一种羧酰胺化合物L-苹果酸盐的结晶多晶型物

摘要

本发明涉及式I所示化合物(Z)-N-[2-(二乙胺基)乙基]-2-甲基-7-(1,2-二氢-5-氟-2-氧代-3H-吲哚-3-亚基)-4,5,6,7-四氢-1H-吲哚-3-羧酰胺L-苹果酸盐的两种晶型、其制备方法及其用于治疗过度增殖性疾病或恶性肿瘤的药物中的用途。本发明还涉及包含所述晶型作为活性成分的药用组合物。

说明书

技术领域

本发明属于药物领域，具体地，本发明涉及药学活性化合物(Z)-N-[2-(二乙胺 基)乙基]-2-甲基-7-(1,2-二氢-5-氟-2-氧代-3H-吲哚-3-亚基)-4,5,6,7-四氢-1H-吲哚 -3-羧酰胺L-苹果酸盐的结晶多晶型物、其制备方法及其用于治疗过度增殖性疾 病或恶性肿瘤的药物中的用途。本发明还涉及包含所述晶型作为活性成分的药用 组合物。

背景技术

本发明涉及的药学活性化合物(Z)-N-[2-(二乙胺基)乙基]-2-甲基-7-(1,2-二氢 -5-氟-2-氧代-3H-吲哚-3-亚基)-4,5,6,7-四氢-1H-吲哚-3-羧酰胺，参见：唐锋，等， WO2008/067756，（2008），对多种酪氨酸激酶具有显著的抑制活性，并且可以抑 制多种人癌细胞株的增殖，可用于抗肿瘤药物的制备。

在有机化合物中，许多物质常具有相同的化学组成，在不同的热力学条件 （温度、压力、pH等）下却能形成不同的晶体结构，我们把这一现象称做同质 多晶现象。这些不同的晶型被称做“多晶型物”。物质不同的多晶型物具有不同的 晶格能，由此其在固态时展示出了不同的化学和物理特性，包括化学稳定性、表 观溶解度、溶解速度、熔点等等，这些性质可以直接影响原料药和制剂的处理和 生产，并且会影响原料药和制剂的稳定性、溶解度和生物利用度。对于本发明而 言，本领域存在着这样的需求：获得适于应用的理化性能优异的多晶型。

发明内容

本发明提供了式I所示(Z)-N-[2-(二乙胺基)乙基]-2-甲基-7-(1,2-二氢-5-氟-2- 氧代-3H-吲哚-3-亚基)-4,5,6,7-四氢-1H-吲哚-3-羧酰胺L-苹果酸盐的结晶多晶型 物。

本发明所述的(Z)-N-[2-(二乙胺基)乙基]-2-甲基-7-(1,2-二氢-5-氟-2-氧代-3H- 吲哚-3-亚基)-4,5,6,7-四氢-1H-吲哚-3-羧酰胺L-苹果酸盐结晶多晶型物，使用 辐射，在X-射线粉末衍射光谱图中的特征峰的2θ值为：3.04、 6.18、9.34、17.60和26.32，2θ衍射角的误差为0.2。优选地，其具有基本如图1 所示的X-射线粉末衍射光谱图。该结晶多晶形物命名为A型。

本发明所述的(Z)-N-[2-(二乙胺基)乙基]-2-甲基-7-(1,2-二氢-5-氟-2-氧代-3H- 吲哚-3-亚基)-4,5,6,7-四氢-1H-吲哚-3-羧酰胺L-苹果酸盐结晶多晶型物使用 辐射，在X-射线粉末衍射光谱图中的特征峰的2θ值为：11.62、 12.58、22.40、23.50、24.12和25.64，2θ衍射角的误差为0.2。优选地，其具有 基本如图2所示的X-射线粉末衍射光谱图。该结晶多晶型物命名为B型。

