酐、辛二酸酐、二甘醇酸酐等。

作为环状脂肪族羧酸酐，可以列举例如：六氢邻苯二甲酸酐、环丁烷二甲酸酐、环戊烷二甲酸酐、降冰片烷二羧酸酐、六氢偏苯三酸酐、四氢邻苯二甲酸酐、甲基四氢邻苯二甲酸酐、四氢邻苯二甲酸酐、甲基内亚甲基四氢邻苯二甲酸酐、氯桥酸酐、甲基六氢纳迪克酸酐等。

作为芳香族羧酸酐，可以列举：邻苯二甲酸酐、偏苯三酸酐、均苯四酸酐、偏苯四酸酐、萘二甲酸酐等。

上述羧酸酐的任意一个氢原子或烃基可以被取代基取代。

作为胺类，可以列举：二亚乙基三胺、三亚乙基四胺、二乙基氨基丙胺、N-氨基乙基哌嗪、双(4-氨基-3-甲基环己基)甲烷、间苯二甲酰二胺、孟烷二胺、3,9-双(3-氨基丙基)-2,4,8,10-四氧杂螺[5.5]十一烷等。

作为含硫化合物，可以列举：多硫化物、多硫醇等。

作为双氰胺，可以列举例如油化シェルエポキシ公司制造的DICY-7等。

作为有机酰肼类，可以列举例如：己二酰肼、邻苯二甲酰肼、7,11-十八碳二烯-1,18-甲酰肼、双酚A醚二甲酰肼等。

固化剂的添加量优选相对于包含环氧类树脂的包埋剂为5～80phr(parts per hundred parts of resin，每百份树脂中的份数)。

(任选成分)

本发明中使用的包埋剂可以在不妨碍发明效果的范围内添加反应促进剂、聚合引发剂、着色颜料、填料、纤维、各种添加剂、溶剂、反应性稀释剂等。

(反应促进剂)

本发明中使用的包含环氧树脂的包埋剂优选含有例如三亚乙基二胺、苄基二甲胺(BDMA)、2-(二甲氨基甲基)苯酚(DMP-10)、2,4,6-三(二甲氨基甲基苯酚)(DMP-30)等叔胺类、三苯基膦等反应促进剂。

(聚合引发剂)

本发明中使用的包含甲基丙烯酸树脂或不饱和聚酯树脂的包埋剂优选含有聚合引发剂。作为聚合引发剂，没有特别限定，可以使用热聚合引发剂，也可以使用光聚合引发剂。

作为光聚合引发剂，可以列举例如：烷基苯基酮类、酰基氧化膦类、二茂钛类等自由基反应引发剂。

作为热聚合引发剂，可以列举例如：过氧化苯甲酰(BPO)、偶氮二异丁腈(AIBN)等自由基反应引发剂。

本发明中使用的包含环氧树脂的包埋剂优选含有聚合引发剂。作为聚合引发剂，没有特别限定，可以使用光聚合引发剂。

作为光聚合引发剂，可以列举阳离子型聚合引发剂，可以列举例如：包含重氮、锍盐、碘、氧等阳离子和PF₆^-、SbF₆^-、(C₆F₅)₄B^-、BF₄^-等阴离子的盐等。

聚合引发剂的添加量优选相对于包含环氧类树脂、甲基丙烯酸树脂或不饱和聚酯树脂的包埋剂为0.1～10phr(parts per hundred parts ofresin，每百份树脂中的份数)。

组合物的制备

本发明的电子显微镜用包埋树脂组合物通过将离子液体与包含环氧类树脂、甲基丙烯酸树脂或不饱和聚酯树脂的包埋剂混合而得到。

本说明书中，“电子显微镜用包埋树脂组合物”是指供于包埋的液状、糊状或浆料状的组合物。电子显微镜用包埋树脂组合物优选进行固化之前的组合物。

对于本发明的电子显微镜用包埋树脂组合物，优选将离子液体与包含环氧类树脂、甲基丙烯酸树脂或不饱和聚酯树脂的包埋剂混合，将试样包埋后进行聚合和固化。组合物的聚合例如可以通过照射光或者在40～80℃下加热24～96小时等进行。另外，组合物的固化例如可以通过在常温～100℃下加热24～96小时等进行。

