用于DNA琼脂糖凝胶电泳的上样缓冲液及其制备方法

摘要

本发明涉及一种用于DNA琼脂糖凝胶电泳的上样缓冲液及其制备方法，包括作为容剂的水与作为溶质的以下各组分配制而成，各溶质组分在上样缓冲液中的浓度为：35-37%V/V丙三醇、28-32mM乙二胺四乙酸二钠、3-5%W/V十二烷基硫酸钠、0.005-0.01%W/V溴酚蓝、0.01-0.05%W/V二甲苯青FF、0.05-0.18%W/V二甲酚橙和0.1-0.25%W/V柠檬黄；该上样缓冲液是一种经过改良的五色六倍浓缩的上样缓冲液，对DNA片段的观察无干扰，在可见光条件下可对整个电泳进程进行观测，防止小片段DNA在电泳中丢失。

说明书

技术领域

本发明涉及一种上样缓冲液，特别是一种用于DNA分析的琼脂糖凝胶电泳 的上样缓冲液及其制备方法。

背景技术

琼脂糖凝胶电泳作为一种重要的分子生物学技术，已被广泛应用于不同生 物分子（DNA、RNA等）的分离。DNA片段的分析等试验大多都基于电泳技 术。在DNA片段分离过程中，需要将样本与上样缓冲液按一定比例混合，继 而将混合样本置于琼脂糖凝胶的点样孔内，最终通过电泳使不同片段长度的 DNA分子分离以实现对特定DNA片段的分离和检测。在这一分离过程中，上 样缓冲液的作用主要具有：使样本呈色，加样操作更加方便；在可见光下可观 察到指示带，便于观测电泳的进程。

常规配方以溴酚蓝和二甲苯青FF作为指示剂的用于DNA琼脂糖凝胶电泳 的上样缓冲液中，由于溴酚蓝的电泳位置与200-500bp的DNA电泳条带位置相 近，在EB染色观察这一范围DNA片段时，溴酚蓝对这些DNA片段的观察有 很强的的干扰，特别是当这些小片段的量比较少时，溴酚蓝甚至会把小片段 DNA的信号全部遮盖掉。

为了避免这一情况的发生，因此需要一种改良的上样缓冲液，能够完全消 除染料对小片段DNA观察时的干扰，同时能够便于观察电泳进程，防止小片 段DNA片段的丢失。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的是提供一种用于DNA琼脂糖凝胶电泳的上样缓冲液 及其制备方法，可以完全消除染料对小片段DNA观察时的干扰。此外，本发明 所提供的上样缓冲液条带较常规上样缓冲液具有更多的指示剂条带，其中柠檬 黄在电泳中条带始终位于电泳最前端，更有利于观察电泳进程，防止小片段DNA 片段的丢失。

本发明的用于DNA琼脂糖凝胶电泳的上样缓冲液，包括作为容剂的去离 子水与作为溶质的以下各组分配制而成，各溶质组分在上样缓冲液中的浓度为：

35-37%V/V丙三醇、28-32mM乙二胺四乙酸二钠、3-5%W/V十二烷基硫酸钠、 0.01-0.05%W/V溴酚蓝、0.01-0.05%W/V二甲苯青FF、0.05-0.18%W/V二甲酚橙 和0.1-0.25%W/V柠檬黄；

进一步，各溶质组分在上样缓冲液中的浓度为：

36%V/V丙三醇、30mM乙二胺四乙酸二钠、4%W/V十二烷基硫酸钠、0.035%W/V 溴酚蓝、0.02%W/V二甲苯青FF、0.05-0.18%W/V二甲酚橙和0.1-0.25%W/V柠檬 黄。

进一步，各溶质组分在上样缓冲液中的浓度为：

36%V/V丙三醇、30mM乙二胺四乙酸二钠、4%W/V十二烷基硫酸钠、0.035%W/V 溴酚蓝、0.02%W/V二甲苯青FF、0.12%W/V二甲酚橙和0.15%W/V柠檬黄。

进一步，所述上样缓冲液的pH值为7-8.5；

进一步，用盐酸或氢氧化钠调整溶液的pH值。

本发明还公开一种用于DNA琼脂糖凝胶电泳的上样缓冲液的制备方法，包 括以下步骤：

按设定浓度将二甲酚橙、柠檬黄、溴酚蓝、二甲苯青FF、丙三醇、乙二胺 四乙酸二钠、十二烷基硫酸钠充分解溶于适量溶剂中后加入丙三醇混合均匀， 最后调整溶液的pH值，即制得用于DNA琼脂糖凝胶电泳的上样缓冲液。

