公开/公告号CN103458885A
专利类型发明专利
公开/公告日2013-12-18
原文格式PDF
申请/专利权人 考格尼申治疗股份有限公司;
申请/专利号CN201280017032.1
申请日2012-02-01
分类号A61K31/137(20060101);
代理机构北京嘉和天工知识产权代理事务所(普通合伙);
代理人甘玲
地址 美国宾夕法尼亚州
入库时间 2024-02-19 22:36:00
法律状态公告日
法律状态信息
法律状态
2016-02-10
授权
授权
2014-03-05
实质审查的生效 IPC(主分类):A61K31/137 申请日:20120201
实质审查的生效
2013-12-18
公开
公开
本申请要求2011年2月2日递交的美国临时专利申请序列号61/438,916的权益和优 先权，所述临时专利申请通过引用整体被并入本文。
发明内容
除其他之外，本发明提供对于认知衰退的抑制、治疗和/或减轻有用的化合物及其制 备方法。在称作“化学调理（chemical conditioning）”的方法中，本发明的某些化合物衍 生自天然存在的化合物，例如在姜黄（turmeric（Curcuma longa））中发现的那些。本文 描述的化学调理过程可应用于多种的生物提取物，并且可以用来创造用于筛选潜在的新候 选药物的化合物阵列（compound array）。另外，一般地，通过化学调理过程衍生的化合 物在化学上稳定并在结构上多样化，并且是用于针对药学活性的药物筛选的优良候选物。 在一些实施方案中，提供衍生自姜黄油的化合物。根据本发明的一些实施方案，提供通过 本文描述的化学调理过程衍生自姜黄油的化合物。在另一实施方案中，本发明提供由姜黄 油制备一批新颖的化合物的方法。在其他一些实施方案中，通过化学合成制备对于认知衰 退的抑制、治疗和/或减轻有用的新颖的化合物。
在一些实施方案中，本发明提供式I-0的化合物：
或其药学上可接受的盐，其中：选自单键和双键；R1选自CH3、CH2、F、Cl、Br、 CF3、O-烷基和OCF3；R2选自CH2C(CH3)2OH和CH=C(CH3)；并且R3选自OH和 NHCH2CH(CH3)2。在一些实施方案中，R1选自CH3和CH2。
在一些实施方案中，化合物选自：2-甲基-6-p-甲苯基庚-2-烯-4-醇 （2-methyl-6-p-tolylhept-2-en-4-ol）；2-甲基-6-（4-甲基环己-1，3-二烯基）庚-2-烯-4-醇； 2-甲基-6-p-甲苯基庚-2，4-二醇（2-methyl-6-p-tolylheptane-2,4-diol）；N-异丁基-2-甲基-6- （p-甲苯基）庚-2-烯-4-胺；4-（异丁基氨基）-2-甲基-6-p-甲苯基庚-2-醇；4-（异丁基氨基） -2-甲基-6-（4-甲基环己-1，3-二烯基）庚-2-醇（4-(isobytylamino)-2-methyl-6-(4- methylcclohexa-1,3-dienyl)heptan-2-ol）以及其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，本发明提供式I-1的化合物：
或其药学上可接受的盐，其中：选自单键和双键；R1选自CH3、CH2、F、Cl、Br、 CF3、O-烷基和OCF3；R2选自CH2C(CH3)2OH和CH=C(CH3)；并且R3选自OH和 NHCH2CH(CH3)2。在一些实施方案中，R1选自CH3和CH2。
在一些实施方案中，化合物选自：（6S）-2-甲基-6-p-甲苯基庚-2-烯-4-醇；（6S）-2- 甲基-6-（4-甲基环己-1，3-二烯基）庚-2-烯-4-醇；（6S）-2-甲基-6-p-甲苯基庚-2，4-二醇； （6S）-N-异丁基-2-甲基-6-（p-甲苯基）庚-2-烯-4-胺；（6S）-4-（异丁基氨基）-2-甲基-6-p- 甲苯基庚-2-醇；（6S）-4-（异丁基氨基）-2-甲基-6-（4-甲基环己-1，3-二烯基）庚-2-醇 以及其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，本发明提供式I-2的化合物：
或其药学上可接受的盐，其中：选自单键和双键；R1选自CH3、CH2、F、Cl、Br、 CF3、O-烷基和OCF3；R2选自CH2C(CH3)2OH和CH=C(CH3)；并且R3选自OH和 NHCH2CH(CH3)2。在一些实施方案中，R1选自CH3和CH2。
在一些实施方案中，化合物选自：（4S，6S）-N-异丁基-2-甲基-6-p-甲苯基庚-2-烯-4- 胺；（4R，6S）-N-异丁基-2-甲基-6-p-甲苯基庚-2-烯-4-胺以及其药学上可接受的盐。
一些实施方案是药物组合物，所述药物组合物包括治疗有效量的式I-0的化合物：
其中：选自单键和双键；R1选自CH3、CH2、F、Cl、Br、CF3、O-烷基和OCF3； R2选自CH2C(CH3)2OH和CH=C(CH3)；并且R3选自OH和NHCH2CH(CH3)2或其药学上 可接受的盐；以及药学上可接受的载体。在一些实施方案中，R1选自CH3和CH2。
在一些实施方案中，药物组合物选自：2-甲基-6-p-甲苯基庚-2-烯-4-醇；2-甲基-6-（4- 甲基环己-1，3-二烯基）庚-2-烯-4-醇；2-甲基-6-p-甲苯基庚-2，4-二醇；N-异丁基-2-甲基 -6-（p-甲苯基）庚-2-烯-4-胺；4-（异丁基氨基）-2-甲基-6-p-甲苯基庚-2-醇；4-（异丁基 氨基）-2-甲基-6-（4-甲基环己-1，3-二烯基）庚-2-醇以及其药学上可接受的盐。
一些实施方案是药物组合物，所述药物组合物包括治疗有效量的式I-1的化合物：
其中：选自单键和双键；R1选自CH3、CH2、F、Cl、Br、CF3、O-烷基和OCF3； R2选自CH2C(CH3)2OH和CH=C(CH3)；并且R3选自OH和NHCH2CH(CH3)2或其药学上 可接受的盐，以及药学上可接受的载体。在一些实施方案中，R1选自CH3和CH2。
在一些实施方案中，药物组合物选自：（6S）-2-甲基-6-p-甲苯基庚-2-烯-4-醇；（6S） -2-甲基-6-（4-甲基环己-1，3-二烯基）庚-2-烯-4-醇；（6S）-2-甲基-6-p-甲苯基庚-2，4- 二醇；（6S）-N-异丁基-2-甲基-6-（p-甲苯基）庚-2-烯-4-胺；（6S）-4-（异丁基氨基）-2- 甲基-6-p-甲苯基庚-2-醇；和（6S）-4-（异丁基氨基）-2-甲基-6-（4-甲基环己-1，3-二烯基） 庚-2-醇或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的载体。
一些实施方案是药物组合物，所述药物组合物包括治疗有效量的式I-2的化合物：
或其药学上可接受的盐，其中：选自单键和双键；R1选自CH3、CH2、F、Cl、Br、 CF3、O-烷基和OCF3；R2选自CH2C(CH3)2OH和CH=C(CH3)；并且R3选自OH和 NHCH2CH(CH3)2。在一些实施方案中，R1选自CH3和CH2。
在一些实施方案中，药物组合物选自：（4S，6S）-N-异丁基-2-甲基-6-p-甲苯基庚-2- 烯-4-胺；（4R，6S）-N-异丁基-2-甲基-6-p-甲苯基庚-2-烯-4-胺以及其药学上可接受的盐。
一些实施方案是药物组合物，所述药物组合物包括治疗有效量的4-（异丁基氨基)-2- 甲基-6-p-甲苯基庚-2-醇和治疗有效量的4-（异丁基氨基）-2-甲基-6-（4-甲基环己-1，3- 二烯基）庚-2-醇或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的载体的混合物。
一些实施方案是药物组合物，所述药物组合物包括治疗有效量的（6S）-4-（异丁基氨 基）-2-甲基-6-p-甲苯基庚-2-醇和治疗有效量的（6S）-4-（异丁基氨基）-2-甲基-6-（4-甲 基环己-1，3-二烯基）庚-2-醇或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的载体的混合物。
一些实施方案中，本发明提供一种用于在患者中治疗认知衰退和/或阿尔兹海默氏疾 病的方法，所述方法包括给予所述患者治疗有效量的式I-0的化合物：
其中：选自单键和双键；R1选自CH3、CH2、F、Cl、Br、CF3、O-烷基和OCF3； R2选自CH2C(CH3)2OH和CH=C(CH3)；并且R3选自OH和NHCH2CH(CH3)2或其药学上 可接受的盐，以及药学上可接受的载体。在一些实施方案中，R1选自CH3和CH2。
在一些实施方案中，所述化合物选自：2-甲基-6-p-甲苯基庚-2-烯-4-醇；2-甲基-6-（4- 甲基环己-1，3-二烯基）庚-2-烯-4-醇；2-甲基-6-p-甲苯基庚-2，4-二醇；N-异丁基-2-甲基 -6-（p-甲苯基）庚-2-烯-4-胺；4-（异丁基氨基）-2-甲基-6-p-甲苯基庚-2-醇；和4-（异丁 基氨基）-2-甲基-6-（4-甲基环己-1，3-二烯基）庚-2-醇或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，选自由记忆丧失、意识模糊、判断力受损、人格改变、定向障碍 和语言技能丧失组成的组的一种或更多种认知衰退的症状被治疗。
在再其他实施方案中，治疗包括：（i）长期潜能的修复；（ii）抑制、治疗和/或减轻 神经退化；（iii）抑制、治疗和/或减轻一般性淀粉样变性；（iv）抑制、治疗和/或减轻淀 粉样蛋白产生、淀粉样蛋白组装、淀粉样蛋白聚集、淀粉样蛋白寡聚物结合和淀粉样蛋白 沉积的一种或更多种；以及（v）抑制、治疗和/或减轻一种或更多种Abeta寡聚物在神经 元细胞上的活性/作用的一种或更多种。
在一些实施方案中，治疗包括淀粉样蛋白产生的抑制、淀粉样蛋白组装的抑制、一种 或更多种Abeta寡聚物在神经元细胞上的活性的抑制、淀粉样蛋白聚集的抑制、淀粉样蛋 白结合的抑制和淀粉样蛋白沉积的抑制的一种或更多种。
在一些实施方案中，治疗包括一种或更多种Abeta寡聚物在神经元细胞上的活性的抑 制、淀粉样蛋白聚集的抑制、淀粉样蛋白结合的抑制和淀粉样蛋白沉积的抑制。
在一些实施方案中，所述化合物在包括药学上可接受的赋形剂的药物组合物中。
在一些实施方案中，本发明提供一种用于在患者中治疗认知衰退和/或阿尔兹海默氏 疾病的方法，所述方法包括给予所述患者治疗有效量的式I-1的化合物：
其中：选自单键和双键；R1选自CH3、CH2、F、Cl、Br、CF3、O-烷基和OCF3； R2选自CH2C(CH3)2OH和CH=C(CH3)；并且R3选自OH和NHCH2CH(CH3)2或其药学上 可接受的盐，以及药学上可接受的载体。在一些实施方案中，R1选自CH3和CH2。
在一些实施方案中，所述化合物选自：（6S）-2-甲基-6-p-甲苯基庚-2-烯-4-醇；（6S） -2-甲基-6-（4-甲基环己-1，3-二烯基）庚-2-烯-4-醇；（6S）-2-甲基-6-p-甲苯基庚-2，4- 二醇；（6S）-N-异丁基-2-甲基-6-（p-甲苯基）庚-2-烯-4-胺；（6S）-4-（异丁基氨基）-2- 甲基-6-p-甲苯基庚-2-醇；和（6S）-4-（异丁基氨基）-2-甲基-6-（4-甲基环己-1，3-二烯基） 庚-2-醇或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，选自由记忆丧失、意识模糊、判断力受损、人格改变、定向障碍 和语言技能丧失组成的组的一种或更多种认知衰退的症状被治疗。
在一些实施方案中，治疗包括：（i）长期潜能的修复；（ii）抑制、治疗和/或减轻神 经退化；（iii）抑制、治疗和/或减轻一般性淀粉样变性；（iv）抑制、治疗和/或减轻淀粉 样蛋白产生、淀粉样蛋白组装、淀粉样蛋白聚集、淀粉样蛋白寡聚物结合和淀粉样蛋白沉 积的一种或更多种；以及（v）抑制、治疗和/或减轻一种或更多种Abeta寡聚物在神经元 细胞上的活性/作用的一种或更多种。
在一些实施方案中，治疗包括淀粉样蛋白产生的抑制、淀粉样蛋白组装的抑制、一种 或更多种Abeta寡聚物在神经元细胞上的活性的抑制、淀粉样蛋白聚集的抑制、淀粉样蛋 白结合的抑制和淀粉样蛋白沉积的抑制的一种或更多种。
在再其他实施方案中，治疗包括一种或更多种Abeta寡聚物在神经元细胞上的活性的 抑制、淀粉样蛋白聚集的抑制、淀粉样蛋白结合的抑制和淀粉样蛋白沉积的抑制。
在一些实施方案中，所述化合物在包括药学上可接受的赋形剂的药物组合物中。
在一些实施方案中，本发明提供一种用于在患者中治疗认知衰退和/或阿尔兹海默氏 疾病的方法，所述方法包括给予所述患者治疗有效量的式I-2的化合物：
或其药学上可接受的盐，其中：选自单键和双键；R1选自CH3、CH2、F、Cl、Br、 CF3、O-烷基和OCF3；R2选自CH2C(CH3)2OH和CH=C(CH3)；并且R3选自OH和 NHCH2CH(CH3)2。在一些实施方案中，R1选自CH3和CH2。
在一些实施方案中，所述化合物选自：（4S，6S）-N-异丁基-2-甲基-6-p-甲苯基庚-2- 烯-4-胺;（4R，6S）-N-异丁基-2-甲基-6-p-甲苯基庚-2-烯-4-胺以及其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，选自由记忆丧失、意识模糊、判断力受损、人格改变、定向障碍 和语言技能丧失组成的组的一种或更多种认知衰退的症状被治疗。
在一些实施方案中，治疗包括：（i）长期潜能的修复；（ii）抑制、治疗和/或减轻神 经退化；（iii）抑制、治疗和/或减轻一般性淀粉样变性；（iv）抑制、治疗和/或减轻淀粉 样蛋白产生、淀粉样蛋白组装、淀粉样蛋白聚集、淀粉样蛋白寡聚物结合和淀粉样蛋白沉 积的一种或更多种；以及（v）抑制、治疗和/或减轻一种或更多种Abeta寡聚物在神经元 细胞上的活性/作用的一种或更多种。