组合物的性能

(防静电能力)

本发明的电子显微镜用包埋树脂组合物具有防静电能力。通过使本发明的电子显微镜用包埋树脂组合物具有防静电能力，能够防止试样表面的带电，能够对试样进行详细观察，因此，能够发挥足够的分辨率。

本发明的电子显微镜用包埋树脂组合物的防静电能力以组合物的表面电阻值计为1.0×10¹⁵Ω/□以下即可，优选为1.0×10¹⁴Ω/□以下，特别优选为7.5×10¹³Ω/□以下。通过使表面电阻值在上述范围内，能够有效地防止试样表面的带电，能够对各种非导电性试样进行详细观察。另外，能够发挥足够的分辨率。

关于防静电能力，优选利用扫描电子显微镜对试样进行拍摄，在图像中未观察到带电且未观察到图像不良或变形。

(作为包埋树脂组合物的性能)

本发明的电子显微镜用包埋树脂组合物满足可切薄性、包埋性能等作为包埋树脂组合物所要求的一般性能。

另外，包埋性能是指利用电子显微镜拍摄试样时能够得到充分的图像。另外，可切薄性是指对试样进行包埋时能够切薄至充分的薄度。

(用途)

本发明的电子显微镜用包埋树脂组合物可以在利用电子显微镜观察试样时的包埋处理中使用。

所包埋的试样只要能够在后述的包埋步骤中使用则没有特别限定，可以为生物试样、非生物试样中的任意一种。

(生物试样)

生物试样优选为动物或植物的细胞或组织。

作为植物，可以列举例如：原核生物、原生生物、菌类、藻类、陆生植物等。

作为原核生物，可以列举例如：大肠杆菌、乳酸菌、肺炎双球菌、亚硝酸菌、硝酸菌、硫细菌等细菌类；绿硫细菌、红硫细菌、颤藻、念珠藻等蓝藻类；等。

作为原生生物，可以列举例如：原生动物、单细胞藻类等。作为原生动物，可以列举例如：变形虫等根足虫类；草履虫等纤毛虫类；锥虫等鞭毛虫类：疟疾病原菌等胞子虫类等。作为单细胞藻类，可以列举例如：裸藻、囊裸藻等裸藻类；角藻、夜光藻等甲藻类；羽纹藻、舟形藻等硅藻类；等。

作为菌类，可以列举例如：粘菌类、真菌类等。作为粘菌类，可以列举例如：发网粘菌、团毛粘菌等变形菌类；盘基网柄菌、集胞粘菌等细胞性粘菌类；等。作为真菌类，可以列举例如：水霉、绵霉、腐霉等卵菌类；根霉、毛霉、捕虫霉等接合菌类；曲霉、青霉、链孢菌、盘菌、酵母菌等子囊菌类；松茸、香菇、木耳、金针菇等担子菌类；等。

作为藻类，可以列举例如：甘紫菜、石花菜、海萝、鸡冠菜、串珠藻等红藻类；海带、裙带菜、羊栖菜、海蕴、马尾藻、海团扇等褐藻类；团藻、衣藻、小球藻、石莼、伞藻等绿藻类；轮藻、丽藻等轮藻类；等。

作为陆生植物，可以列举例如：地钱、蛇苔、金发藓、泥炭藓等苔藓植物；松叶蕨、石松、问荆、木贼、蕨菜、紫萁等蕨类植物；苏铁、银杏、赤松、杉树、扁柏等裸子植物；水稻、棕榈、兰花等被子植物；等。

作为动物，可以列举例如：海绵动物、腔肠动物、扁形动物、袋形动物、环节动物、软体动物、节肢动物、毛颚动物、棘皮动物、脊索动物等。

作为海绵动物，可以列举例如：黑色软海绵、等格蜂海绵、偕老同穴海绵等。作为腔肠动物，可以列举例如：海葵、珊瑚、水螅等。作为扁形动物，可以列举例如：涡虫、绦虫、笄蛭等。作为袋形动物，可以列举：线虫、蛔虫、蛲虫、铁线虫等线形动物；臂尾轮虫、异尾轮虫、蛭态轮虫等轮形动物；等。