本发明所述的(Z)-N-[2-(二乙胺基)乙基]-2-甲基-7-(1,2-二氢-5-氟-2-氧代-3H- 吲哚-3-亚基)-4,5,6,7-四氢-1H-吲哚-3-羧酰胺L-苹果酸盐B型多晶型物红外吸收 图谱在808cm^-1、1190cm^-1、1368cm^-1、1473cm^-1、1516cm^-1、1592cm^-1、1625 cm^-1、1655cm^-1、2488cm^-1、2629cm^-1、2883cm^-1、2946cm^-1、2980cm^-1、3079 cm^-1、3268cm^-1、3320cm^-1处有吸收峰。优选地，其红外吸收图谱基本如图3 所示。

本发明所述的(Z)-N-[2-(二乙胺基)乙基]-2-甲基-7-(1,2-二氢-5-氟-2-氧代-3H- 吲哚-3-亚基)-4,5,6,7-四氢-1H-吲哚-3-羧酰胺L-苹果酸盐B型多晶型物DSC吸热 转变在170±2℃。优选地B型多晶型物DSC吸热转变在170±1℃。

本发明还提供了式I所示的结晶多晶型物（A型、B型）的制备方法。

制备A型结晶多晶型物的方法：(Z)-N-[2-(二乙胺基)乙基]-2-甲基-7-(1,2-二 氢-5-氟-2-氧代-3H-吲哚-3-亚基)-4,5,6,7-四氢-1H-吲哚-3-羧酰胺加至甲醇中，加 热至回流，逐步加入L-苹果酸的甲醇溶液，冷却至室温，继续搅拌析晶4-12h。

所述冷却至室温，优选地为自然冷却至室温。优选地，搅拌析晶4-12h后，经过 过滤，滤饼洗涤，20-60℃减压干燥，制得(Z)-N-[2-(二乙胺基)乙基]-2-甲基-7-(1,2- 二氢-5-氟-2-氧代-3H-吲哚-3-亚基)-4,5,6,7-四氢-1H-吲哚-3-羧酰胺L-苹果酸盐A 型结晶多晶型物。

制备B型结晶多晶型物的方法：(Z)-N-[2-(二乙胺基)乙基]-2-甲基-7-(1,2-二 氢-5-氟-2-氧代-3H-吲哚-3-亚基)-4,5,6,7-四氢-1H-吲哚-3-羧酰胺、L-苹果酸加入 无水甲醇、乙酸乙酯的混合溶剂中，加热、回流、过滤、滤液冷却至室温，继续 搅拌析晶4-24h。所述滤液冷却至室温，优选地为自然冷却至室温。优选地，搅 拌析晶4-24h后，经过过滤，滤饼洗涤，20-60℃减压干燥，制得(Z)-N-[2-(二乙 胺基)乙基]-2-甲基-7-(1,2-二氢-5-氟-2-氧代-3H-吲哚-3-亚基)-4,5,6,7-四氢-1H-吲 哚-3-羧酰胺L-苹果酸盐B型结晶多晶型物。

本发明涉及结晶多晶型物A型、B型和其混合物及其在制备治疗过度增殖 性疾病或恶性肿瘤的药物中的用途，并且涉及包括这些晶型的药物组合物。

在WO2008/067756中描述了(Z)-N-[2-(二乙胺基)乙基]-2-甲基-7-(1,2-二氢-5- 氟-2-氧代-3H-吲哚-3-亚基)-4,5,6,7-四氢-1H-吲哚-3-羧酰胺对蛋白激酶活性具有 调节作用，可以抑制多种酪氨酸激酶的活性，通过引用将该公开的内容结合到本 文中。

本发明涉及结晶多晶型物A型和B型及其混合物，还涉及包括这些晶型的 药物组合物。

在此所使用的术语“药用组合物”指的是治疗有效量式I化合物的结晶多晶型 物（选自A型、B型或A型和B型的混合物）与其它的化学成分，例如药学上 可接受的载体和赋形剂的混合物。药用组合物的是促进化合物对生物体的给药。