在一些实施方案中，治疗包括淀粉样蛋白产生的抑制、淀粉样蛋白组装的抑制、一种 或更多种Abeta寡聚物在神经元细胞上的活性的抑制、淀粉样蛋白聚集的抑制、淀粉样蛋 白结合的抑制和淀粉样蛋白沉积的抑制的一种或更多种。
在再其他实施方案中，治疗包括一种或更多种Abeta寡聚物在神经元细胞上的活性的 抑制、淀粉样蛋白聚集的抑制、淀粉样蛋白结合的抑制、淀粉样蛋白沉积的抑制。
在一些实施方案中，所述化合物在包括药学上可接受的赋形剂的药物组合物中。
在一些实施方案中，本发明提供一种用于在患者中治疗认知衰退和/或阿尔兹海默氏 疾病的方法，所述方法包括给予所述患者药物组合物，所述药物组合物包括治疗有效量的 （6S）-4-（异丁基氨基）-2-甲基-6-p-甲苯基庚-2-醇和治疗有效量的（6S）-4-（异丁基氨 基）-2-甲基-6-（4-甲基环己-1，3-二烯基）庚-2-醇或其药学上可接受的盐的混合物。
在一些实施方案中，选自由记忆丧失、意识模糊、判断力受损、人格改变、定向障碍 和语言技能丧失组成的组的一种或更多种认知衰退的症状被治疗。
在再其他实施方案中，治疗包括：（i）长期潜能的修复；（ii）抑制、治疗和/或减轻 神经退化；（iii）抑制、治疗和/或减轻一般性淀粉样变性；（iv）抑制、治疗和/或减轻淀 粉样蛋白产生、淀粉样蛋白组装、淀粉样蛋白聚集、淀粉样蛋白寡聚物结合和淀粉样蛋白 沉积的一种或更多种；以及（v）抑制、治疗和/或减轻一种或更多种Abeta寡聚物在神经 元细胞上的活性/作用的一种或更多种。
在一些实施方案中，治疗包括淀粉样蛋白产生的抑制、淀粉样蛋白组装的抑制、一种 或更多种Abeta寡聚物在神经元细胞上的活性的抑制、淀粉样蛋白聚集的抑制、淀粉样蛋 白结合的抑制和淀粉样蛋白沉积的抑制的一种或更多种。
在一些实施方案中，治疗包括一种或更多种Abeta寡聚物在神经元细胞上的活性的抑 制、淀粉样蛋白聚集的抑制、淀粉样蛋白结合的抑制和淀粉样蛋白沉积的抑制。
在一些实施方案中，所述化合物在包括药学上可接受的赋形剂的药物组合物中。
附图说明
图1显示在存在和不存在淀粉样前体蛋白的经处理产品时MTT试验的结果。
图2显示CT0109对淀粉样前体蛋白的经处理产品-介导的膜运输作用的抑制。
图3显示CT0109和CT0093抑制淀粉样前体蛋白的经处理产品的记忆丧失作用。
图4显示CT0093和纯化的级分CT01296、CT01297、CT01298对淀粉样前体蛋白的 经处理产品-介导的膜运输作用的抑制。
图5显示CT0093和CT0109对淀粉样前体蛋白的经处理产品-介导的突触丧失的抑制
图6显示CT0093在体外对于淀粉样前体蛋白的经处理产品结合到脑细胞的抑制。
图7显示淀粉样前体蛋白的经处理产品和CT0093之间对调解膜运输的靶点的药理性 竞争（pharmacological competition），并且显示化合物CT0093和CT0109与合成物（A、 B）和源自人类阿尔兹海默氏患者的（C、D）寡聚物两者展现药理性竞争，并且降低Abeta 寡聚物的毒性。
图8显示无论在之前或之后加入，化合物CT0093和CT0109都有效地抑制淀粉样前 体蛋白的经处理产品对膜运输的抑制。
图9显示化合物CT0093和CT0109在阿尔兹海默氏疾病的转基因小鼠模型中改善记 忆障碍。
图10显示化合物CT0093和CT0109在预防和治疗方案两者中都是有效的。
具体实施方式
认知衰退，例如记忆丧失、意识模糊、判断力受损、人格改变、定向障碍和语言技能 丧失，在许多人群中随着他们年龄的增长而以不同程度发生。认识衰退的最常见、严重且 不可逆的形式是阿尔兹海默氏疾病，其在目前常常是致命的。
认知衰退和阿尔兹海默氏疾病的症状被认为是起源于在大脑上的淀粉样蛋白β及其 更高阶寡聚形式的作用，所述作用导致神经元（神经细胞）性能的退化，以及随后症状的 发作。淀粉样蛋白是身体正常产生的蛋白片段的一般术语。β-淀粉样蛋白是从另一种称作 淀粉样前体蛋白（APP）的蛋白质剪切（snipped）的蛋白质片段。在健康大脑中，β-淀粉 样蛋白片段被分解并消除。在有阿尔兹海默氏疾病和其他形式的认识衰退的个体中，所述 片段积聚以形成硬的不溶性斑块。神经元纤维缠结是在大脑的细胞内部发现的不溶性绞合 纤维。神经元纤维缠结中含有的蛋白质，即τ蛋白，形成微管，微管帮助将营养物和其他 重要物质从神经细胞的一个部分输送到另一部分。在阿尔兹海默氏疾病中，τ蛋白是异常 的并且微管结构瓦解。
β-分泌酶是人类大脑中负责β-淀粉样蛋白、病原性物质的产生的酶，β-淀粉样蛋白、 病原性物质对患阿尔兹海默氏疾病的大脑中大脑斑块和缠结的形成负责。β-淀粉样蛋白及 其寡聚物（β-淀粉样蛋白寡聚物或Abeta寡聚物）也被认为对在患前阿尔兹海默氏疾病的 大脑中早期认知衰退负责。β-分泌酶的抑制预计会减轻大脑中的β-淀粉样蛋白负担并由此 减缓认知衰退、阻断淀粉样蛋白寡聚物的形成、斑块和缠结的产生，停止神经退化，以及 会潜在地治疗轻度认知损伤和更严重形式的认知损伤，例如阿尔兹海默氏疾病。然而，降 低β-淀粉样蛋白单体水平的作用是未知的。近来的临床试验表明目标分泌酶可能不代表可 行的治疗选择。
全世界数以百万计的人受到认知衰退和阿尔兹海默氏疾病的影响。因此，强烈需要发 现认知衰退的抑制剂，并且尤其是通过诸如抑制淀粉样蛋白（包括Abeta寡聚物）产生、 淀粉样蛋白（包括Abeta寡聚物）聚集和/或淀粉样蛋白（包括Abeta寡聚物）沉积（即成 斑块），抑制神经退化和/或恢复长期潜能，和/或抑制Abeta寡聚物在神经元上的活性/作 用的方法，在认知衰退和阿尔兹海默氏疾病的治疗和减轻中有用的化合物。还需要在化学 上和生物学上稳定的认知衰退的抑制剂。
在认知衰退和阿尔兹海默氏疾病领域，植物作为针对药物发现的潜在有价值的来源一 直相对很少吸引到注意。植物提取物生产有医疗价值的非天然衍生物的化合物的应用一般 不被使用。因此，也需要从植物提取物和来自其他生物来源的提取物生产有医疗价值的化 合物的方法。尤其是，还需要生产和确认在认知衰退和阿尔兹海默氏疾病的治疗和减轻中 有用的衍生自植物提取物的化合物。
姜黄（turmeric），一种具有在印度医学体系（阿育吠陀（Ayurveda））中受到高度 赞誉的药物特性的草药，是在印度大量生长的姜黄（Curcuma longa L.Syn.Curcuma domestica Valeton）（姜科）的根茎。姜黄长期被用作食品中的香辛料和着色剂。姜黄的 粉末或提取物被推荐治疗伤口和炎症。据报道，姜科姜黄属的多个种的根茎和叶子的脂溶 性提取物（lipid soluble extracts）对于脑血管神经失调的治疗有用（参见WO2003051380）。 姜黄油可以用超临界二氧化碳从姜黄（Curcuma longa）中分离（参见如B.Gopalan等，“姜 黄（Curcuma longa）的超临界二氧化碳提取物”（“Supercritical Carbon Dioxide Extraction of Turmeric(Curcuma longa)”），农业与食品化学（J.Agric.Food Chem.），2000年，48(6)， 2189–2192页；以及参见L-H Chang等，“来自姜黄属的姜黄油的超临界二氧化碳提取物 以及姜黄素的纯化”（“Supercritical carbon dioxide extraction of turmeric oil from Curcuma longa Linn and purification of turmerones”），分离和纯化技术（Separation and Purification Technology），第47卷，第3期，2006年1月，119-125页）。本发明部分地涉及生产和 识别源自姜黄油（即姜黄油衍生物）的化合物，该姜黄油在认知衰退和阿尔兹海默氏疾病 的治疗和减轻中是有用的。本发明还部分地涉及化学合成在认知衰退和阿尔兹海默氏疾病 的治疗和减轻中有用的化合物。
本文描述的化合物、组合物和方法针对这些需要和其他目的。
除其他之外，本发明的实施方案提供式I-0的化合物：
或其药学上可接受的盐，其中：是单键或双键；R1选自CH3、CH2、F、Cl、Br、 CF3、O-烷基和OCF3；R2选自CH2C(CH3)2OH和CH=C(CH3)；并且R3选自OH和 NHCH2CH(CH3)2。在一些实施方案中，R1选自CH3和CH2。
在一些实施方案中，所述化合物选自：2-甲基-6-p-甲苯基庚-2-烯-4-醇；2-甲基-6-（4- 甲基环己-1，3-二烯基）庚-2-烯-4-醇；2-甲基-6-p-甲苯基庚-2，4-二醇；N-异丁基-2-甲基 -6-（p-甲苯基）庚-2-烯-4-胺；4-（异丁基氨基）-2-甲基-6-p-甲苯基庚-2-醇；4-（异丁基 氨基）-2-甲基-6-（4-甲基环己-1，3-二烯基）庚-2-醇以及其药学上可接受的盐。
除其他之外，本发明的实施方案提供式I-1的化合物：
或其药学上可接受的盐，其中：选自单键和双键；R1选自CH3、CH2、F、Cl、Br、 CF3、O-烷基和OCF3；R2选自CH2C(CH3)2OH和CH=C(CH3)；并且R3选自OH和 NHCH2CH(CH3)2。在一些实施方案中，R1选自CH3和CH2。
在一些实施方案中，化合物选自：（6S）-2-甲基-6-p-甲苯基庚-2-烯-4-醇；（6S）-2- 甲基-6-（4-甲基环己-1，3-二烯基）庚-2-烯-4-醇；（6S）-2-甲基-6-p-甲苯基庚-2，4-二醇； （6S）-N-异丁基-2-甲基-6-（p-甲苯基）庚-2-烯-4-胺；（6S）-4-（异丁基氨基）-2-甲基-6-p- 甲苯基庚-2-醇；（6S）-4-（异丁基氨基）-2-甲基-6-（4-甲基环己-1，3-二烯基）庚-2-醇 以及其药学上可接受的盐。
除其他之外，本发明的实施方案提供式I-2的化合物：
或其药学上可接受的盐，其中：选自单键和双键；R1选自CH3、CH2、F、Cl、Br、 CF3、O-烷基和OCF3；R2选自CH2C(CH3)2OH和CH=C(CH3)；并且R3选自OH和 NHCH2CH(CH3)2。在一些实施方案中，R1选自CH3和CH2。
在一些实施方案中，化合物选自：（4S，6S）-N-异丁基-2-甲基-6-p-甲苯基庚-2-烯-4- 胺;（4R，6S）-N-异丁基-2-甲基-6-p-甲苯基庚-2-烯-4-胺以及其药学上可接受的盐。
在本说明书的各个地方，本发明的化合物的取代基均公开为组或范围。明确意图的是， 本发明的实施方案包括这样的组和范围的成员的每个以及每种各自的子组合。
对于其中变量出现多于一次的本发明的化合物，每个变量可以是选自限定变量的马库 什基团的不同部分。例如，当结构被描述为具有在同一个化合物上同时存在的两个R基团 时，则两个R基团可以代表选自针对R所限定的马库什基团的不同部分。
还要理解，本发明的某些特征（所述特征为清楚起见而在分别的实施方案的上下文中 描述）也可以组合而在单个实施方案中提供。相反，本发明的各个特征（所述特征为简要 起见而在单个实施方案的上下文中描述）也可以被分别提供，或提供为任何合适的子组合 形式。
术语“n-元的”，其中n是整数，典型地描述部分中成环原子的数目，在所述部分中 成环原子的数目是n。例如，吡啶是6-元杂芳基环的例子，而噻吩是5-元杂芳基环基团的 例。
如本文使用的，术语“烷基”意图指为直链或支链的饱和烃基团。示例性的烷基基团 包括，但不限于，甲基（Me）、乙基（Et）、丙基（如，n-丙基和异丙基）、丁基（如， n-丁基、异丁基、t-丁基）、戊基（如，n-戊基、异戊基、新戊基）等等。烷基基团可以 含有从1到约20、从2到约20、从1到约10、从1到约8、从1到约6、从1到约4，或 从1到约3个碳原子。
如本文使用的，“芳基”指单环或多环的（如具有2、3或4个稠合的环）芳香烃， 例如苯基、萘基、蒽基、菲基、二氢茚基、茚基等等。在一些实施方案中，芳基基团具有 从6到约20个碳原子。在一些实施方案中，芳基基团具有从6到约10个碳原子。
如本文使用的，“环烷基”指非芳香性环烃，包括成环的烷基、烯基和炔基基团，所 述成环的烷基、烯基和炔基基团含有直到20个成环碳原子。环烷基基团可以包括单环或 多环的（如，具有2、3或4个稠合的环）环体系以及螺环体系。环烷基基团可以含有从 3到约15、从3到约10、从3到约8、从3到约6、从4到约6、从3到约5或从5到约 6个成环碳原子。环烷基基团的成环碳原子可以可选地被氧（oxo）或硫桥（sulfido）取代。 示例的环烷基基团包括，但不限于，环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环戊烯 基、环己烯基、环己二烯基、环庚三烯基、降冰片基、降蒎基、降蒈基、金刚烷基等等。 环烷基的定义中还包括的是具有一个或更多个稠合（即，具有与环烷基共用的键）到环烷 基环的芳香环的部分，例如，戊烷、戊烯、己烷等等的苯并或噻吩基衍生物（如，2,3-二 氢-1H-茚-1-基，或1H-茚-2(3H)-酮-1-基）。优选地，“环烷基”指含有直到20个成环碳 原子的成环的烷基基团。环烷基的例子优选地包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环 庚基、金刚烷基等等。
如本文使用的，“杂芳基”基团指具有直到20个成环原子并且具有至少一个杂原子 环成员（成环原子）（例如硫、氧或氮）的芳香性杂环。在一些实施方案中，杂芳基基团 具有至少一个或更多个杂原子成环原子，所述杂原子成环原子的每个独立地选自硫、氧和 氮。杂芳基基团包括单环和多环（如，具有2、3或4个稠合的环）体系。杂芳基基团的 例子不受限制地包括吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、三嗪基、呋喃基、喹啉基、异喹 啉基、噻吩基、咪唑基、噻唑基、吲哚基、吡咯基、噁唑基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、 苯并噻唑基、异噁唑基、吡唑基、三唑基、四唑基、吲唑基、1,2,4-噻二唑基、异噻唑基、 苯并噻吩基、嘌呤基、咔唑基、苯并咪唑基、吲哚啉基等等。在一些实施方案中，杂芳基 基团具有从1到约20个碳原子，并且在另外的实施方案中为从约1到约5，从约1到约4， 从约1到约3，从约1到约2个碳原子作为成环原子。在一些实施方案中，杂芳基基团含 有3到约14，3到约7或5到6个成环原子。在一些实施方案中，杂芳基基团具有1到约 4，1到约3或1到2个杂原子。