作为环节动物，可以列举例如：蚯蚓、正颤蚓、沙蚕、毛掸虫、水蛭等。作为软体动物，可以列举例如：文蛤、蚬等斧足类；角蝾螺、蜗牛等腹足类；章鱼、乌贼等头足类；等。作为节肢动物，可以列举例如：水蚤、虾、蟹等甲壳类；巨蜈蚣、蚰蜒等蜈蚣类；络新妇、蜱虫等蜘蛛类；蝗虫、独角仙等昆虫类；等。作为毛颚动物，可以列举例如：六鳍箭虫等。作为棘皮动物，可以列举例如：海百合、海羊齿、海参、海胆、海星等。

作为脊索动物，可以列举例如：海鞘、海樽、文昌鱼等原索动物；七鳃鳗等无颌类；鲨鱼、鳐鱼等软骨鱼类；鲤鱼、秋刀鱼等硬骨鱼类；青蛙、蝾螈等两栖类；蜥蜴、龟、蛇等爬虫类；鸽子、燕子、雉、麻雀、鸡等鸟类；人、猴子、狮子、鲸鱼、大鼠、牛、马、羊等哺乳类；等。

作为生物试样，可以列举例如动物或植物的细胞或组织。

作为动物的细胞或组织，可以列举例如：皮肤的表皮、毛发、指甲、消化管内壁、毛细血管、唾液腺等上皮组织；皮肤的真皮、腱、血液、软骨、骨、脂肪等结缔组织；横纹肌、平滑肌、心肌等肌肉组织；神经元等神经组织；等或其细胞。

另外，作为动物的细胞或组织，可以列举例如：口腔、唾液腺、食道、胃、胰腺、胆囊、肝脏、十二指肠、小肠、大肠、阑尾、直肠等消化系统器官；心脏、主动脉、下腔静脉、肱动脉、肱静脉、颈动脉、颈静脉、锁骨下动脉、锁骨下静脉等循环系统器官；气管、支气管、肺等呼吸系统器官；肾脏、输尿管、膀胱等排泄系统器官；脑、脊髓、末梢神经等神经系统器官；颅骨、脊柱、骨盆、股骨、肩胛骨等骨骼系统器官；胸肌、肱二头肌、额肌等肌肉系统器官；生殖腺、输卵管、输精管、子宫、胎盘等生殖系统器官；脑垂体、甲状腺、甲状旁腺、肾上腺、胰脏、生殖腺等内分泌系统器官；眼、耳、鼻、舌、皮肤等感觉系统器官；等器官的细胞或组织。

作为植物的细胞或组织，可以列举例如：皮肤组织、机械组织、吸收组织、同化组织、输导组织、储藏组织、通气组织、分泌组织等或其细胞。

另外，作为植物的细胞或组织，可以列举例如：根、茎、叶、种子、花等器官的细胞或组织。

(非生物试样)

非生物试样可以为有机物，也可以为无机物。非生物试样可以为存在于自然界的试样，也可以为人工合成的试样。作为非生物试样，可以列举例如：树脂、橡胶、合成树脂、颜料、涂料、化妆品、药品、陶瓷、磁体、磁性材料、半导体、金属、金属氧化物、矿物、有机盐或无机盐等。

所包埋的试样可以直接使用采集的试样，也可以进行脱水处理后使用。另外，所包埋的试样可以为含水试样。

试样的大小没有特别限定，可以为粉体。作为粉体，可以列举例如：小麦粉、咖啡、盐、白糖、淀粉、香辛料、调味料等食品；颗粒、化妆品、粉药等药品；氧化铝、氧化铁、氧化锡等金属氧化物；金属、饲料、洗剂、化妆品、颜料、粉体涂料、碳调色剂、磁体、磁性材料、水泥、玻璃、研磨剂、砂、半导体、陶瓷、矿物、烧结体、火药等。