“药学上可接受的载体”指的是对有机体不引起明显的刺激性和不干扰所给 予化合物的生物活性和性质的载体或稀释剂。

“赋形剂”指的是加入到药用组合物中以进一步便利于给予化合物的惰性物 质。赋形剂的实例包括（不局限于）碳酸钙、磷酸钙、多种糖类和多种类型的淀 粉、纤维素衍生物、明胶、植物油和聚乙二醇。

治疗有效量，可以是在某种程度上缓解对象中的疾病或病症的一种或多种症 状、使与疾病或病症相关或是其病因的一种或多种生理或生物化学参数部分或完 全恢复正常、和/或降低疾病或病症的发作可能性的量。

本发明还公开了由(Z)-N-[2-(二乙胺基)乙基]-2-甲基-7-(1,2-二氢-5-氟-2-氧代 -3H-吲哚-3-亚基)-4,5,6,7-四氢-1H-吲哚-3-羧酰胺制备其L-苹果酸盐的方法；以及 (Z)-N-[2-(二乙胺基)乙基]-2-甲基-7-(1,2-二氢-5-氟-2-氧代-3H-吲哚-3-亚 基)-4,5,6,7-四氢-1H-吲哚-3-羧酰胺与其L-苹果酸盐在引湿性、水中溶解度、动物 体内血浆暴露量(AUC)、动物体内抑瘤率等方面的差异。结果显示，L-苹果酸盐 在水中具有更好的溶解度、在动物体内有更高的血浆暴露量、更好的抑瘤率。

本发明比较了(Z)-N-[2-(二乙胺基)乙基]-2-甲基-7-(1,2-二氢-5-氟-2-氧代-3H- 吲哚-3-亚基)-4,5,6,7-四氢-1H-吲哚-3-羧酰胺L-苹果酸盐A晶型与B晶型稳定性 的差异，结果显示B晶型具有更好的稳定性。

本发明测定了(Z)-N-[2-(二乙胺基)乙基]-2-甲基-7-(1,2-二氢-5-氟-2-氧代-3H- 吲哚-3-亚基)-4,5,6,7-四氢-1H-吲哚-3-羧酰胺L-苹果酸盐B晶型的熔点，结果为 170～171℃。

本发明还测定了(Z)-N-[2-(二乙胺基)乙基]-2-甲基-7-(1,2-二氢-5-氟-2-氧代 -3H-吲哚-3-亚基)-4,5,6,7-四氢-1H-吲哚-3-羧酰胺L-苹果酸盐B晶型大鼠口服后 的药代动力学，显示出较好的生物利用度。

附图说明

以下，结合附图来详细说明本发明的实施方案，其中：

图1是本发明的(Z)-N-[2-(二乙胺基)乙基]-2-甲基-7-(1,2-二氢-5-氟-2-氧代-3H-吲 哚-3-亚基)-4,5,6,7-四氢-1H-吲哚-3-羧酰胺L-苹果酸盐A晶型的XRD图；

图2是本发明的(Z)-N-[2-(二乙胺基)乙基]-2-甲基-7-(1,2-二氢-5-氟-2-氧代-3H-吲 哚-3-亚基)-4,5,6,7-四氢-1H-吲哚-3-羧酰胺L-苹果酸盐B晶型的XRD图；

图3是本发明的(Z)-N-[2-(二乙胺基)乙基]-2-甲基-7-(1,2-二氢-5-氟-2-氧代-3H-吲 哚-3-亚基)-4,5,6,7-四氢-1H-吲哚-3-羧酰胺L-苹果酸盐B晶型的IR图；

图4是本发明的(Z)-N-[2-(二乙胺基)乙基]-2-甲基-7-(1,2-二氢-5-氟-2-氧代-3H-吲 哚-3-亚基)-4,5,6,7-四氢-1H-吲哚-3-羧酰胺L-苹果酸盐B晶型的DSC图；