如本文使用的，“杂环烷基”指具有直到20个成环原子的非芳香性杂环，包括成环 的烷基、烯基和炔基基团，其中成环碳原子的一个或更多个被诸如O、N或S原子的杂原 子代替。杂环烷基基团可以是单环或多环的（如，稠合体系和螺体系两者）。示例的“杂 环烷基”基团包括吗啉代、硫代吗啉代、哌嗪基、四氢呋喃基、四氢噻吩基、2,3-二氢苯 并呋喃基、1,3-苯并二噁唑、苯并-1,4-二氧六环、哌啶基、吡咯烷基、异噁唑烷基、异噻 唑烷基、吡唑烷基、噁唑烷基、噻唑烷基、咪唑烷基、吡咯烷-2-酮-3-基等等。杂环烷基 基团的成环碳原子和杂原子可以可选地被氧或硫桥取代。例如，成环硫原子可以被1个或 2个氧取代[即，形成S(O)或S(O)2]。作为另一个例子，成环碳原子可以被氧取代（即，形 成羰基）。还包括在杂环烷基定义中的是具有稠合（即与非芳香性杂环具有共用的键）到 非芳香性杂环的一个或更多个芳香环的部分，例如吡啶基、苯硫基、苯邻二酰亚胺基、萘 酰亚胺基，以及杂环的苯并衍生物，如二氢吲哚、异吲哚啉、异吲哚啉-1-酮-3-基、4,5,6,7- 四氢噻吩并[2,3-c]吡啶-5-基、5,6-二氢噻吩并[2,3-c]吡啶-7(4H)-酮-5-基，以及3,4-二氢异喹 啉-1(2H)-酮-3基基团。杂环烷基基团的成环碳原子和杂原子可以可选地被氧或硫桥取代。 在一些实施方案中，杂环烷基基团具有从1到约20个碳原子，并且在另外的实施方案中 为从约3到约20个碳原子。在一些实施方案中，杂环烷基基团含有3到约14，3到约7 或5到6个成环原子。在一些实施方案中，杂环烷基基团具有1到约4，1到约3或1到 2个杂原子。在一些实施方案中，杂环烷基基团含有0到3个双键。在一些实施方案中， 杂环烷基基团含有0到2个三键。
如本文使用的，“烷氧基”指-O-烷基基团。示例的烷氧基基团包括甲氧基、乙氧基、 丙氧基（如，n-丙氧基和异丙氧基）、t-丁氧基等等。
如本文使用的，“芳基烷基”指被芳基取代的C1-6烷基。示例的芳基烷基基团包括， 但不限于，被C6-10芳基取代的C1-6烷基（如苄基）。
如本文使用的，“环烷基烷基”指被环烷基取代的C1-6烷基。示例的环烷基烷基基 团包括，但不限于，被C3-10环烷基或C3-7环烷基取代的C1-6烷基（如环丙基甲基）。
如本文使用的，“氨基”指NH2。
如本文使用的，术语“可选地取代的”意指取代是可选的，并且因此包括未取代的和 取代的原子和部分两者。“取代的”原子或部分表明指定的原子或部分上任意的氢可以用 来自指定的取代基基团的选择代替，前提是不超过指定的原子或部分的正常价态，并且取 代产生稳定的化合物。例如，如果甲基基团（即，CH3）被可选地取代，则碳原子上的3 个氢原子可以用取代基基团代替。
本文的实施方案中描述的化合物可以是不对称的（如，具有一个或更多个立体中心）。 所有的立体异构体，例如对映异构体和非对映异构体，除非另外表明，均为预期的。含有 不对称取代的碳原子的本发明的化合物可以以光学活性或外消旋形式被分离。如何从光学 活性的起始原料制备光学活性形式的方法在本领域是已知的，例如通过外消旋混合物的拆 分，或通过立体选择性合成。烯烃、C=N双键等等的许多几何异构体也可以存在于本文描 述的化合物中，并且所有这样的稳定的异构体在本发明中均为预期的。本发明的化合物的 顺式和反式几何异构体被描述，并且可以作为异构体的混合物或作为被分开的异构形式被 分离。在能够立体异构化或几何异构化的化合物被指定为其结构或名称而不提及具体的 R/S或顺式/反式构型时，意图预期所有这样的异构体。
化合物的外消旋混合物（或非对映异构体的混合物）的拆分可以通过本领域已知的众 多方法中任一种来进行。示例的方法包括使用为光学活性成盐有机酸的手性拆分酸的分级 重结晶。用于分级重结晶方法的合适的拆分试剂为，例如，光学活性的酸，如酒石酸、二 乙酰基酒石酸、二苯甲酰基酒石酸、苦杏仁酸、苹果酸、乳酸的D和L形式，或各种光 学活性的樟脑磺酸，例如α-樟脑磺酸。适合于分级结晶方法的其他拆分试剂包括立体异构 纯形式的α-甲基苄基胺（如，S和R形式，或非对映异构纯形式）、2-苯甘胺醇、降麻黄 碱、麻黄碱、N-甲基麻黄碱、环己基乙基胺、1,2-二氨基环己烷等等。
外消旋混合物（或非对映异构体的混合物）的拆分也可以通过在用光学活性拆分试剂 （如，二硝基苯甲酰基苯甘氨酸）装填的柱上的洗脱来进行。合适的洗脱溶剂组成可以由 本领域技术人员确定。
本发明实施方案的化合物还包括互变异构形式。互变异构形式由单键与相邻的双键的 交换连同伴随的质子的迁移而产生。互变异构形式包括质子移变的互变异构体，所述质子 移变的互变异构体为具有相同经验式和总电荷的同分异构质子化状态。示例的质子移变的 互变异构体包括酮-烯醇对、酰胺-亚胺酸对、内酰胺-内酰亚胺对、酰胺-亚胺酸对、烯胺- 亚胺对，以及环形式（其中，质子可以占据杂环体系的两个或更多个位置），例如，1H- 和3H-咪唑，1H-、2H-和4H-1,2,4-三唑、1H-和2H-异吲哚，以及1H-和2H-吡唑。互变 异构形式可以是平衡的，或者通过适当的取代而立体锁定为一种形式。
本发明实施方案的化合物还包括水合物和溶剂合物，以及无水和非溶剂化的形式。
如本文使用的术语“化合物”，意图包括所描绘结构的所有立体异构体、几何异构体、 互变异构体和同位素。
所有的化合物及其药学上可接受的盐可以与诸如水和溶剂的其他物质一起被制备或 存在（例如，水合物和溶剂合物），或者可以是被分离的。
本发明实施方案的化合物还可以包括中间体或最终化合物中存在的原子的所有同位 素。同位素包括具有相同原子序数但不同质量数的那些原子。例如，氢的同位素包括氚和 氘。
在一些实施方案中，本发明的化合物或其盐基本上是被分离的。以“基本上被分离” 意指所述化合物至少部分地或基本上与所述化合物形成或检测到的环境分开。部分分开可 以包括，例如，富集本发明的化合物的组合物。基本上分开可以包括含有至少约50%、至 少约60%、至少约70%、至少约80%、至少约90%、至少约95%、至少约97%或至少约 99%（重量）的本发明的化合物或其盐的组合物。分离化合物以及它们的盐的方法在本领 域是常规的。
本发明实施方案的化合物意图包括具有稳定结构的化合物。如本文使用的，“稳定化 合物”和“稳定结构”意图表明化合物足够坚固，以经受从反应混合物分离至可用的纯度， 并形成为有效力的治疗剂。
短语“药学上可接受的”在本文中用来指，在合理的医学判断范围内，适合与人类和 动物的组织接触使用，而无过度毒性、刺激、过敏反应或其他问题或并发症，与合理的获 益/风险比相称的那些化合物、材料、组合物和/或剂型。
表达“环境温度”和“室温”，如本文使用的，是本领域所理解的，并且一般指这样 的温度，如反应温度约为反应所进行的房间中的温度，例如从约20℃到约30℃的温度。
本发明的实施方案还包括本文所描述的化合物的药学上可接受的盐。如本文使用的， “药学上可接受的盐”指所公开的化合物的这样的衍生物，其中母体化合物通过将所存在 的酸或碱部分转变为其盐形式而被改性。药学上可接受的盐的例子包括，但不限于，诸如 胺的碱性残基的矿物盐或有机酸盐；诸如羧酸的酸性残基的碱金属盐或有机盐；等等。本 发明的药学上可接受的盐包括所形成的母体化合物的常规非毒性盐，例如来自非毒性无机 或有机酸。本发明的药学上可接受的盐可以通过常规化学方法从含有碱性或酸性部分的母 体化合物合成。一般地，这样的盐可以通过使这些化合物的游离酸或碱形式与化学计量的 量的合适的碱或酸在水中或在有机溶剂中，或在两者的混合物中反应来制备；一般地，非 水介质（如乙醚、乙酸乙酯、乙醇、异丙醇或乙腈（ACN））是优选的。合适的盐的列表 可见于1985年，第17版，雷明顿药物科学（Remington’s Pharmaceutical Sciences，Mack Publishing Company，Easton，Pa.，1418页），以及药物科学杂志（Journal of Pharmaceutical Science）,66,2(1977)，上述文献的每一个均通过引用整体并入本文。
在一些实施方案中，提供从诸如姜黄油的生物提取物制备一系列化合物的方法。
本发明的方法，称作“化学调理”，一般可应用于所有的生物提取物，尤其是通用的 或药用的天然植物提取物。参见，如US20080193574和WO2008042755，其每一个均通过 引用整体并入本文。化学调理是从可容易获得的天然材料生产新颖非天然类药化合物的方 法。一般地，天然提取物的“化学调理”连同经化学调理的提取物的预分级通过破坏反应 性天然化合物，而有助于提取物的成功生物化学筛选，所述反应性天然化合物在生物化学 试验中生成假阳性结果。化学调理产生新颖的先导和类药化合物，并且这里描述的还原性 胺化规程和还原规程可以生产尤其为先导和类药的结构多样的含氮产物和醇产物。
在本发明的某些实施方案中，从生物提取物制备化合物的方法例示于下列方案1中。 根据所述方法，提供生物提取物，如植物提取物，所述生物提取物具有一种或更多种生物 化合物，每种生物化合物具有一个或更多个反应性亲电基团。使生物提取物中的生物化合 物与胺反应，以将胺并入到生物化合物中。使具有并入的胺的生物化合物与还原剂反应， 以还原任意潜在的中间体亚胺和烯胺化合物，并形成一种或更多种含氮化合物。由此，得 到的含氮化合物是生物提取物中生物化合物的衍生物。
方案1
相似地，在本发明某些其他的实施方案中，从生物提取物制备化合物的方法示例于下 列方案1a中。仲胺（其中R1*和R2*中的每一个可以是烷基等等；或者R1*和R2*与它们所 连接至的N原子一起形成环胺，例如吡咯烷（pyrollidine））被用于经调理的提取。
方案1a
在一些实施方案中，在经调理的提取物中的化合物是具有酮和醛的化合物与各种胺的 反应产物。该反应随后是还原，例如中间体亚胺和烯胺的氢化物还原，以提供仲胺和叔胺。 酮和醛与胺的反应，随后是形成的亚胺和烯胺的还原以提供胺，在本领域是已知的。
在一些实施方案中，在经调理的提取物中的化合物是具有酮和醛的化合物与还原试剂 的反应产物，所述还原试剂例如氢化物还原试剂（如硼氢化钠、氢化锂铝和三乙酰氧基硼 氢化钠）。在一些实施方案中，酮和醛被还原为醇。在一些实施方案中，在经调理的提取 物中的化合物是具有其他反应性官能团的化合物，所述反应性官能团在存在还原试剂的条 件下可以被还原，所述还原试剂例如氢化物还原试剂（如硼氢化钠、氢化锂铝和三乙酰氧 基硼氢化钠）。
在一些实施方案中，本文描述的化学调理方法采用生物提取物（例如姜黄油），使用 许多不同的试剂，来有效地产生一系列含氮化合物。针对用作还原性胺化序列中的输入的 许多低分子量胺的商业易获得性，使得能够从相同的天然提取物开发出许多不同的且结构 多样的中枢神经系统类药混合物。用于本方法中的合适的胺选自由伯胺、仲胺、环胺、吡 咯烷以及氨基酸组成的组。用于本方法中的合适的还原剂选自由氢化物还原剂组成的组， 所述氢化物还原剂包括但不限于硼氢化钠、三乙酰氧基硼氢化钠和氢化锂铝。
在一些实施方案中，本文描述的化学调理方法采用生物提取物（例如姜黄油），使用 一种或更多种还原试剂，来有效地产生一系列含醇化合物（醇衍生物）。用于本方法中的 合适的还原剂选自由氢化物还原剂组成的组，所述氢化物还原剂包括但不限于硼氢化钠、 三乙酰氧基硼氢化钠和氢化锂铝。
所述方法可以还包括用猝灭剂猝灭反应，其中所述猝灭剂选自，但不限于由碳酸氢钠、 碳酸钠、硫酸钠、十水硫酸钠组成的组。所述方法可以还包括以纯化的或未纯化的形式， 分离含氮化合物的一种或更多种。得到的含氮化合物然后可以针对生物活性被筛选或测 试。
本文描述的通过还原或还原性胺化化学调理的过程破坏天然提取物中（如在姜黄油 中）的反应性亲电试剂（包括酮），并将它们转变为化学稳定的化合物，例如胺或醇。得 到的经调理的提取物含有天然化合物和新颖的非天然的含氮胺产品或醇产品两者，所述产 品为潜在的候选药物。在一些实施方案中，在本文描述的通过还原性胺化化学调理的过程 中，天然提取物中（如在姜黄油中）的反应性亲电试剂（包括酮）被破坏，并且酮化合物 被转变为其他化合物，例如胺。在其他一些实施方案中，在本文描述的通过还原化学调理 的过程中，天然提取物中（如在姜黄油中）的反应性亲电试剂（包括酮）被破坏，并且酮 化合物被转变为其他化合物，例如醇。
在姜黄油的提取物的情况中，含氮胺衍生物和醇衍生物可以被用于治疗中枢神经系统 紊乱。
为了本公开的目的，以下术语具有以下意义。
如本文使用的术语“生物化合物”指天然存在的化合物。
如本文使用的术语“生物提取物”指来自生物样品的提取物，例如植物提取物，或来 自有机物质的其他提取物，含有天然存在的化合物。
如本文使用的术语“反应性亲电基团”指具有与亲核试剂反应的能力的原子或原子的 组。
如本文使用的术语“含氮衍生物”代表含有氮原子的那些衍生物，其中氮原子是另一 原子的取代，例如母体化合物中的氧。
如本文使用的术语“醇衍生物”代表含有羟基基团的那些衍生物，其中所述羟基基团 是还原自母体化合物（例如酮或醛母体化合物）中的羰基基团。
在一个实施方案中，化学调理过程的具体例子示于下列方案2中。方案2示出依照该 方法的一个实施方案，对姜黄油进行的两步还原性胺化化学调理规程，其中包括酮2-1a 和酮2-1b的姜黄油被分别转变为胺2-4a和胺2-4b。根据方案2示出的方法，姜黄油（含 有酮2-1a和酮2-1b以及在姜黄中存在的其他分子）与胺2-2[其中R3b可以是C1-6烷基（如 异丁基）等等]反应以分别形成化合物2-3a和化合物2-3b。用诸如硼氢化物的还原剂，将 得到的化合物2-3a和化合物2-3b还原，以分别形成含氮化合物2-4a和含氮化合物2-4b （反应粗产品还包括其他化合物）。