本发明的有益效果是：本发明的用于DNA琼脂糖凝胶电泳的上样缓冲液，本 发明所提供的上样缓冲液，pH为7-8.5，溶剂是水，溶质包括四种指示剂（二 甲酚橙、柠檬黄、溴酚蓝、二甲苯青FF）、丙三醇、乙二胺四乙酸二钠和十二 烷基硫酸钠；通过添加二甲酚橙和柠檬黄两种指示剂，并重新调整溴酚蓝的比 例，配制一种经过改良的五色六倍浓缩的用于DNA琼脂糖凝胶电泳的上样缓冲 液，这一缓冲液可完全消除染料对小片段DNA观察时的干扰。此外，本发明所 提供的上样缓冲液条带较常规上样缓冲液具有更多的指示剂条带，其中柠檬黄 在电泳中条带始终位于电泳最前端，更有利于观察电泳进程，防止小片段DNA 片段的丢失。

附图说明

下面结合附图和实施例对本发明作进一步描述。

图1为本发明的实施例1效果示意图；

图2为本发明的实施例2效果示意图；

图3为本发明的实施例3效果示意图。

具体实施方式

本实施例的用于DNA琼脂糖凝胶电泳的上样缓冲液，包括作为容剂的去 离子水与作为溶质的以下各组分配制而成，各溶质组分在上样缓冲液中的浓度 为：

35-37%V/V丙三醇、28-32mM乙二胺四乙酸二钠、3-5%W/V十二烷基硫酸钠、 0.01-0.05%W/V溴酚蓝、0.01-0.05%W/V二甲苯青FF、0.05-0.18%W/V二甲酚橙 和0.1-0.25%W/V柠檬黄。

本实施例中，各溶质组分在上样缓冲液中的浓度为：

36%V/V丙三醇、30mM乙二胺四乙酸二钠、4%W/V十二烷基硫酸钠、0.035%W/V 溴酚蓝、0.02%W/V二甲苯青FF、0.05-0.18%W/V二甲酚橙和0.1-0.25%W/V柠檬 黄；为优选浓度配比。

本实施例中，各溶质组分在上样缓冲液中的浓度为：

36%V/V丙三醇、30mM乙二胺四乙酸二钠、4%W/V十二烷基硫酸钠、0.035%W/V 溴酚蓝、0.02%W/V二甲苯青FF、0.12%W/V二甲酚橙和0.15%W/V柠檬黄；为最 佳浓度配比。

本实施例中，所述上样缓冲液的pH值为7-8.5。

本实施例中，用盐酸或氢氧化钠调整溶液的pH值。

本实施例还公开一种用于DNA琼脂糖凝胶电泳的上样缓冲液的制备方法， 包括以下步骤：

按设定浓度将二甲酚橙、柠檬黄、溴酚蓝、二甲苯青FF、丙三醇、乙二胺 四乙酸二钠、十二烷基硫酸钠充分解溶于适量去离子水中后加入丙三醇混合均 匀，最后调整溶液的pH值，即制得用于DNA琼脂糖凝胶电泳的上样缓冲液。

下面通过具体实施例对本发明做进一步的阐述。

实施例1：

按二甲酚橙0.05%（W/V），柠檬黄0.15%（W/V），溴酚蓝0.035%（W/V），二 甲苯青FF0.02%（W/V），丙三醇36%（V/V），乙二胺四乙酸二钠30mM，十二烷 基硫酸钠4%（W/V）的比例量取各溶质溶于适量去离子水中，充分溶解后加入 36毫升丙三醇后混匀，再使用去离子水定容至100毫升，最后加入盐酸或氢氧 化钠调整溶液的pH值为7-8.5，即制备出本发明的用于DNA琼脂糖凝胶电泳的 上样缓冲液。

在PCR产物中添加六分之一体积的本发明的上样缓冲液，将混合所得溶液 直接用于琼脂糖凝胶电泳（凝胶浓度为1%，电泳缓冲液为1X TAE缓冲液），在 5V/cm的电场强度下进行30分钟电泳，在可见光下各指示剂条带明晰，稳定性 和重复性较好，如图1所示。