利用电子显微镜观察试样的观察方法

(包埋步骤)

本发明的利用电子显微镜观察试样的观察方法包括使用上述电子显微镜用包埋树脂组合物对试样进行包埋的包埋步骤。

包埋步骤除使用上述组合物以外，可以通过公知方法或基于该公知方法的方法来进行。作为包埋步骤，可以列举例如将观察试样埋入到本发明的电子显微镜用包埋树脂组合物中等的步骤。上述步骤中，可以使用例如生物试样、非生物试样、粉体试样等非导电性试样作为观察试样。在含水试样的情况下，可以在使用例如浓度升高的乙醇或丙酮系列等脱水后进行包埋。在例如非生物试样、粉体试样等不含水的试样的情况下，可以直接包埋到树脂中或者通过混合而包埋到树脂中。另外，在使用生物试样的情况下，可以预先将试样用戊二醛等固定后将观察部分切下等。

本发明的利用电子显微镜观察试样的观察方法中，上述电子显微镜用包埋树脂组合物具有防静电能力，由此，能够对试样的表面结构进行充分观察，另外，上述电子显微镜用包埋树脂组合物具有作为包埋树脂组合物的充分的性能，因此，能够在各种试样的包埋中使用。

(无染色试样)

本发明的利用电子显微镜观察试样的观察方法可以使用无染色试样进行观察。通过不对试样进行染色，能够得到反映试样自身的元素组成的对比度。

(染色步骤)

本发明的利用电子显微镜观察试样的观察方法可以包括对试样进行染色的染色步骤。通过包括染色步骤，能够对表面结构或内部结构进行仔细观察。染色步骤可以对生物试样、非生物试样中的任意一种进行。

染色可以通过公知的方法进行，可以使用例如如下方法：1)整块(enbloc)染色法：在锇酸单染后或者在单宁酸-锇酸染色(TaO法)、亚铁氰化钾-锇酸-硫代卡巴肼-锇酸复染(OTO法)后，进行乙酸双氧铀染色、铅染色(Walton法)、磷钨酸染色、高锰酸钾染色等追加染色；2)利用乙酸双氧铀溶液从制作观察面后的试样表面开始直接染色；等。

上述染色步骤可以在包埋步骤前进行，也可以在包埋步骤后进行，优选在染色步骤后进行包埋步骤。这是因为，通过预先对试样进行染色，能够进行充分的染色而不依赖于所使用的树脂。

(观察面制作步骤)

本发明的利用电子显微镜观察试样的观察方法优选还包括将试样切薄或者使表面露出的技艺。切薄步骤可以使用超薄切片机、研磨装置等公知装置进行。切薄步骤中，优选将试样切薄至50nm～100nm。表面露出利用使用金刚石刀的超薄切片机进行或者利用聚焦离子束装置(FIB)、离子研磨装置、精密机械研磨装置进行，可以利用扫描电子显微镜对所得到的表面进行观察。

作为本发明的观察方法中使用的电子显微镜，没有特别限定，可以为透射电子显微镜(TEM)、扫描电子显微镜(SEM)、扫描透射电子显微镜(STEM)中的任意一种，从表面观察的观点出发，优选SEM和内置有FIB装置的SEM。

实施例

以下，举例说明本申请发明，但本申请发明不限于此。

生物试样的观察中，包埋试样表面观察使用扫描电子显微镜(日立公司制造的“S-800”)。另外，非生物试样的观察中，包埋试样表面观察使用内置有FIB装置的SEM(日本FEI公司制造的“QuantaFEG(FEI)”)。

切薄使用切片机(ライヘルト公司(现在的ライカ公司)制造的“UltracutE”)。

关于所使用的试剂，除特别说明之外，使用市售品。

(评价方法)