具体实施方式

下面的实施例是对本发明的进一步举例说明，而不是限定。

原料来源和规格：

(Z)-N-[2-(二乙胺基)乙基]-2-甲基-7-(1,2-二氢-5-氟-2-氧代-3H-吲哚-3-亚 基)-4,5,6,7-四氢-1H-吲哚-3-羧酰胺按文献方法合成，参见：唐锋，等， WO2008/067756，（2008）。

其它试剂和溶剂均为市售商品，化学纯或分析纯，HPLC测定所用试剂为色谱纯。

实施例1：

(Z)-N-[2-(二乙胺基)乙基]-2-甲基-7-(1,2-二氢-5-氟-2-氧代-3H-吲哚-3-亚 基)-4,5,6,7-四氢-1H-吲哚-3-羧酰胺L-苹果酸盐

将(Z)-N-[2-(二乙胺基)乙基]-2-甲基-7-(1,2-二氢-5-氟-2-氧代-3H-吲哚-3-亚 基)-4,5,6,7-四氢-1H-吲哚-3-羧酰胺8.49g（20mmol）加到乙腈500ml，二氯甲 烷90ml的混合液中，超声至分散均匀，加入L-苹果酸3.22g（24mmol），氮气 保护，搅拌升温至回流，反应1h后，趁热过滤，滤液减压浓缩至干，加入无水 乙醇60ml，超声至分散均匀后过滤，滤饼经40℃真空干燥后得黄色固体的标题 化合物10.39g（18.6mmol），收率93%。

¹H NMR(DMSO-d₆)δppm：1.15(6H,t,J=7.2Hz),1.93(2H,m),2.36(1H, dd,J=15.5,5.7Hz),2.47(3H,s),2.57(1H,dd,J=15.5,7.7Hz),2.83(2H,t,J=5.8 Hz),2.99(4H,q,J=7.2Hz),3.02(2H,m),3.03(2H,m),3.50(2H,q,J=6.1Hz), 4.03(1H,dd,J=7.7,5.7Hz),6.84(1H,dd,J=8.5,5.1Hz),6.91(1H,td,J=8.6,2.2 Hz),7.37(1H,dd,J=8.9,2.0Hz),7.55(1H,t,J=5.5Hz),10.01(3H,brs),10.89(1H, s),14.58(1H,s).

实施例2：

(Z)-N-[2-(二乙胺基)乙基]-2-甲基-7-(1,2-二氢-5-氟-2-氧代-3H-吲哚-3-亚 基)-4,5,6,7-四氢-1H-吲哚-3-羧酰胺（药学活性化合物）及其L-苹果酸盐引湿性的 测定

测定方法：取一定量供试品置一已精密称重（m₁）的具塞玻璃称量瓶中， 精密称重（m₂）；把称量瓶敞口置于适宜的25℃±1℃恒温干燥器内（下部放置硫 酸铵饱和溶液，相对湿度为80%±2%），放置24小时；盖好称量瓶盖子，精密称 重（M₃）。

引湿性特征描述与引湿增重的界定：

潮解：吸收足量水分形成液体；

极具引湿性：引湿增重不小15%；

有引湿性：引湿增重小于15%且不小于2%；

略有引湿性：引湿增重小于2%且不小于0.2%；

无或几乎无引湿性：引湿增重小于0.2%。

  待测物   引湿界定   药学活性化合物   几乎无引湿性   L-苹果酸盐   几乎无引湿性

实施例3：

(Z)-N-[2-(二乙胺基)乙基]-2-甲基-7-(1,2-二氢-5-氟-2-氧代-3H-吲哚-3-亚 基)-4,5,6,7-四氢-1H-吲哚-3-羧酰胺（药学活性化合物）及其L-苹果酸盐在水中溶 解度的测定