方案2
在所述方法的下一个步骤中，将胺2-4a和胺2-4b从所述提取物（2-步还原性胺化过 程的粗反应产物）中分离/纯化。经调理的提取物可以通过快速色谱来分级。含有胺2-4a 或胺2-4b的级分可以根据本领域人员已知的方法，经历进一步的纯化/分离。可以接着将 含有胺2-4a或胺2-4b的级分进一步分离和表征。在一些实施方案中，胺2-4a可以进行进 一步的分开（例如使用柱色谱法）以分离出每一个非对映异构体。在一些实施方案中，胺 2-4b可以进行进一步的分开（例如使用柱色谱法）以分离出每一个非对映异构体。通过例 如本文描述的那些方法，针对分离的胺2-4a和胺2-4b的生物活性对其进行检测。
用于方案2中所示的本发明的化学调理过程的胺2-2的一些例子包括烷基胺 （akylamines）（例如甲胺、乙胺、n-丙胺、异丙胺、n-丁胺、2-丁胺、异丁胺和叔-丁胺）； 苯胺以及苄胺。
在另一实施方案中，化学调理过程的具体例子示于下列方案3中。方案3示出依照该 方法的一个实施方案，对姜黄油进行的还原性化学调理规程（或化学调理还原规程），其 中包括酮3-1a和酮3-1b的姜黄油被分别还原/转变为醇3-2a和醇3-2b。在一些实施方案 中，醇3-2a可以进行进一步的分开（例如使用柱色谱法）以分离出每一个非对映异构体。 在一些实施方案中，醇3-2b可以进行进一步的分开（例如使用柱色谱法）以分离出每一 个非对映异构体。通过例如本文描述的那些方法，针对醇衍生物3-2a和3-2b的生物活性 对其进行检测。
方案3
在一些实施方案中，姜黄油的衍生物例如胺衍生物2-4a和2-4b以及醇衍生物3-2a和 3-2b具备β-分泌酶抑制活性，和/或抑制淀粉样蛋白产生、淀粉样蛋白组装、Abeta寡聚物 在神经元（例如大脑中的神经元）上的活性/作用、淀粉样蛋白聚集、淀粉样蛋白（包括 淀粉样蛋白寡聚物）结合，或淀粉样蛋白沉积。这些化合物是用于认知衰退、淀粉样蛋白 产生、神经退化和阿尔兹海默氏疾病的治疗和预防的有用治疗剂。
通过此化学调理方法产生的新的先导化合物还可以通过本文描述的合成方法制备。
本发明实施方案的化合物，包括其盐，可以使用已知的有机合成技术来制备，并且可 以根据众多可能的方案的任一种来合成。
用于制备本发明的化合物的反应可以在合适的溶剂中进行，所述合适的溶剂可以由有 机合成领域的技术人员容易地选择。合适的溶剂可以基本上不与起始原料（反应物）、中 间体或产物在反应进行的温度（如，可以在从溶剂的凝固温度到溶剂的沸腾温度的范围内 的温度）反应。给定的反应可以在一种溶剂或多于一种溶剂的混合物中进行。取决于具体 的反应步骤，针对具体反应步骤的合适溶剂可以由本领域技术人员选择。
本发明的化合物的制备可以涉及各种化学基团的保护和去保护。对保护和去保护的需 要，以及合适的保护基团的选择，可以由本领域技术人员容易地确定。保护基团的化学性 质可见于，例如T.W.Greene和P.G.M.Wuts，有机合成中的保护基团（Protective Groups in Organic Synthesis），第3版，Wiley&Sons,Inc.，纽约（1999），其通过引用整体并入 本文。
反应可以根据本领域已知的任何合适的方法来监控。例如，产物形成可以通过光谱手 段，例如核磁共振光谱（如1H或13C）、红外光谱、分光光度（如，UV-可见）、质谱， 或者通过色谱方法，例如高效液相色谱（HPLC）或薄层色谱（TLC）来监控。
本发明的实施方案的化合物可以根据例如下文描述的反应路径、合成程序和技术来制 备。
如方案4中所示，其中R1选自CH3、CH2、F、Cl、Br、CF3、O-烷基和OCF3；并且 R4是H，酮4-1可以与Wittig试剂（如4-2）反应，随后通过水解（例如在酸性条件下） 来提供酮4-3。将酮4-3用试剂（如LDA）烯醇化，并与丙酮缩合后，随后将烯烃共轭还 原以形成酮4-4。在适当的氢化物（如硼氢化钠）的存在下，酮4-5与适当的胺R3bNH2的 还原性胺化可以提供胺4-6，其中R3b可以是C1-6烷基（例如异丁基）等等。胺4-6的不 同的非对映异构体可以通过本领域技术人员已知的方法分开，如柱色谱法。
方案4
如方案4a中所示，其中R1选自CH3、CH2、F、Cl、Br、CF3、O-烷基和OCF3；R3b是C1-6烷基，并且R4是H，在伯奇还原条件下，芳族化合物4a-0-1可以被还原为环己-1,4- 二烯4a-02。参见如Rabideau,P.W.，“芳族化合物的金属-氨还原”（“The metal-ammonia reduction of aromatic compounds”），四面体（Tetrahedron），45卷，6期，1989年，1579-1603 页。在酸性条件下（例如在存在催化量的HCl或乙酸的条件下），环己-1,4-二烯4a-02可 以重排为热力学更稳定的环己-1,3-二烯4a-1。根据与方案4中描述的那些方法相似的方法， 环己-1,3-二烯4a-1可以被转变为醇4a-6或胺4a-8。
方案4a
如方案5所示，其中R1选自CH3、CH2、F、Cl、Br、CF3、O-烷基和OCF3；R3b是 C1-6烷基，用AD-mix-α处理苯乙烯衍生物5-1（参见如Sharpless,K.B.，Amberg,W.， Bennani,Y.L.，Crispino,G.A.等，有机化学（J.Org.Chem.），1992，57，2771）提供二 醇5-2。参见A.Li等，“(7S,9R)-(+)-甜没药姜黄醇的总不对称合成”（“Total asymmetric synthesis of(7S,9R)-(+)-bisacumol”），四面体：不对称（2003），14(1)，75-78。用雷尼 镍立体选择还原二醇5-2的苄基的OH产生醇5-3。参见同上。基于Sharpless催化剂的选 择，5-2的两个异构体均可获得。用PPh3和CBr4在适合的溶剂（例如二氯甲烷）中处理 醇5-3提供溴化物5-4。在存在镁粉和CH3I的条件下（通过金属-卤素交换），溴化物5-4 转变为相应的格氏试剂，接着是与3-甲基丁烯醛反应，提供醇5-5。醇5-5的不同的非对 映异构体可以通过本领域技术人员已知的方法来分开，例如柱色谱法。参见同上。使用与 方案4中概述的那些方法相似的方法，醇5-5可以被转变成其相应的胺化合物5-6。胺化 合物5-8的异构体可以通过立体选择的亚胺（immine）还原获得。
方案5
本领域技术人员可以认识到，在本文描述的所有方案中，如果在诸如R1、R2、R3和 R4等的取代基基团上存在的官能（反应性）基团，则如果合适和/或期望的话，可以进行 进一步的修饰。例如，OH基团可以被转变为诸如甲磺酸根的更好的离去基团，该离去基 团转而又适合于亲核取代，例如被Br。由此，具有含有官能基团的取代基的式I的化合物 （例如方案4的化合物4-8）可以被转变为具有不同的取代基基团的另一种式I的化合物。
如本文使用的，术语“反应”指使指定的化学反应物集合到一起，以使得化学转化发 生，生成与最初引入到体系中的任一化合物不同的化合物。反应可以在存在或不存在溶剂 的条件下发生。
一些实施方案是用于在患者中治疗认知衰退和/或阿尔兹海默氏疾病的方法，所述方 法包括给予所述患者治疗有效量的式I-0的化合物：
其中：选自单键和双键；R1选自CH3、CH2、F、Cl、Br、CF3、O-烷基和OCF3； R2选自CH2C(CH3)2OH和CH=C(CH3)；并且R3选自OH和NHCH2CH(CH3)2或其药学上 可接受的盐，以及药学上可接受的载体。在一些实施方案中，R1选自CH3和CH2。
在一些实施方案中，所述化合物选自：2-甲基-6-p-甲苯基庚-2-烯-4-醇；2-甲基-6-（4- 甲基环己-1，3-二烯基）庚-2-烯-4-醇；2-甲基-6-p-甲苯基庚-2，4-二醇；N-异丁基-2-甲基 -6-（p-甲苯基）庚-2-烯-4-胺；4-（异丁基氨基）-2-甲基-6-p-甲苯基庚-2-醇；和4-（异丁 基氨基）-2-甲基-6-（4-甲基环己-1，3-二烯基）庚-2-醇或其药学上可接受的盐。在一些实 施方案中，所述化合物在包括药学上可接受的赋形剂的药物组合物中。
一些实施方案是用于在患者中治疗认知衰退和/或阿尔兹海默氏疾病的方法，所述方 法包括给予所述患者治疗有效量的式I-1的化合物：
其中：选自单键和双键；R1选自CH3、CH2、F、Cl、Br、CF3、O-烷基和OCF3； R2选自CH2C(CH3)2OH和CH=C(CH3)；并且R3选自OH和NHCH2CH(CH3)2或其药学上 可接受的盐，以及药学上可接受的载体。在一些实施方案中，R1选自CH3和CH2。
在一些实施方案中，所述化合物选自：（6S）-2-甲基-6-p-甲苯基庚-2-烯-4-醇；（6S） -2-甲基-6-（4-甲基环己-1，3-二烯基）庚-2-烯-4-醇；（6S）-2-甲基-6-p-甲苯基庚-2，4- 二醇；（6S）-N-异丁基-2-甲基-6-（p-甲苯基）庚-2-烯-4-胺；（6S）-4-（异丁基氨基）-2- 甲基-6-p-甲苯基庚-2-醇；和（6S）-4-（异丁基氨基）-2-甲基-6-（4-甲基环己-1，3-二烯基） 庚-2-醇或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的载体。
一些实施方案是用于在患者中治疗认知衰退和/或阿尔兹海默氏疾病的方法，所述方 法包括给予所述患者治疗有效量的式I-2的化合物：
或其药学上可接受的盐，其中：选自单键和双键；R1选自CH3、CH2、F、Cl、Br、 CF3、O-烷基和OCF3；R2选自CH2C(CH3)2OH和CH=C(CH3)；并且R3选自OH和 NHCH2CH(CH3)2或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的载体。在一些实施方案中， R1选自CH3和CH2。
在一些实施方案中，所述化合物选自：（4S，6S）-N-异丁基-2-甲基-6-p-甲苯基庚-2- 烯-4-胺;（4R，6S）-N-异丁基-2-甲基-6-p-甲苯基庚-2-烯-4-胺以及其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，选自由记忆丧失、意识模糊、判断力受损、人格改变、定向障碍 和语言技能丧失组成的组的一种或更多种认知衰退的症状被治疗。
在一些实施方案中，治疗包括：（i）长期潜能的修复；（ii）神经退化的抑制、治疗 和/或减轻；（iii）一般性淀粉样变性的抑制、治疗和/或减轻；（iv）淀粉样蛋白产生、淀 粉样蛋白组装、淀粉样蛋白聚集、淀粉样蛋白寡聚物结合和淀粉样蛋白沉积的一种或更多 种的抑制、治疗和/或减轻；以及（v）一种或更多种Abeta寡聚物在神经元细胞上的活性/ 作用的抑制、治疗和/或减轻的一种或更多种。
在再其他实施方案中，治疗包括淀粉样蛋白产生的抑制、淀粉样蛋白组装的抑制、一 种或更多种Abeta寡聚物在神经元细胞上的活性的抑制、淀粉样蛋白聚集的抑制、淀粉样 蛋白结合的抑制、淀粉样蛋白沉积的抑制的一种或更多种。
在其他实施方案中，治疗包括一种或更多种Abeta寡聚物在神经元细胞上的活性的抑 制、淀粉样蛋白聚集的抑制、淀粉样蛋白结合的抑制、淀粉样蛋白沉积的抑制。
一些实施方案是用于在患者中治疗认知衰退和/或阿尔兹海默氏疾病的方法，所述方 法包括给予所述患者药物组合物，所述药物组合物包括治疗有效量的4-（异丁基氨基)-2- 甲基-6-p-甲苯基庚-2-醇和治疗有效量的4-（异丁基氨基）-2-甲基-6-（4-甲基环己-1，3- 二烯基）庚-2-醇或其药学上可接受的盐的混合物。在一些实施方案中，所述化合物在包括 药学上可接受的赋形剂的药物组合物中。
一些实施方案是用于在患者中治疗认知衰退和/或阿尔兹海默氏疾病的方法，所述方 法包括给予所述患者药物组合物，所述药物组合物包括治疗有效量的（6S）-4-（异丁基氨 基）-2-甲基-6-p-甲苯基庚-2-醇和治疗有效量的（6S）-4-（异丁基氨基）-2-甲基-6-（4-甲 基环己-1，3-二烯基）庚-2-醇或其药学上可接受的盐的混合物。在一些实施方案中，所述 化合物在包括药学上可接受的赋形剂的药物组合物中。
在再其他实施方案中，选自由记忆丧失、意识模糊、判断力受损、人格改变、定向障 碍和语言技能丧失组成的组的一种或更多种认知衰退的症状被治疗。
在一些实施方案中，治疗包括：（i）长期潜能的修复；（ii）神经退化的抑制、治疗 和/或减轻；（iii）一般性淀粉样变性的抑制、治疗和/或减轻；（iv）淀粉样蛋白产生、淀 粉样蛋白组装、淀粉样蛋白聚集、淀粉样蛋白寡聚物结合和淀粉样蛋白沉积的一种或更多 种的抑制、治疗和/或减轻；以及（v）一种或更多种Abeta寡聚物在神经元细胞上的活性/ 作用的抑制、治疗和/或减轻的一种或更多种。
在另外的实施方案中，治疗包括淀粉样蛋白产生的抑制、淀粉样蛋白组装的抑制、一 种或更多种Abeta寡聚物在神经元细胞上的活性的抑制、淀粉样蛋白聚集的抑制、淀粉样 蛋白结合的抑制、淀粉样蛋白沉积的抑制的一种或更多种。
在一些实施方案中，治疗包括一种或更多种Abeta寡聚物在神经元细胞上的活性的抑 制、淀粉样蛋白聚集的抑制、淀粉样蛋白结合的抑制、淀粉样蛋白沉积的抑制。
在一些实施方案中，本发明的化合物抑制、治疗或减轻（部分抑制）淀粉样蛋白（包 括Abeta寡聚物）结合到神经元（例如大脑中的神经元），并且对于认知衰退和/或阿尔兹 海默氏疾病的抑制、治疗和减轻有用。在一些实施方案中，本发明的化合物抑制、治疗或 减轻（部分抑制）淀粉样蛋白聚集、淀粉样蛋白寡聚物结合和淀粉样蛋白沉积的一种或更 多种。在一些实施方案中，本发明的化合物抑制、治疗或减轻（部分抑制）淀粉样蛋白沉 积。在一些实施方案中，本发明的化合物抑制、治疗或减轻（部分抑制）Abeta寡聚物在 神经元（例如大脑中的神经元）上的活性/作用，并且对认知衰退和/或阿尔兹海默氏疾病 的抑制、治疗和减轻有用。在一些实施方案中，本发明的化合物经由Abeta寡聚物的破坏、 Abeta寡聚物结合到神经元的抑制，和/或通过Abeta寡聚物结合引发的行为的信号转导机 制的抵抗，而抑制、治疗和减轻（部分抑制）Abeta寡聚物在神经元（例如大脑中的神经 元）上的活性/作用。