关于聚合性，将组合物发生了聚合的情况作为良好。

关于可切薄性，在使用组合物对试样进行包埋的情况下，将能够将试样切薄至50nm的情况作为良好。

关于包埋性能，利用SEM(扫描电子显微镜)对试样进行拍摄，将得到不逊色于使用不含离子液体的组合物作为包埋剂时的图像的情况作为良好。

生物试样的观察中，关于防静电能力，将表面电阻为1.0×10¹⁵以下的情况作为良好。另外，非生物试样的观察中，关于防静电能力，利用扫描电子显微镜对试样进行拍摄，将在图像中未观察到带电且未观察到图像不良或变形的情况作为良好。

生物试样的观察(实施例1～3、比较例1)

(实施例1)

(环氧类树脂的制备)

根据Luft的配方(6:4)，制备环氧类树脂。使用TABB公司制造的EPON812树脂试剂盒。将4.7ml的作为环氧单体的Shell Chemical公司制造的EPON812、2.8ml的作为固化剂的甲基纳迪克酸酐(MNA)和2.5ml的十二碳烯基琥珀酸酐(DDSA)混合。向其中加入0.15ml的作为聚合促进剂的2,4,6-三(二甲氨基甲基)苯酚(DMP-30)，得到糊状的环氧类树脂。

(电子显微镜用包埋树脂组合物的制备)

将上述环氧类树脂4.00ml、作为离子液体的N-缩水甘油基三甲基铵双(三氟甲磺酰基)酰亚胺(日本カーリット公司制造，以下也称为“GTA-TFSI”)1.00ml混合，得到糊状的电子显微镜用包埋树脂组合物。

(包埋处理)

使用大鼠的肝组织作为观察试样。利用2%戊二醛+2.5%甲醛溶液固定后，将切下的肝脏组织试样用2%锇酸、1%亚铁氰化钾溶液进行后固定，然后，利用1%乙酸双氧铀水溶液进行整块(en bloc)染色。

然后，将观察试样与包埋树脂组合物混合，浇注到模具中。对其进行加热，在63～65℃下加热48小时，进行包埋树脂组合物的聚合和固化。将固化后的包埋树脂组合物利用金刚石刀和超薄切片机切薄、切削，制作形成有平滑面的SEM观察用包埋树脂组合物。将该组合物利用银糊固定到SEM试样台上，不对表面进行导电涂布等处理，利用SEM对组合物的平滑面进行观察。

(实施例2)

除了将环氧类树脂的添加量设定为4.50ml并将GTA-TFSI的添加量设定为0.50ml以外，与实施例1同样地进行实验。

(实施例3)

除了将环氧类树脂的添加量设定为4.75ml并将GTA-TFSI的添加量设定为0.25ml以外，与实施例1同样地进行实验。

(比较例1)

除了将环氧类树脂的添加量设定为5.00ml并将GTA-TFSI的添加量设定为0ml以外，与实施例1同样地进行实验。

将实施例1～3和比较例1的结果示于表1。

表1

(评价)

可知，实施例1～3的包埋树脂组合物保持了可切薄性、包埋性能等包埋树脂组合物的基本性能并且具有充分的防静电能力。

将实施例1的SEM观察时的二次电子图像示于图1。由图1可知，试样表面未观察到带电，能够对试样的表面的形状进行充分观察。

另外，将比较例1的SEM观察时的二次电子图像示于图2。由图2可知，试样表面带电，不能对表面状态进行充分观察。

非生物试样的观察(实施例4、5、比较例2、3)

(实施例4)

(电子显微镜用包埋树脂组合物的制备)

将3.75ml实施例1中制备的环氧类树脂、1.25ml作为离子液体的GTA-TFSI混合，得到糊状的电子显微镜用包埋树脂组合物。

(包埋处理)

使用彩色复印机的废调色剂作为观察试样。将观察试样5重量份、包埋树脂组合物95重量份混合，浇注到模具中。对其进行加热，在63～65℃下加热48小时，进行包埋树脂组合物的聚合和固化。

将固化后的包埋树脂组合物利用金刚石刀和超薄切片机切薄、切削，制作形成有平滑面的SEM观察用包埋树脂组合物。将该组合物利用银糊固定到SEM试样台上，不对表面进行导电涂布等处理，利用SEM对组合物的平滑面进行观察。将所得到的二次电子图像示于图3，将反射电子图像示于图4。