试验条件：

液相色谱仪：Agilent 1200高效液相色谱系统（二极管阵列检测器） chemstation色谱工作站

色谱柱：Aglinet C₁₈5μ250×4.6mm

流动相：乙腈－水

检测波长：264nm

流速：1.0ml/min

进样量：10μl

试验方法：

25℃下，取待试品约100mg，精密称定，置100ml量瓶中，加溶剂[乙腈－ 水（80:20）]适量，超声使溶解，并用上述溶剂稀释至刻度，摇匀，精密量取10μl 注入液相色谱仪，记录色谱图；量取峰面积S_对照。

量取纯化水10ml，置于25ml茄型瓶中，于25℃下逐渐加入待试品至溶液中 有不溶性固体为止，超声30min，滤去不溶性固体，精密量取滤液10μl注入液相 色谱仪，记录色谱图；量取峰面积S_测试。

  待测物   水中溶解度(mg/ml)   药学活性化合物   0.0200   L-苹果酸盐   38.6200

实施例4：

(Z)-N-[2-(二乙胺基)乙基]-2-甲基-7-(1,2-二氢-5-氟-2-氧代-3H-吲哚-3-亚 基)-4,5,6,7-四氢-1H-吲哚-3-羧酰胺（药学活性化合物）及其L-苹果酸盐的动物体 内血浆暴露量(AUC)的测定

试验方案：

实验动物：雄性SD大鼠

给药剂量：10mg/kg（按药学活性化合物计）

盐配制处方：纯水溶解

药学活性化合物配制处方：0.5%CMC(carboxymethylcellulose)混悬

动物试验分组及过程：

每组各3只雄性大鼠，体重180～210g。灌胃给药采血时间点为：5min、15min、 30min、45min、1h、2h、4h、6h、10h和24h，由眼眶静脉丛取血250μL左右于肝 素化试管中，离心，取血浆100μL用于LC-MS分析。

AUC测试结果：

  受试物 AUC(0-t)(μg/L*h)   药学活性化合物 127.9   L-苹果酸盐 1489.4

实施例5：

(Z)-N-[2-(二乙胺基)乙基]-2-甲基-7-(1,2-二氢-5-氟-2-氧代-3H-吲哚-3-亚 基)-4,5,6,7-四氢-1H-吲哚-3-羧酰胺（药学活性化合物）及其L-苹果酸盐对人结肠 癌HT-29裸小鼠移植瘤的疗效

试验方案：

实验动物：BALB/cA-nude裸小鼠，6-7周，♀

给药剂量：40mg/kg（按药学活性化合物计）

L-苹果酸盐配制处方：纯水溶解

药学活性化合物配制处方：0.5%CMC(carboxymethylcellulose)混悬

实验步骤：

裸小鼠皮下接种人结肠癌HT-29细胞，待肿瘤生长至150-250mm³后，将动 物随机分成3组(d0)，连续灌胃给药21天，每周测2－3次瘤体积，记录数据。 肿瘤体积（V）计算公式为：V＝1/2×a×b²，其中a、b分别表示长、宽。

相对肿瘤增殖率T/C(%)=(T-T₀)/(C-C₀)×100，其中T、C为实验结束时的肿瘤 体积；T₀、C₀为实验开始时的肿瘤体积，抑瘤率=1-T/C(%)。

实验结果：

  给药   抑瘤率(%)   药学活性化合物   40   L-苹果酸盐   54

实施例6：(Z)-N-[2-(二乙胺基)乙基]-2-甲基-7-(1,2-二氢-5-氟-2-氧代-3H-吲哚-3- 亚基)-4,5,6,7-四氢-1H-吲哚-3-羧酰胺L-苹果酸盐A晶型的制备：

将(Z)-N-[2-(二乙胺基)乙基]-2-甲基-7-(1,2-二氢-5-氟-2-氧代-3H-吲哚-3-亚 基)-4,5,6,7-四氢-1H-吲哚-3-羧酰胺4.24g（10mmol）加到甲醇40mL中，搅拌、 加热至回流；将L-苹果酸2.50g加至甲醇20mL中，配成甲醇溶液，慢慢滴加至 回流体系。滴加结束后，继续搅拌反应15min，停止加热，自然冷却至室温，并 在室温继续搅拌8h，析出大量黄色固体，过滤，滤饼经无水乙醇（5mL*3）洗 涤，40℃真空干燥，得固体4.93g。