在一些实施方案中，化合物在β分泌酶试验中显示活性，并且对于认识衰退和阿尔兹 海默氏疾病的抑制、治疗和减轻有用。在一些实施方案中，姜黄油的衍生物是纯化的并且 分离的形式的化合物（例如，具有大于80%、85%、90%、95%、98%或99%重量的纯度）。 本文描述的化合物和方法可以用于治疗认知衰退和/或阿尔兹海默氏疾病的一种或更多种 症状，例如记忆丧失、意识模糊、判断力受损、人格改变、定向障碍和语言技能丧失。另 外，本文描述的化合物和方法可以通过修复长期潜能，和/或神经退化和一般性淀粉样变 性的一种或两种的抑制、治疗或减轻，更具体地，通过淀粉样蛋白产生、淀粉样蛋白组装、 淀粉样蛋白聚集、淀粉样蛋白（包括淀粉样蛋白寡聚物）结合的抑制、治疗或减轻，以及 淀粉样蛋白沉积的一种或更多种，而对认知衰退和/或阿尔兹海默氏疾病的抑制、治疗和/ 或减轻有用。
在一些实施方案中，本发明的化合物可以抑制、治疗或减轻淀粉样蛋白产生、淀粉样 蛋白组装、淀粉样蛋白聚集、淀粉样蛋白寡聚物结合和淀粉样蛋白沉积的一种或更多种。 在一些实施方案中，本发明的化合物可以修复长期潜能，抑制、治疗或减轻神经退化和一 般性淀粉样变性的一种或两者。
在一些实施方案中，本发明的化合物抑制、治疗或减轻（部分抑制）淀粉样蛋白聚集、 淀粉样蛋白寡聚物结合和淀粉样蛋白沉积的一种或更多种。在一些实施方案中，本发明的 化合物抑制（或部分抑制）淀粉样蛋白沉积。在一些实施方案中，本发明的化合物抑制、 治疗或减轻（部分抑制）淀粉样蛋白（包括Abeta寡聚物）结合到神经元（例如大脑中的 神经元）。在一些实施方案中，本发明的化合物对于认识衰退和/或阿尔兹海默氏疾病的 抑制、治疗和减轻有用。
在一些实施方案中，本发明的化合物可以抑制β-分泌酶的活性。在一些实施方案中， 本发明的化合物可以用于通过使β-分泌酶与本文描述的一种或更多种化合物或组合物接 触，而抑制β-分泌酶的活性的方法。
本发明的另一方面涉及在个体（如，患者）中，通过给予所述个体治疗有效量或剂量 的本发明的化合物或其药物组合物，治疗认知衰退和/或阿尔兹海默氏疾病的方法。
本文的疾病/紊乱的治疗包括治疗与所述疾病/紊乱相关联的一种或更多种症状，例如， 认知衰退和/或阿尔兹海默氏疾病的症状。
如本文使用的，术语“使…接触”指将体外系统或体内系统的指定部分集合到一起。 例如，使β-分泌酶或神经元细胞（或在一种或更多种β-淀粉样蛋白寡聚物存在下的神经元 细胞）与本发明的化合物“接触”包括将本发明的化合物给予诸如人的具有β-分泌酶或神经 元细胞的个体或患者，以及，例如，将本发明的化合物引入到含有细胞的样本或含有β- 分泌酶或神经元细胞（或在一种或更多种β-淀粉样蛋白寡聚物存在下的神经元细胞）的纯 化的制备物中。
如本文使用的，可交换使用的术语“个体”或“患者”，指任何动物，包括哺乳动物， 优选为小鼠、大鼠、其他啮齿动物、兔、狗、猫、猪、牛、羊、马或灵长目动物，并且最 优选为人。
如本文使用的，术语“治疗（treating）”和“治疗（treatment）”指在患者中认知衰 退和/或阿尔兹海默氏疾病的抑制、治疗和/或减轻的一种或更多种，并且包括选自由记忆 丧失、意识模糊、判断力受损、人格改变、定向障碍和语言技能丧失组成的组的一种或更 多种认知衰退的症状的抑制、治疗和/或减轻。
如本文使用的，“治疗”和“治疗”包括与所述疾病有关的一种或更多种症状的抑制、 治疗和/或减轻。如本文使用的，认知衰退和/或阿尔兹海默氏疾病的抑制、治疗和/或减轻 还包括：（i）长期潜能的修复；和/或（ii）神经退化的抑制、治疗和/或减轻；和/或（iii） 一般性淀粉样变性的抑制、治疗和/或减轻；和/或（iv）淀粉样蛋白产生、淀粉样蛋白组 装、淀粉样蛋白聚集、淀粉样蛋白寡聚物结合和淀粉样蛋白沉积的一种或更多种的抑制、 治疗和/或减轻；和/或（v）一种或更多种Abeta寡聚物在神经元细胞上的活性/作用的抑制、 治疗和/或减轻的一种或更多种。
术语“治疗”或“治疗”还包括淀粉样蛋白产生、淀粉样蛋白组装、一种或更多种 Abeta寡聚物在神经元细胞上的活性、淀粉样蛋白聚集、淀粉样蛋白结合和淀粉样蛋白沉 积的一种或更多种的抑制、治疗和/或减轻。
术语“治疗”或“治疗”还包括疾病包括一种或更多种Abeta寡聚物在神经元细胞上 的活性/作用、淀粉样蛋白聚集、淀粉样蛋白结合和淀粉样蛋白沉积的一种或更多种的抑 制、治疗和/或减轻。
术语“药物组合物”应当意指包括至少一种活性成分的组合物，藉此所述组合物可以 经受在哺乳动物（例如，不限于，人）中针对指定的、有效力的效果的研究。本领域普通 技术人员将理解并领会适合于确定活性成分是否具有基于本领域技术人员的需求的期望 的有效力的效果的技术。
如本文使用的，术语“治疗有效量”指引起研究人员、兽医、医师或其他临床医师在 组织、系统、动物、个体或人类中所寻求的生物学或医学响应的活性化合物或药剂的量， 所述“生物学或医学响应”包括以下的一种或更多种：（1）预防所述疾病；例如，在可 能易患疾病、病况或紊乱但尚未经历或呈现所述疾病的病理或症状的个体中预防疾病、病 况或紊乱；（2）抑制所述疾病；例如，在正经历或呈现所述疾病、状况或紊乱的病理或 症状的个体中抑制疾病、状况或紊乱（即，阻止病理和/或症状的进一步的发展）；以及 （3）缓解所述疾病；例如，在正经历或呈现所述疾病、状况或紊乱的病理或症状的个体 中缓解疾病、状况或紊乱（即，逆转所述病理和/或症状）。如本文使用的，术语“治疗 有效量”还可以指引起由研究人员、兽医、医师或其他临床医师在组织、系统、动物、个 体或人类中所寻求的生物学或医学响应的活性化合物或药剂的量。
在某些实施方案中，用于认知衰退和/或阿尔兹海默氏疾病的治疗的一种或更多种额 外的药剂可以与本发明用于认识衰退和/或阿尔兹海默氏疾病的治疗的化合物组合使用。 所述一种或更多种额外的药剂同时或顺序地给予患者。
在一些实施方案中，所述一种或更多种额外的药剂包括，但不限于，多奈哌齐 （donepezil）、加兰他敏（galantamine）、美金刚（memantine）、利斯的明（rivastigmine） 和他克林（tacrine）。
一些实施方案是药物组合物，所述药物组合物包括治疗有效量的4-(异丁基氨基)-2- 甲基-6-p-甲苯基庚-2-醇和治疗有效量的4-(异丁基氨基)-2-甲基-6-(4-甲基环己-1,3-二烯基) 庚-2-醇或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的载体的混合物。
一些实施方案是药物组合物，所述药物组合物包括治疗有效量的(6S)-4-(异丁基氨 基)-2-甲基-6-p-甲苯基庚-2-醇和治疗有效量的(6S)-4-(异丁基氨基)-2-甲基-6-(4-甲基环己 -1,3-二烯基)庚-2-醇或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的载体的混合物。
在某些实施方案中，本发明的化合物可以以药物组合物的形式被给予。这些组合物可 以以制药领域公知的方式来制备，并且可以通过多种途径被给予，取决于期望的是局部治 疗还是全身治疗，以及取决于要被治疗的区域。给予可以是表面的（包括透皮、表皮、眼 部，以及对黏膜，包括鼻内、阴道和直肠递送），肺的（如，通过粉末或气雾剂的吸入或 吹入，包括通过喷雾器；气管内或鼻内），口服或肠胃外的。肠胃外的给予包括静脉内、 动脉内、皮下、腹膜内、肌内或注射或输注；或者颅内的，如，鞘内或心室内的给予。肠 胃外给予可以是单次丸（bolus）剂量的形式，或者可以是，例如通过持续灌注泵的形式。 用于表面给予的药物组合物和制剂可以包括透皮药贴、药膏、洗剂、乳剂、凝胶剂、滴剂、 栓剂、喷雾剂、液体剂和粉末剂。一些实施方案可以包括适用于肠内给药（包括，但不限 于，口服、直肠或鼻内给药）的缓释药物组合物。在实施方案中，所述药物组合物是一种 适用于口服给药的药物组合物（如，片、胶囊和液体）。在其他实施方案中，所述缓释药 物组合物可以是双层片或改良的胶囊。所述缓释药物组合物还可以适用于肠胃外给药（包 括，但不限于，血管内给药、皮下注射和肌内给药）。在一些实施方案中，药物组合物适 用于口服给药，并且配制成为片、胶囊或液体，优选地，片或胶囊。在一个实施方案中， 所述药物组合物可以是多层片，如双层片。在另一个实施方案中，所述药物组合物可以是 多组分胶囊，如分开的胶囊或在一个胶囊包含在另一个胶囊中。药物组合物还可以包括立 即释放剂型、缓释剂型或其组合。常规的药物载体、含水的、粉末或油状基础剂、增稠剂 等等可以是需要的或合乎期望的。涂药的避孕套、手套等等也可以是有用的。
本发明的实施方案还包括药物组合物，所述药物组合物包含与一种或更多种药学上可 接受的载体（赋形剂）结合的作为活性成分的一种或更多种上述本发明的化合物。一些实 施方案是药物组合物，所述药物组合物包括治疗有效量的式I-0的化合物：
其中：选自单键和双键；R1选自CH3、CH2、F、Cl、Br、CF3、O-烷基和OCF3； R2选自CH2C(CH3)2OH和CH=C(CH3)；并且R3选自OH和NHCH2CH(CH3)2或其药学上 可接受的盐，以及药学上可接受的载体。在一些实施方案中，R1选自CH3和CH2。
在一些实施方案中，药物组合物选自治疗有效量的：2-甲基-6-p-甲苯基庚-2-烯-4-醇； 2-甲基-6-（4-甲基环己-1，3-二烯基）庚-2-烯-4-醇；2-甲基-6-p-甲苯基庚-2，4-二醇；N- 异丁基-2-甲基-6-（p-甲苯基）庚-2-烯-4-胺；4-（异丁基氨基）-2-甲基-6-p-甲苯基庚-2-醇； 和4-（异丁基氨基）-2-甲基-6-（4-甲基环己-1，3-二烯基）庚-2-醇或其药学上可接受的盐， 以及药学上可接受的载体。
本发明的实施方案还包括药物组合物，所述药物组合物包含与一种或更多种药学上可 接受的载体（赋形剂）结合的作为活性成分的一种或更多种上述本发明的化合物。一些实 施方案是药物组合物，所述药物组合物包括治疗有效量的式I-1的化合物：
其中：选自单键和双键；R1选自CH3、CH2、F、Cl、Br、CF3、O-烷基和OCF3； R2选自CH2C(CH3)2OH和CH=C(CH3)；并且R3选自OH和NHCH2CH(CH3)2或其药学上 可接受的盐，以及药学上可接受的载体。在一些实施方案中，R1选自CH3和CH2。
在一些实施方案中，化合物选自：(6S)-2-甲基-6-p-甲苯基庚-2-烯-4-醇；(6S)-2-甲基 -6-(4-甲基环己-1,3-二烯基)庚-2-烯-4-醇；(6S)-2-甲基-6-p-甲苯基庚-2,4-二醇；(6S)-N-异丁 基-2-甲基-6-(p-甲苯基)庚-2-烯-4-胺；(6S)-4-(异丁基氨基)-2-甲基-6-p-甲苯基庚-2-醇； (6S)-4-(异丁基氨基)-2-甲基-6-(4-甲基环己-1,3-二烯基)庚-2-醇及其药学上可接受的盐。
本发明的实施方案还包括药物组合物，所述药物组合物包含与一种或更多种药学上可 接受的载体（赋形剂）结合的作为活性成分的一种或更多种上述本发明的化合物。一些实 施方案是包括治疗有效量的式I-2的化合物的药物组合物：
其中：选自单键和双键；R1选自CH3、CH2、F、Cl、Br、CF3、O-烷基和OCF3； R2选自CH2C(CH3)2OH和CH=C(CH3)；并且R3选自OH和NHCH2CH(CH3)2或其药学上 可接受的盐,以及药学上可接受的载体。在一些实施方案中，R1选自CH3和CH2。
在一些实施方案中，药物组合物选自：(4S,6S)-N-异丁基-2-甲基-6-p-甲苯基庚-2-烯-4- 胺；(4R,6S)-N-异丁基-2-甲基-6-p-甲苯基庚-2-烯-4-胺及其药学上可接受的盐。
一些实施方案是药物组合物，所述药物组合物包括治疗有效量的4-(异丁基氨基)-2- 甲基-6-p-甲苯基庚-2-醇和治疗有效量的4-(异丁基氨基)-2-甲基-6-(4-甲基环己-1,3-二烯基) 庚-2-醇或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的载体的混合物。
一些实施方案是药物组合物，所述药物组合物包括治疗有效量的(6S)-4-(异丁基氨 基)-2-甲基-6-p-甲苯基庚-2-醇和治疗有效量的(6S)-4-(异丁基氨基)-2-甲基-6-(4-甲基环己 -1,3-二烯基)庚-2-醇或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的载体的混合物。
在制作本发明的组合物时，活性成分通常与赋形剂混合，被赋形剂稀释，或包裹在例 如为胶囊、小袋、纸或其他容器的形式的这样的载体内。当赋形剂起稀释剂的作用时，该 赋形剂可以是固体、半固体或液体材料，该赋形剂充当活性成分的运载体（vehicle）、载 体（carrier）或媒质（medium）。由此，组合物的形式可以是片剂、丸剂、粉剂、锭剂、 袋剂、扁囊剂、酏剂、悬混剂、乳剂、汤剂、糖浆、气雾剂（作为固体或在液体介质中）、 含有例如，直到10%重量活性化合物的药膏、软和硬的明胶胶囊、栓剂、无菌注射液，以 及无菌包装粉。
在制备制剂时，活性化合物可以被碾磨，以在与其他成分合并之前提供合适的颗粒大 小。如果活性化合物基本上不溶，则其可以被碾磨至小于200目的颗粒大小。如果活性化 合物基本上是水溶性的，则颗粒大小可以通过碾磨来调整，以提供在制剂中基本上均匀的 分布，如，约40目。
本发明的化合物可以使用已知的碾磨程序来碾磨，例如湿磨，以得到适合于片剂形成 以及用于其他制剂类型的颗粒大小。本发明化合物的精细磨碎的（纳米细粒）制备物可以 通过本领域已知的过程来制备，例如参见国际专利申请号WO2002/000196。