实施例2：

按二甲酚橙0.12%（W/V），柠檬黄0.15%（W/V），溴酚蓝0.035%（W/V），二 甲苯青FF0.02%（W/V），丙三醇36%（V/V），乙二胺四乙酸二钠30mM，十二烷 基硫酸钠4%（W/V）的比例量取各溶质溶于适量去离子水中，充分溶解后加入 36毫升丙三醇后混匀，再使用去离子水定容至100毫升，最后加入盐酸或氢氧 化钠调整溶液的pH值为7-8.5，即制备出本发明的用于DNA琼脂糖凝胶电泳的 上样缓冲液。

在PCR产物中添加六分之一体积的本发明的上样缓冲液，将混合所得溶液 直接用于琼脂糖凝胶电泳（凝胶浓度为1%，电泳缓冲液为1X TAE缓冲液），在 5V/cm的电场强度下进行30分钟电泳，在可见光下各指示剂条带明晰，稳定性 和重复性较好，如图2所示。

实施例3：

按二甲酚橙0.18%（W/V），柠檬黄0.15%（W/V），溴酚蓝0.035%（W/V），二 甲苯青FF0.02%（W/V），丙三醇36%（V/V），乙二胺四乙酸二钠30mM，十二烷 基硫酸钠4%（W/V）的比例量取各溶质溶于适量去离子水中，充分溶解后加入 36毫升丙三醇后混匀，再使用去离子水定容至100毫升，最后加入盐酸或氢氧 化钠调整溶液的pH值为7-8.5，即制备出本发明的用于DNA琼脂糖凝胶电泳的 上样缓冲液。

在PCR产物中添加六分之一体积的本发明的上样缓冲液，将混合所得溶液 直接用于琼脂糖凝胶电泳（凝胶浓度为1%，电泳缓冲液为1X TAE缓冲液），在 5V/cm的电场强度下进行30分钟电泳，在可见光下各指示剂条带明晰，稳定性 和重复性较好，如图3所示。

实施例4

用于DNA琼脂糖凝胶电泳的上样缓冲液，包括作为容剂的水与作为溶质的 以下各组分配制而成，各溶质组分在上样缓冲液中的浓度为：

35%V/V丙三醇、28mM乙二胺四乙酸二钠、3%W/V十二烷基硫酸钠、0.01%W/V 溴酚蓝、0.01%W/V二甲苯青FF、0.05%W/V二甲酚橙和0.1%W/V柠檬黄。

其制备方法为按设定浓度将二甲酚橙、柠檬黄、溴酚蓝、二甲苯青FF、丙 三醇、乙二胺四乙酸二钠、十二烷基硫酸钠充分解溶于适量去离子水中后加入 丙三醇混合均匀，最后加入盐酸或氢氧化钠调整溶液的pH值为7，即制得用于 DNA琼脂糖凝胶电泳的上样缓冲液。

实施例5

各溶质组分在上样缓冲液中的浓度为：

37%V/V丙三醇、32mM乙二胺四乙酸二钠、5%W/V十二烷基硫酸钠、0.05%W/V 溴酚蓝、0.05%W/V二甲苯青FF、0.18%W/V二甲酚橙和0.25%W/V柠檬黄。

其制备方法为按设定浓度将二甲酚橙、柠檬黄、溴酚蓝、二甲苯青FF、丙 三醇、乙二胺四乙酸二钠、十二烷基硫酸钠充分解溶于适量去离子水中后加入 丙三醇混合均匀，最后加入盐酸或氢氧化钠调整溶液的pH值为8.5，即制得用 于DNA琼脂糖凝胶电泳的上样缓冲液。

实施例6

本发明的用于DNA琼脂糖凝胶电泳的上样缓冲液，包括作为容剂的水与作 为溶质的以下各组分配制而成，各溶质组分在上样缓冲液中的浓度为：

36%V/V丙三醇、32mM乙二胺四乙酸二钠、3%W/V十二烷基硫酸钠、0.01%W/V 溴酚蓝、0.01%W/V二甲苯青FF、0.18%W/V二甲酚橙和0.1%W/V柠檬黄。

其制备方法为按设定浓度将二甲酚橙、柠檬黄、溴酚蓝、二甲苯青FF、丙 三醇、乙二胺四乙酸二钠、十二烷基硫酸钠充分解溶于适量去离子水中后加入 丙三醇混合均匀，最后加入盐酸或氢氧化钠调整溶液的pH值为8，即制得用于 DNA琼脂糖凝胶电泳的上样缓冲液。

实施例4、5、6制得的用于DNA琼脂糖凝胶电泳的上样缓冲液的性质与前 述实施例的上样缓冲液性质相似，此处不再赘述。

最后说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管 参照较佳实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解， 可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的 宗旨和范围，其均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。