A晶型的XRD图见图1。

实施例7：(Z)-N-[2-(二乙胺基)乙基]-2-甲基-7-(1,2-二氢-5-氟-2-氧代-3H-吲哚-3- 亚基)-4,5,6,7-四氢-1H-吲哚-3-羧酰胺L-苹果酸盐B晶型的制备：

依次将(Z)-N-[2-(二乙胺基)乙基]-2-甲基-7-(1,2-二氢-5-氟-2-氧代-3H-吲哚-3- 亚基)-4,5,6,7-四氢-1H-吲哚-3-羧酰胺466g(1.10mol)、无水甲醇11.65L、乙酸乙酯 0.26L、L-苹果酸178.48g(1.33mol)加到20L反应瓶中，溶液搅拌升温至回流，反 应1h左右，趁热过滤。滤液搅拌升温至回流，至反应液完全澄清，关闭加热， 自然降温，至室温后，继续搅拌12h，过滤，滤饼40℃真空干燥后得固体564g。

B晶型的XRD图、红外吸收光谱、DSC吸热转变图见图2-4。

实施例8：(Z)-N-[2-(二乙胺基)乙基]-2-甲基-7-(1,2-二氢-5-氟-2-氧代-3H-吲哚-3- 亚基)-4,5,6,7-四氢-1H-吲哚-3-羧酰胺L-苹果酸盐A晶型、B晶型的X-射线粉末 衍射鉴定

仪器：日本理学公司D/max-2500/PC型转靶X射线衍射仪

管压：40kV

管流：100mA

旋转靶：铜靶

射线波长：CuKα，

狭缝系统：DS：1°；SS：1°；RS：0.15mm

单色器装置：石墨弯晶单色器

扫描范围：0.00-40.00°

扫描速度：10.00°/min

A型和B型晶型使用Cu-Kα辐射，以度2θ（2θ衍射角的误差为0.2）表示 的X-射线粉末衍射光谱图分别见图1和图2，其峰的位置(2θ)和相对峰强度可见 表1和表2，在所述表中，将峰强度为1到12分级为很弱，13到32为弱，33 到64为一般，65到87为强，88到100为很强（参照ZL 01817064.1）。

A型的数值

B型的数值

实施例8(Z)-N-[2-(二乙胺基)乙基]-2-甲基-7-(1,2-二氢-5-氟-2-氧代-3H-吲哚-3- 亚基)-4,5,6,7-四氢-1H-吲哚-3-羧酰胺L-苹果酸盐A晶型、B晶型的稳定性

取待试样品（A、B晶型）于称量瓶中，敞口置于85℃、RH（相对湿度）>90% 的环境中，分别于3天、122天取样，HPLC法测定有关物质，结果为：

A、B晶型对稳定性的影响

结论：A晶型样品加速试验3天后出现了两个0.1%以上新增杂质，且原有 杂质有一定程度增加，样品总纯度下降1%左右；B晶型样品加速试验122天后， 样品纯度略有下降（下降程度为0.14%），B晶型具有更好的稳定性。

实施例9：(Z)-N-[2-(二乙胺基)乙基]-2-甲基-7-(1,2-二氢-5-氟-2-氧代-3H-吲哚-3- 亚基)-4,5,6,7-四氢-1H-吲哚-3-羧酰胺L-苹果酸盐B晶型的红外光谱（IR）：