(比较例2)

除了使用仅包含环氧类树脂5.00ml而不含离子液体的树脂组合物以外，与实施例4同样地进行实验。将所得到的二次电子图像示于图5，将反射电子图像示于图5。

(实施例5)

使用塑料类便签纸(带胶糊)作为观察试样。将实施例1中制备的糊状的包埋树脂组合物浇注到模具中，埋入观察试样。在63～65℃下加热48小时，使包埋树脂组合物进行聚合和固化。将固化后的树脂组合物的表面利用切片机切薄、切削，制作形成有平滑面的SEM观察用包埋树脂组合物。将该组合物利用银糊固定到SEM试样台上，不对表面进行导电涂布等处理，利用SEM对组合物的平滑面进行观察。将所得到的二次电子图像示于图7，将反射电子图像示于图8。另外，将塑料类便签纸的胶糊部分的反射电子图像示于图9。

(比较例3)

除了使用仅包含环氧类树脂5.00ml而不含离子液体的树脂组合物以外，与实施例5同样地进行实验。将所得到的二次电子图像示于图10，将反射电子图像示于图11。

将实施例4、5和比较例2、3的结果示于表2。

表2

(评价)

由表2可知，实施例4和5的包埋树脂组合物保持了可切薄性、包埋性能等包埋树脂组合物的基本性能并且具有充分的防静电能力。

由实施例4的二次电子图像(参考图3)可知，在使用环氧类树脂与离子液体的混合物作为包埋树脂组合物的情况下，试样表面未观察到带电，能够对废调色剂的形状进行充分观察。另一方面，由比较例2的二次电子图像(参考图4)可知，在使用仅包含环氧类树脂而不含离子液体的组合物作为包埋树脂组合物的情况下，由于图像不良、变形而不能对废调色剂的形状进行充分观察。

实施例4的反射电子图像(参考图4)中，能够清楚地观察调色剂的组成对比度。另一方面，比较例2的反射电子图像(参考图6)中，由于严重的带电而未能得到有意义的图像，不能观察调色剂的组成对比度。

由实施例5的二次电子图像(图7参考)可知，在使用环氧类树脂与离子液体的混合物作为包埋树脂组合物的情况下，试样表面未观察到带电，能够对塑料类便签纸的形状进行充分观察。另一方面，由比较例3的二次电子图像(参考图10)可知，在使用仅包含环氧类树脂而不含离子液体的组合物作为包埋树脂组合物的情况下，由于图像不良、变形而不能对塑料类便签纸的形状进行充分观察。

实施例5的反射电子图像(参考图8)中，在使用环氧类树脂与离子液体的混合物作为包埋树脂组合物的情况下，试样表面未观察到大的带电，能够对试样的组成对比度进行观察。另外，也能够清楚地观察到试样的胶糊部分(参考图9)。另一方面，比较例3的反射电子图像(参考图11)中，可知，由于严重的带电而观察到强噪音，不能对试样进行充分观察。

(实施例6)

使用实施例4的彩色复印机的废调色剂包埋试样作为观察试样。将试样表面利用FIB以每次100nm进行连续切削。通过与实施例4同样的方法对由切削得到的新鲜的平滑面进行SEM观察。将该切削、观察的循环重复377次，得到包埋试样的连续切削图像。(观察区域：42μm×42μm×38μm，体素尺寸：41.6nm×41.6nm×100nm)。将所得到的图像利用Avizo6.3软件(VSG公司，波尔多，法国)进行处理，进行三维重构，得到废调色剂粒子的立体图像。将所得到的图像示于图12。

(评价)

由实施例6的三维构建图像(参考图12)可知，通过使用环氧类树脂与离子液体的混合物作为包埋树脂组合物，能够在不受带电影响的情况下对废调色剂的三维结构进行详细观察。

产业上的可利用性

本发明的电子显微镜用包埋树脂组合物含有离子液体和包含环氧类树脂、甲基丙烯酸树脂或不饱和聚酯树脂的包埋剂，具有防静电能力，因此在产业上有用。