合适的赋形剂的一些例子包括乳糖、右旋糖、蔗糖、山梨糖醇、甘露糖醇、淀粉、阿 拉伯胶、磷酸钙、海藻酸盐、黄芪胶、明胶、硅酸钙、微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、纤 维素、水、糖浆和甲基纤维素。制剂可以额外地包括：润滑剂，例如滑石、硬脂酸镁和矿 物油；润湿剂；乳化和悬浮剂；防腐剂，例如苯甲酸甲酯和羟基苯甲酸丙酯；甜味剂；以 及调味剂。本发明的组合物可以被配制，以致在采用本领域已知的程序给予患者之后，来 提供活性成分的快速、持续或延迟释放。
组合物可以被配制为单位剂型，每一剂含有从约0.1mg到约1000mg（1g），更常 用为约100到约500mg的活性成分。术语“单位剂型”指适合作为针对人类受试者和其 他哺乳动物的单一剂的物理上离散的单位，每个单位含有与合适的药物赋形剂相关连的经 计算以产生期望疗效的预定量的活性材料。
活性化合物可以在宽的剂量范围上有效，并且一般可以以药学有效量被给予。例如， 本发明的活性化合物的剂量在用于治疗有需要的患者（例如成年人）时，取决于给予的途 径和频率，可以在从0.1到3000mg每天的范围。这样的剂量相当于0.001到50mg/kg每 天。在一些实施方案中，本发明的活性化合物的剂量在用于治疗有需要的患者（例如成年 人）时，可以在从1到2000mg每天、从1到1000mg每天、从10到1000mg每天，或 从10到500mg每天的范围。然而，将被理解的是，实际给予的化合物的量将一般由医师 根据相关环境来确定，所述相关环境包括要被治疗的状况、所选的给予途径、实际给予的 化合物、个体患者的年龄、体重和响应、患者症状的严重度，等等。
对于制备诸如片剂的固体组合物，可以将主要活性成分与药物赋形剂混合，以形成含 有本发明的化合物的均质混合物的固体预制剂组合物。当提到这些呈均质的预制剂组合物 时，活性成分典型地全部均匀分散在组合物中，以使组合物可以容易地再分成相等有效的 单位剂型，例如片剂、丸剂和胶囊剂。该固体预制剂然后被再分成含有例如，从约0.1到 约1000mg本发明的活性成分的，上文所述类型的单位剂型。
本发明的片剂和丸剂可以被包覆，或以其他方式复合，以提供给予长效优势的剂型。 例如，片剂或丸剂可以包括内部药剂和外部药剂组分，后者为在前者上的包层的形式。两 种组分可以被肠溶层分开，肠溶层起抵抗在胃里消化的作用，并允许内部组分完整通过而 进入十二指肠或释放被延迟。多种材料可以用于这种肠溶层或包衣，这样的材料包括许多 聚合物酸以及聚合物酸与如虫胶、鲸蜡醇和醋酸纤维素这样的材料的混合物。
用于口服给予或通过注射给予的液体形式（其中可以并入本发明的化合物和组合物） 包括含水溶液、适当加味的糖浆、水性或油性悬混液，以及有食用油（例如棉籽油、芝麻 油、椰子油或花生油）以及酏剂和类似的药物运载体的加味乳液。
用于吸入或吹入的组合物包括在药学上可接受的、含水的或有机的溶剂，或其混合物， 以及粉末中的溶液和悬混液。液体或固体组合物可以含有上文描述的合适的药学上可接受 的赋形剂。在一些实施方案中，组合物通过口腔或鼻呼吸路径来给予，用于局部或全身作 用。组合物可以通过使用惰性气体而被雾化。经雾化的溶液可以直接从雾化装置呼吸，或 该雾化装置可以连接到面罩（face mask tent），或间歇式正压呼吸机。溶液、悬混液或粉 末组合物可以从以适当方式递送制剂的装置经口或鼻给予。
给予患者的化合物或组合物的量将取决于什么正被给予患者、给予的目的（例如预防 或治疗）、患者的状态、给予的方式等等而变化。在治疗应用中，组合物可以以足以治愈 或至少部分控制疾病的症状以及其并发症的量，被给予已经罹患疾病的患者。有效剂量将 取决于正被治疗的疾病状况，并由主治临床医师取决于多种因素（例如疾病的严重度、患 者的年龄、体重和一般情况等等）来判断。
给予患者的组合物可以是上文描述的药物组合物的形式。这些组合物可以通过常规灭 菌技术来灭菌，或者可以经无菌过滤。含水溶液可以被包装待用，或者被冻干，冻干的制 备物在给予之前与无菌含水载体合并。化合物制备物的pH值将典型地在3和11之间，更 优选为从5到9，并且最优选为从7到8。将被理解的是，使用某些前述赋形剂、载体或 稳定剂将导致药物盐的形成。
本发明的化合物的治疗剂量可以根据，例如进行治疗的具体应用、化合物的给予方式、 患者的健康和状况以及处方医师的判断，而变化。本发明的化合物在药物组合物中的比例 和浓度可以取决于多种因素而变化，所述因素包括剂量、化学性质（如，疏水性）以及给 予途径。例如，本发明的化合物可以在含有约0.1到约10%w/v所述化合物的含水生理缓 冲溶液中被提供，用于肠胃外给予。一些典型的剂量范围是从约1μg/kg到约1g/kg体重 每天。在一些实施方案中，剂量范围是从约0.01mg/kg到约100mg/kg体重每天。这些剂 量有可能取决于这些变量，如疾病或紊乱的类型和发展程度，具体患者的整体健康状况， 所选化合物的相对生物效力，赋形剂的制剂，以及其给予途径。有效剂量可以从源自体外 或动物模型测试系统的剂量-响应曲线外推。
本发明的组合物可以还包括一种或更多种额外的药学试剂，例如化疗剂、类固醇、抗 炎化合物或免疫抑制剂，它们的例子在上文列出。
本发明的另一方面涉及标记的本发明的化合物（放射标记的、荧光标记的等），所述 标记的化合物将在体外和体内两者中，不仅在放射成像中，而且在试验中，对于局部化和 定量化组织样品（包括人）中的酶，以及对于通过抑制标记的化合物的结合来识别配体有 用。因此，本发明包括含有这样标记的化合物的酶试验。
本发明的实施方案还包括同位素标记的本发明的化合物。“同位素”或“放射标记的” 化合物是其中一个或更多个原子被具有与通常自然界发现的（即，天然存在的）原子量或 质量数不同的原子量或质量数的原子代替或取代的本发明的化合物。可以并入本发明的化 合物的合适的放射性核素包括但不限于2H（也写作D，氘）、3H（也写作T，氚）、11C。 13C、14C、13N、15N、15O、17O、18O、18F、35S、36Cl、82Br、75Br、76Br、77Br、123I、124I、 125I和131I。并入放射标记的化合物的放射性核素将取决于该放射标记的化合物的具体应 用。例如，对于体外受体标记和竞争试验，并入3H、14C、82Br、125I、131I、35S或的化合 物一般将最有用。对于放射成像应用，11C、18F、125I、123I、124I、131I、75Br、76Br或77Br 一般将最有用。
可以理解的是，“放射标记的化合物”是已并入至少一个放射性核素的化合物。在一 些实施方案中，所述放射性核素选自3H、14C、125I、35S和82Br。
在一些实施方案中，被标记的本发明的化合物含有荧光标记。
用于将放射同位素和荧光标记并入有机化合物的合成方法在本领域是已知的。
被标记的（放射标记的、荧光标记的等）本发明的化合物可以用于筛选试验，以确认 /评价化合物。例如，被标记的新合成的或确认的化合物（即，测试化合物）可以通过跟 踪标记，通过监控该化合物在与β-分泌酶或神经元细胞（或在一种或更多种β-淀粉样蛋白 寡聚物存在下的神经元细胞）接触时的浓度变化，针对该化合物结合β-分泌酶或神经元细 胞（或在一种或更多种β-淀粉样蛋白寡聚物存在下的神经元细胞）的能力而被评价。作为 另一个例子，测试化合物（经标记的）可以针对该测试化合物减少已知结合β-分泌酶或神 经元细胞的另一化合物（即，标准化合物）的结合的能力，而被评价。因此，测试化合物 针对对β-分泌酶或神经元细胞的结合，与标准化合物竞争的能力与该测试化合物结合亲和 力直接相关。相反地，在一些其他筛选试验中，标准化合物被标记，而测试化合物不被标 记。因此，经标记的标准化合物的浓度被监控，以评价标准化合物与测试化合物之间的竞 争，并且由此证实测试化合物的相对结合亲和力。
本发明的实施方案还包括，例如在认知衰退和/或阿尔兹海默氏疾病的治疗或预防中 有用的药盒，所述药盒包括一个或更多个含有包括治疗有效量的本发明的化合物的药物组 合物的容器。期望时，这样的药盒可以还包括各种常规药盒部件的一种或更多种，例如， 具一种或更多种药学上可接受的载体的容器、额外的容器等，如对本领域技术人员来说是 明显的那些。说明书，作为插页或标签，指示要被给予的组分的量、给予的指导和/或用 于混合组分的指导，也可以包括在药盒中。
本发明将以具体实施例的方式更详细地进行描述。以下实施例是为举例说明的目的而 提供，而不意图以任何方式限制本发明。本领域技术人员将容易地认识到可以被改变或修 改以获得实质上相同结果的多种非关键性参数。根据本文提供的一种或更多种试验，发现 实施例的某些化合物可抑制、治疗或减轻淀粉样蛋白产生、淀粉样蛋白组装、Abeta寡聚 物在神经元（例如大脑中的神经元）上的活性/作用、淀粉样蛋白聚集、淀粉样蛋白寡聚 物结合以及淀粉样蛋白沉积的一种或更多种。在一些另外的实施方案中，根据本文提供的 试验的一种或更多种，发现实施例的某些化合物可抑制、治疗或减轻Abeta寡聚物在神经 元（例如大脑中的神经元）上的活性/作用、淀粉样蛋白聚集、淀粉样蛋白（包括淀粉样 蛋白寡聚物）结合以及淀粉样蛋白沉积的一种或更多种。
在一些实施方案中，本发明的化合物在Abeta寡聚物在神经元（例如大脑中的神经元） 上的活性/作用、淀粉样蛋白聚集、淀粉样蛋白（包括淀粉样蛋白寡聚物）结合以及淀粉 样蛋白沉积的一种或更多种的抑制方面，具有小于100μM、50μM、20μM、15μM、10μM、 5μM、1μM、500nM、100nM、50nM或10nM的IC50值。在一些实施方案中，本发明 的化合物在Abeta寡聚物在神经元（例如大脑中的神经元）上的活性/作用的抑制方面，具 有小于100μM、50μM、20μM、15μM、10μM、5μM、1μM、500nM、100nM、50nM 或10nM的IC50值。
在一些实施方案中，本发明的化合物对Abeta寡聚物在神经元（例如大脑中的神经元） 上的活性/作用、淀粉样蛋白聚集、淀粉样蛋白（包括淀粉样蛋白寡聚物）结合以及淀粉 样蛋白沉积的一种或更多种的抑制百分率在从10nM到10μM的浓度得以测量。在一些 实施方案中，所测量的抑制百分率为约1%到约20%、约20%到约50%、约1%到约50% 或约1%到约80%。
本发明在某些方面可以参考以下实施例来认识，所述实施例以举例说明的方式，而非 限制的方式来提供。除非另外指明，以下实施例中所涉及的原料、试剂等等可从商业来源 获得。
实施例
实施例1-经调理的姜黄油的提取（还原性胺化）：姜黄油与异丁基胺反应，接着是在甲醇中用硼氢化物还原以及使用柱色谱法分级
在本实施例中，来自姜黄的轻质油提取物是通过超临界CO2提取获得的。姜黄油（10 g）溶解于甲醇（250mL），并且加入异丁基胺（4.0mL）。混合物在室温下保持16小时。 此时，反应混合物在冰浴上冷却至0℃。伴随剧烈搅拌，在30分钟内分批加入在甲醇（50 mL）中的硼氢化钠（5g）溶液。在加入完成后，得到的混合物在回流状态保持16小时。 此时，反应混合物冷却至室温，并被倾倒入饱和碳酸氢钠水溶液（300mL）中。得到的混 合物通过旋转蒸发被浓缩，并且含水残留物在水和氯仿之间分配。氯仿层用无水硫酸钠干 燥，并然后过滤和浓缩。然后使用硅胶柱色谱法，采用从100%氯仿到氯仿:甲醇（4:1）的 梯度将粗产物分级。20个结合的级分，从相对非极性的至极性的，被选择并且浓缩。每 个级分针对生物测试被提交。含有活性产物的级分是相对极性的级分。
含有活性产物的级分（级分1A）通过柱色谱法进行进一步分开，并且分离出两种主 要组分：组分1A-1和组分1A-2。
在还原性胺化中所使用的姜黄油与异丁基胺的重量比为约3:1（从2:1至4:1）。1A 的纯度通过HPLC来测量。仅呈现两个主要的峰（两个组分）。所用的HPLC条件如下。
HPLC条件如下：流动相A：在水中的13.3mM甲酸铵/6.7mM甲酸；流动相B：在 水/CH3CN（1/9，v/v）中的6mM甲酸铵/3mM甲酸；柱1：Synergi Fusion-RP100A Mercury， 2×20mm，2.5微米（Phenomenex Part No00M-4423-B0_CE）；柱2：Synergi Max-RP80， 2×50mm，4微米（Phenomenex Part No00B-4337-B0）。
表1梯度程序：（针对柱I和柱II两者相同）
组分1A-1：1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.11、7.09、5.23、3.72、2.94、2.51、2.34、 2.31、1.92、1.72、1.71、1.58、1.29、1.27、0.92。13C NMR(125MHz,CDCl3)144.50、135.37、 135.03、129.03、126.89、126.70、66.97、49.25、46.39、35.05、32.46、25.83、20.96、20.67 和18.36。MS(M+H+)m/z274.3。
级分1A的组分1A-1的结构经确定为如下。
组分1A-2：1H NMR(500MHz,CDCl3)δ5.77、5.65、5.45、5.23、3.96、2.94、2.93、 2.51、2.31、2.30、2.05、1.92、1.72、1.71、1.58、1.29、1.27、0.92。13C NMR(125MHz, CDCl3)δ144.50、135.37、130.96、127.86、126.70、120.80、66.72、49.25、46.39、35.05、 32.46、25.83、21.79、21.79、20.67和18.36。MS(M+H+)m/z276.3。
级分1A的组分1A-2的结构经确定为如下。
通过1H NMR测量的化学位移可以变化，例如直到0.3ppm。通过13H NMR测量的化 学位移可以变化，例如直到0.6ppm。分析质谱可以有+/-0.4的实验误差。
实施例2-经调理的姜黄油的提取（还原）：在甲醇中用硼氢化钠还原姜黄油以及使用色谱柱分级