仪器：BRUKER Vector 33红外光谱仪

样品制备：KBr压片

B型晶型（溴化钾压片）的红外吸收图谱见图3，其在430cm^-1、450cm^-1、 504cm^-1、555cm^-1、556cm^-1、594cm^-1、631cm^-1、674cm^-1、726cm^-1、736cm^-1、 772cm^-1、781cm^-1、789cm^-1、808cm^-1、820cm^-1、844cm^-1、892cm^-1、908cm^-1、 935cm^-1、958cm^-1、981cm^-1、1008cm^-1、1018cm^-1、1053cm^-1、1080cm^-1、1103 cm^-1、1134cm^-1、1156cm^-1、1176cm^-1、1190cm^-1、1234cm^-1、1261cm^-1、1277 cm^-1、1304cm^-1、1324cm^-1、1368cm^-1、1340cm^-1、1421cm^-1、1439cm^-1、1456 cm^-1、1473cm^-1、1516cm^-1、1592cm^-1、1625cm^-1、1655cm^-1、2488cm^-1、2629 cm^-1、2761cm^-1、2883cm^-1、2946cm^-1、2980cm^-1、3047cm^-1、3079cm^-1、3268 cm^-1、3320cm^-1处有吸收峰。

实施例10(Z)-N-[2-(二乙胺基)乙基]-2-甲基-7-(1,2-二氢-5-氟-2-氧代-3H-吲哚-3- 亚基)-4,5,6,7-四氢-1H-吲哚-3-羧酰胺L-苹果酸盐B晶型的差示扫描热法（DSC）：

仪器：NETZSCH DSC 204型差热分析仪

温度范围：30-250℃

升温速度：10℃/min

B型晶体差示扫描量热法的热分析图见图4，其DSC吸热转变在170℃。

实施例11(Z)-N-[2-(二乙胺基)乙基]-2-甲基-7-(1,2-二氢-5-氟-2-氧代-3H-吲哚-3- 亚基)-4,5,6,7-四氢-1H-吲哚-3-羧酰胺L-苹果酸盐B晶型的差示扫描热法（DSC） 的熔点：

仪器：天津精密仪器厂YRT-3型熔点仪

升温速率：1.0℃/min

B型晶体熔点为170～171℃。

实施例12大鼠口服B晶型原料后的药代动力学

称取适量B晶型原料，以10%吐温80/0.5%苯甲醇/5%乙醇/84.5%生理盐水 配制成所需浓度。

健康SD大鼠12只，雌雄各半，体重200~250g，由中国科学院上海实验 动物中心提供【生产许可证号：SCXK（沪）2007~0005，使用许可证号SYXK （沪）2008~0049】，随机分成2组。给药前禁食12h，自由饮水。以10和20mg/kg 的剂量分别灌胃给予B型原料（给药容积为10mL/kg），于给药前和给药后0.25， 0.5，1.0，2.0，3.0，5.0，7.0，9.0,12和24h经眼球后静脉丛取静脉血0.2mL， 置肝素化试管中，3500rpm离心10min，分离血浆，-70°C保存待测。

血浆样品测定方法

仪器：Synapt型四极杆-飞行时间串联质谱仪（Q-TOF MS），配有电喷雾电 离源（ESI源），美国Waters公司；UPLC液相色谱系统，包括二元输液泵、自 动进样器、柱温箱、脱气机和紫外检测器，美国Waters公司。数据采集采用Waters 公司的Masslynx 4.1软件，数据分析采用MDF功能，Metabolynx和Mass Fragment^TM软件。

色谱条件

色谱柱为Acquity UPLC HSS T3column（2.1×100mm I.D.，1.8μm粒径）， 美国Waters公司；柱温为40°C；流动相为乙腈－水；流速为0.4mL/min。

研究结果

结论：大鼠单次灌胃给予10和20mg/kg B型原料后，药物的血浆药物浓度 达峰时间t_max分别为3.17和2.67h；达峰浓度C_max分别为68.5和454ng/mL； AUC_0-t分别为349和2237ng·h/mL；血浆消除半衰期t_1/2分别为2.44和2.10h。 经剂量校正后，以AUC_0-t计算，大鼠单次灌胃给予10和20mg/kg B型原料的绝 对生物利用度分别为12.9%和41.4%。