在本实施例中，来自姜黄的轻质油提取物是通过超临界CO2提取获得的。姜黄油（10 g）溶解于甲醇（250mL）。反应混合物在冰浴上冷却至0℃。伴随剧烈搅拌，在30分钟 内分批加入在甲醇（50mL）中的硼氢化钠（5g）溶液。在加入完成后，得到的混合物在 回流状态保持16小时。此时，反应混合物冷却至室温，并被倾倒入饱和碳酸氢钠水溶液 （300mL）中。得到的混合物通过旋转蒸发被浓缩，并且含水残留物在水和氯仿之间分配。 氯仿层用无水硫酸钠干燥，并然后过滤和浓缩。然后使用硅胶柱色谱法，采用从100%氯 仿到氯仿:甲醇（4:1）的梯度将产物分级。20个结合的级分，从相对非极性的至极性的， 被选择并且浓缩。每个级分针对生物测试被提交。含有活性产物的级分是相对极性的级分。
硼氢化钠与姜黄油（酮和醛在其中）的摩尔比大于1:1、2:1、3:1、4:1、5:1或6:1， 以确保酮和醛还原为醇。在一些实施方案中，硼氢化钠与姜黄油的重量比为约0.5:1（从 0.3:1至约0.8:1）。
含有活性产物的级分（级分2A）通过柱色谱法进行进一步分离，并且分离出两种主 要组分：组分2A-1和组分2A-2。
组分2A-1：1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.11、7.09、5.17、4.45、2.32、2.761.75、 1.58、1.52和1.26。13C NMR(125MHz,CDCl3)δ144.3、135.37、135.03、129.11、128.32、 126.90、67.10、42.05、39.64、25.81、23.00、21.01和18.12。MS(M+H+)m/z219.2。
级分2A的组分2A-1的结构经确定为如下。
组分2A-2：1H NMR(500MHz,CDCl3)δ6.18、5.70、5.56、5.17、4.24、2.32、2.80、 2.29、2.15、1.95、1.68、1.75、1.58、1.42、1.27。13C NMRδ144.10、135.00、134.10、129.58、 128.32、125.3、66.90、46.18、41.17、39.55、37.14、25.81、24.50、23.00和18.12。MS(M+H+) m/z221.1。
级分2A的组分2A-2的结构经确定为如下。
通过1H NMR测量的化学位移可以变化，例如直到0.3ppm。通过13H NMR测量的化 学位移可以变化，例如直到0.6ppm。分析质谱可以有+/-0.4的实验误差。级分2A的纯度 通过HPLC来测量。仅出现两个主要的峰（两个组分）。
实施例3-胞吐试验/MTT试验
将来自E18Sprague-Dawley大鼠胚胎的初级神经元以优化浓度种入NB培养基 （Invitrogen）中的384孔板。保持神经元培养3周，每周两次对NB培养基供给N2补充 物（Invitrogen）。将测试化合物添加到细胞，接着添加运载体或Abeta寡聚物制备物（1.5 μM），并于37℃在5%CO2中孵化1到24小时。在磷酸盐缓冲的盐水中重建MTT试剂 （3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5二苯基四氮唑溴盐）（Roche Molecular Biochemicals）至5 mg/mL。将10μL的MTT标记试剂添加到每个孔中，并于37℃孵化1h，然后显像。
为每个试验板编排格式，从而在化合物在每个板上均得以使用和不使用Abeta来测试。 该设计在筛选级联（以初级筛选的水平）早期即排除了毒性或代谢活性的化合物。
胞吐试验/MTT试验的类似程序可以在文献中找到。参见，如，Liu Y等，Detecting bioactive amyloid beta pept ide species in Alzheimer’s disease（检测在阿尔兹海默氏疾病中生 物活性的β淀粉样蛋白肽种类）.J Neurochem.2004Nov;91(3):648-56；Liu Y和Schubert D.“Cytotoxic amyloid peptides inhibit cellular3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5- diphenyltetrazolium bromide(MTT)reduction by enhancing MTT formazan exocytosis.”（细 胞毒素的淀粉样蛋白肽通过增加MTT甲瓒胞吐抑制细胞的3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5二苯 基四氮唑溴盐（MTT）还原）J Neurochem.1997Dec;69(6):2285-93；以及Liu Y和Schubert D.“Treating Alzheimer’s disease by inactivating bioactive amyloid beta peptide”（通过抑制生 物活性的β淀粉样蛋白肽的活性治疗阿尔兹海默氏疾病）Curr.Alzheimer Res.2006Apr; 3(2):129-35。根据公开的方法制作的Abeta1-42寡聚物[参见，如Dahlgren等，“Oligomeric and fibrillar species of amyloid-beta peptides differentially affect neuronal viability”（β淀粉样 蛋白肽的低聚物的和纤维状的种类对神经元生存能力的不同影响）J Biol Chem.2002Aug 30;277(35):32046-53.Epub2002Jun10.;LeVine H3rd.“Alzheimer's beta-peptide oligomer formation at physiologic concentrations”（处于生理浓缩的阿尔兹海默氏β-肽寡聚物的形 成）Anal Biochem.2004Dec1;335(1):81-90；Shrestha等，”Amyloid beta peptide adversely affects spine number and motility in hippocampal neurons”（β淀粉样蛋白肽不利影响海马体 神经元的脊数和能动性）Mol Cell Neurosci.2006Nov;33(3):274-82.Epub2006Sep8； Puzzo等，“Amyloid-beta peptide inhibits activation of the nitric oxide/cGMP/cAMP-responsive element-binding protein pathway during hippocampal synaptic plasticity”（β淀粉样蛋白肽 抑制在海马体突触可塑期间氮氧化物/cGMP/cAMP-响应元素-结合蛋白路径的活性）J Neurosci.2005Jul20;25(29):6887-97；Barghorn等，“Globular amyloid beta-peptide oligomer -a homogenous and stable neuropathological protein in Alzheimer’s disease”（球状β淀粉样 蛋白肽寡聚物-在阿尔兹海默氏疾病中的同质以及稳定的神经病理蛋白）J Neurochem. 2005Nov;95(3):834-47.Epub2005Aug31；Johansson等，Physiochemical characterization of the Alzheimer’s disease-related peptides A beta1-42Arctic and A beta1-42wt（阿尔兹海默 氏疾病相关肽Abeta1-42Arctic和Abeta1-42wt的生理化学表征）.FEBS J.2006Jun;2 73(12):2618-30]以及源自于大脑的Abeta寡聚物（参见如，Walsh等，Naturally secreted oligomers of amyloid beta protein potently inhibit hippocampal long-term potentiation in vivo （自然分泌的β淀粉样蛋白寡聚物强力地抑制体内海马体长期潜能）.Nature(2002).416, 535-539；Lesne等，A specific amyloid-beta protein assembly in the brain impairs memory（在 脑中特定的β淀粉样蛋白蛋白质组损害记忆）.Nature.2006Mar16;440(7082):352-7； Shankar等，Amyloid-beta protein dimers isolated directly from Alzheimer's brains impair synaptic plasticity and memory（由阿尔兹海默氏脑直接分离的β淀粉样蛋白蛋白质二聚物 损害突触可塑性和记忆）.Nat Med.2008Aug;14(8):837-42.Epub2008Jun22）构成阳性 对照。阴性对照包括运载体处理的神经元以及用28μM浓度的美金胺（memantine）处理 的神经元。美金胺在该剂量产生50%的寡聚物抑制作用。每个板上的这些对照起归一化工 具的作用，以逐板地校准试验性能。
初级神经元培养物制备如下：初级神经元培养物的最佳细胞浓度基于使用胞吐试验作 为示值读数，对Abeta寡聚物的细胞响应，以及培养物中神经胶质对神经元的相对比例的 免疫组织化学分析来确定。培养物以每周为基础，用免疫组织化学以及基于图像处理的量 化来监控，以监控培养物中神经元对神经胶质（胶质细胞）的百分数。在体外21天（21DIV） 的筛选期含有大于20%的神经胶质（对GFAP为阳性）对神经元（用直接针对MAP2的 抗体阳性染色）的培养物将不被接受。
Abeta寡聚物的制备如下制备：人淀粉样肽1-42获得自California Peptide，在质量控 制分析上具有批次选择偶然性。寡聚物制备的质量控制由以下组成：Westerns，以确定寡 聚物尺寸范围和相对浓度，以及MTT试验，以证实没有毒性的胞吐加速。在每个基于图 像的试验中，通过用DNA结合染料DAPI（Invitrogen）显现的细胞核形态的量化，来监 控毒性。碎裂的细胞核被认为是晚期细胞凋亡（Majno和Joris‘95）。产生异常的肽尺 寸范围，或以标准1.5uM的浓度在神经元上产生显著毒性的肽的批次不被接受。当重定 格式的板常规地达到运载体与经Abeta寡聚物处理的神经元之间最小的统计学上显著的双 重分离（p<0.01，Student’s t检验，不等方差）时，基于板的控制–试验优化将完成，板 之间具有不大于10%的CV，相当于其当前性能。
数据处理与分析通过Cellomics VTI图像分析软件和STORE自动数据库软件来实现。 由于低的动态范围以及培养三周后神经元的孔间变异性（well-to-well variability），通过 配对Tukey-Kramer分析来进行统计比较，以确定化合物+Abeta寡聚物与单独的Abeta之 间，以及单独的化合物与运载体之间分离的显著性。这些统计结果相比过去二十年一直被 用于高通量筛选中的z统计量来讲，更像是在动物行为测试中所见到的。成熟的初级神经 元更密切近似成年人大脑的电生理介导的信号传导网络的能力，为该筛选策略提供了合理 解释。功效分析将针对多种平行测定的筛选孔来设定，平行测定的筛选孔将使假阴性最小 化（如，N=4），并将区别假阳性的负担从实际采样数转移到剂量响应确认筛选。化合物 的排序基于行为的二次试验机制和化合物结构的物理化学性质来进行。某些测试化合物显 著逆转Abeta寡聚物的作用，而不影响神经元代谢。
级分1A在MTT试验中被定量给予，并显示为以10.5μM的EC50阻断Abeta寡聚物 诱导的胞吐加速，表明组分1A-1和组分1A-2之一或两者阻断/减轻Abeta寡聚物在神经 元细胞上的活性/作用。
级分2A在MTT试验中被定量给予，并显示为以25.4μM的EC50阻断Abeta寡聚物 诱导的胞吐加速，表明组分2A-1和组分2A-2之一或两者阻断/减轻Abeta寡聚物在神经 元细胞上的活性/作用。
实施例4-结合试验
将每种测试化合物添加到板上，接着添加一种或更多种Abeta1-42寡聚物。将板用磷 酸盐缓冲的盐水（PBS）中3.7%多聚甲醛固定15分钟。然后用PBS冲洗板3次，每次5 分钟。将板于室温在5%的羊血清和0.5%的曲拉通X-100（CAS编号：9002-93-1）中封闭 1小时。用PBS将初级抗体（抗-MAP2多克隆，Millipore#AB5622和抗-β淀粉样6E10 单克隆，Convance#SIG-39300）在5%的羊血清中稀释1:1000。将初级抗体或者在4℃孵 化过夜，或者在室温孵化1小时。然后用PBS冲洗板3次，每次5分钟。用PBS将二级 抗体（Alex Flor488多克隆，Invitrogen#A11008和Alexa Flor647单克隆，Invitrogen #A21235）在5%羊血清中稀释1:1000。将二级抗体于室温孵化1小时。用PBS冲洗板一 次。然后，以0.03μg/μL施加DAPI（4',6-二脒基-2-苯基吲哚，Invitrogen），并于室温孵 化5分钟，然后用PBS冲洗。进行图像处理用于分析。
针对结合试验的类似程序可以在文献中找到。参见如，Look GC等，Discovery of ADDL--targeting small molecule drugs for Alzheimer’s disease（用于阿尔兹海默氏疾病的 ADDL-靶向小分子药物的发现）。
根据结合实验，级分2A的EC50被确定为14.5μM。
Abeta寡聚物制备人淀粉样肽1-42获得自California Peptide，在质量控制分析上具有 批次选择偶然性。根据公开的方法制作的Abeta1-42寡聚物[参见，如Dahlgren等， “Oligomeric and fibrillar species of amyloid-beta peptides differentially affect neuronal viability”（β淀粉样蛋白肽的低聚物的和纤维状的种类对神经元生存能力的不同影响）J Biol Chem.2002Aug30;277(35):32046-53.Epub2002Jun10.;LeVine H3rd.“Alzheimer's beta-peptide oligomer formation at physiologic concentrations”（处于生理浓缩的阿尔兹海默 氏β-肽寡聚物的形成）Anal Biochem.2004Dec1;335(1):81-90；Shrestha等，”Amyloid beta peptide adversely affects spine number and motility in hippocampal neurons”（β淀粉样蛋白 肽不利影响海马体神经元的脊数和能动性）Mol Cell Neurosci.2006Nov;33(3):274-82. Epub2006Sep8；Puzzo等，“Amyloid-beta peptide inhibits activation of the nitric oxide/cGMP/cAMP-responsive element-binding protein pathway during hippocampal synaptic plasticity”（β淀粉样蛋白肽抑制在海马体突触可塑期间氮氧化物/cGMP/cAMP-响应元素- 结合蛋白路径的活性）J Neurosci.2005Jul20;25(29):6887-97；Barghorn等，“Globular amyloid beta-peptide oligomer-a homogenous and stable neuropathological protein in Alzheimer’s disease”（球状β淀粉样蛋白肽寡聚物-在阿尔兹海默氏疾病中的同质以及稳定 的神经病理蛋白）J Neurochem.2005Nov;95(3):834-47.Epub2005Aug31；Johansson等， Physiochemical characterization of the Alzheimer’s disease-related peptides A beta1-42Arctic and A beta1-42wt（阿尔兹海默氏疾病相关肽Abeta1-42Arctic和Abeta1-42wt的生理化学 表征）.FEBS J.2006Jun;273(12):2618-30]以及源自于大脑的Abeta寡聚物（参见如，Walsh 等，Naturally secreted oligomers of amyloid beta protein potently inhibit hippocampal long-term potentiation in vivo（自然分泌的β淀粉样蛋白寡聚物强力地抑制体内海马体长期潜能）. Nature(2002).416,535-539；Lesne等，A specific amyloid-beta protein assembly in the brain impairs memory（在脑中特定的β淀粉样蛋白蛋白质组损害记忆）.Nature.2006Mar16; 440(7082):352-7；Shankar等，Amyloid-beta protein dimers isolated directly from Alzheimer's brains impair synaptic plasticity and memory（由阿尔兹海默氏脑直接分离的β淀粉样蛋白蛋 白质二聚物损害突触可塑性和记忆）.Nat Med.2008Aug;14(8):837-42.Epub2008Jun22） 构成阳性对照。寡聚物制备的质量控制由以下组成：Westerns，以确定寡聚物尺寸范围和 相对浓度，以及MTT试验，以证实没有毒性的胞吐加速。在每个基于图像的试验中，通 过用DNA结合染料DAPI（Invitrogen）显影的细胞核形态的量化，来监控毒性。碎裂的 细胞核被认为是晚期细胞凋亡（Majno和Joris Apoptosis,oncosis,and necrosis（细胞凋亡、 肿瘤病和坏死）.An overview of cell death（细胞死亡的综述）.Am J Pathol1995;146:3–16）。 产生异常的肽尺寸范围，或以标准的浓度在神经元上产生显著毒性的肽的批次不被接受。 以Cellomics VTI自动显微镜平台，使用神经元压型算法捕获并分析图像。针对统计分析， 使用具有不等变异的Tukey-Kramer配对比较。
蛋白印迹实施如下：将含有Abeta1-42的样品在非还原蛋白质示踪上样缓冲液（Pierce #1859594）中稀释（1:5）。将30微升（μL）样品上样到十八孔预制4-15%Tris-HCl凝胶 （BIORAD#345-0028）上。电泳使用Tris-甘氨酸缓冲液于125伏特（V）在BIO-RAD标 准预制凝胶体系中进行90分钟。于30V在Tris-甘氨酸/10%甲醇缓冲液中，将凝胶印迹到 0.2μM硝化纤维膜上120分钟。将膜在PBS溶液中煮沸5分钟，并与4℃用TBS/5%奶溶 液封闭过夜。将膜用在TBS/1%奶溶液中稀释到10μg/mL的6E10-HRP（Covance #SIG-39345）于室温探测一小时。将膜用TBS/0.05%吐温-20的溶液冲洗三次，每次40分 钟，并用ECL试剂（BIO-RAD#162-0112）显影5分钟。图像采集在Alpha Innotech FluorChem Q定量成像系统上进行，并用AlphaView Q软件进行分析。
根据结合试验（使用成像处理算法），级分1A显示为部分地（33%）阻断Abeta寡 聚物配体结合到神经元。
根据结合试验（使用成像处理算法），级分2A显示为部分地（35%）阻断Abeta寡 聚物配体结合到神经元。PK研究在Redmond WA的CEREP Inc进行，根据他们的标准程 序：血浆样品使用乙腈沉淀来处理，并通过HPLC-MS或HPLC-MS/MS来分析。记录峰 面积，并且使用各自的校准曲线来确定未知血浆样品中测试化合物的浓度。确定试验的可 报告线性范围，以及定量下限（LLQ）。通过1H NMR（Varian500MHz NMR波谱仪） 分析活性级分，并且使用结合1D和2D1H NMR实验以及13C NMR实验表征纯化的化合 物。使用这些NMR技术结合低分辨质谱以确定分子量，并且结合高分辨质谱（Thermo Finnigan LCQ离子阱）以确定物质的构成，来获得结构证明。
实施例5-药代动力学研究
药代动力学研究根据以下程序进行：血浆样品使用乙腈沉淀来处理，并通过HPLC-MS 或HPLC-MS/MS来分析。记录峰面积，并且使用各自的校准曲线来确定未知血浆样品中 测试化合物的浓度。确定试验的可报告线性范围，以及定量下限（LLQ）。例如，组分1A-1 被确定为当以1mg/Kg静脉内注射时，在大鼠的血浆中具有50分钟的半衰期；组分1A-2 被确定为当以1mg/Kg静脉内注射时，在大鼠的血浆中具有70分钟的半衰期；并且组分 2A-1被确定为当以1mg/Kg静脉内注射时，在大鼠的血浆中具有180分钟的半衰期。然 而，所使用的实验条件未给出组分2A-2的可检测的半生期。
实施例6-Abeta寡聚物形成抑制试验
Abeta42寡聚物形成可以以多孔格式容易地被测定，并且用于确定测试化合物阻断可 溶性高分子量（>20kDa）寡聚物的形成的能力。参见如Harry LeVine III，“基于生物素- 抗生物素蛋白相互作用针对阿尔兹海默氏β肽寡聚物抑制剂的筛选试验”（“Biotin-avidin interaction-based screening assay for Alzheimer’sβ-peptide oligomer inhibitors”，分析生物化 学（Analytical Biochemistry），356(2006)265-272）中描述的实验。
[0229]将100μL在50mM NaPi、150mM NaCl和0.02%(w/v)NaN3（pH7.5）中不同 浓度的测试化合物加入到96孔板的孔中，所述96孔板的孔包含2μL新鲜的HFIP （1,1,1,3,3,3-六氟-2-丙醇）解聚的在DMSO中的2.5μg/ml的bio-Abeta42，给出总浓度50 ng/mL(11nM)的肽和2%(v/v)的DMSO。在室温30分钟后，50μL的小份试样被转移到 NA/SA–HRP（亲和素/二级抗体和链霉抗生素蛋白-辣根过氧化物酶（NeutrAvidin/secondary antibody and streptavidin–Horseradish peroxidase））单点（single-site）试验板。加入100μL 四甲基联苯胺/H2O2底物溶液，并且在室温孵化所述板2-30分钟，孵化时间取决于试验 中bio-Abeta42缩氨酸的浓度。在用100μL的1%(v/v)H2SO4停止反应后，在Biotech Synergy HT板读取器上确定OD450nm。通过形成的bio-Abeta42肽的浓度确定测试化合物 阻断可溶性高分子量（>20kDa）寡聚物的形成的能力。参见同上。
根据所述试验，级分1A没有抑制Abeta寡聚物形成。因此级分1A可能通过直接作 用于神经元受体以阻止寡聚物结合来抑制Abeta寡聚物结合到神经元，或通过引起Abeta 寡聚物拆解来抑制Abeta寡聚物结合到神经元。
实施例7-基于初级神经元的功能筛选试验，以检测小分子Abeta寡聚物阻滞剂
体外生长至少3周的初级大鼠神经元被选为该筛选试验的底物。这些神经元在成熟大 脑中表达神经元的一整套突触蛋白特征，并且呈现活性相关电信号的复杂网络。这样的培 养物中的神经元和神经胶质具有呈现与完整脑神经元回路有优异重合度（registration）的 分子信号网络，并且由于该原因而在超过二十年的时间一直被用作针对学习和记忆的模型 系统（参见，如Kaech S,Banker G.Culturing hippocampal neurons（培养海马体神经元）.Nat Protoc.2006;1(5):2406-15.Epub2007Jan11；也参见Craig AM,Graf ER,Linhoff MW.How to build a central synapse:clues from cell culture（如何建立中心突触：来自细胞培养的线索）. Trends Neurosci.2006Jan;29(1):8-20.Epub2005Dec7.Review）。更复杂的系统，例如急 性或器官型脑切片非常有用，但不适合高通量筛选。无限增殖化或转化神经元细胞系适合 于高通量筛选，但不会复制初级神经元培养物的电生理学状态相关信号传导，并且不太可 能充分模拟在疾病状态的最早表现期间该信号传导中由寡聚物造成的微小变化（参见，如 P,Fleischer W,Rosenbaum C,Otto F,Siebler M.Neuronal network properties of human teratocarcinoma cell line-derived neurons（源自人类畸形恶瘤细胞系的神经元的神经元网络 性质）.Brain Res.2004Aug20;1018(1):18-25）。由于该原因，初级神经元培养物由于它 们用在高通量筛选中的能力以及对活体内所发生事件的保真度，而被选中。
减少的甲瓒是细胞内囊泡中首先可见的（图1A）。在染料的胞吞和还原为不溶性紫 色产物之后，以标记的囊泡填充示例的神经元。（图1A中比例尺=20微米）。体外成 熟海马神经元中，最终的甲瓒胞吐通过Abeta寡聚物而加速（图1B）。覆盖以已通过胞 吐而被挤出的不溶性紫色染料的神经元的示例性显微照片。染料在培养物的含水环境中沉 淀，且在神经元的表面上形成为针形晶体。（图1B）。胞吞速率在Abeta寡聚物的存在 下改变。（图1C）胞吐速率在Abeta寡聚物的存在下改变（图1D）。
由于突触和记忆障碍，以及非广泛细胞死亡，在阿尔兹海默氏疾病的最早期的主导， 测量这些改变的试验可以用来发现寡聚物活性的小分子抑制剂。MTT试验可以用作培养 物中毒性的测量。黄四唑盐被细胞胞吞，并在胞内体途径中被还原为不溶性紫色甲瓒。紫 色甲瓒的水平是培养物中活性代谢细胞数目的反映，并且还原的甲瓒的量被用作培养物中 细胞死亡或代谢毒性的测量。当通过显微镜观察时，紫色甲瓒是在填充细胞的细胞内囊泡 中首先可见的（图1A）。随着时间，囊泡被胞吐，并且由于不溶性甲瓒被暴露于含水介 质环境，甲瓒在质膜的外表面上沉淀为针形晶体（图1B）。细胞通过选择性加速还原的 甲瓒的胞吐速率而响应于Abeta寡聚物的亚致死水平，同时使胞吐速率不受影响，其在体 外成熟初级神经元中可见，并且可通过自动化的显微镜检查和图像处理量化这些形态学的 变化。在追随四唑盐添加到培养物孔的时间中的给定点，经运载体处理的细胞具有图1A 中的那些外观，而经Abeta寡聚物处理的细胞具有图1B中的那些外观。这些环境下，还 原的甲瓒的总量上没有总体改变，仅是在其形态上有变化。该试验对不引起细胞死亡的寡 聚物的低水平敏感。
证据表明，在由膜运输介导的神经元表面受体表达中Abeta寡聚物介导的还原是针对 突触可塑性（LTP）的电生理学测量的寡聚物抑制的基础，并由此是学习和记忆的基础（参 见Kamenetz F,Tomita T,Hsieh H,Seabrook G,Borchelt D,Iwatsubo T,Sisodia S,Malinow R. APP processing and synaptic function（APP处理和突触功能）.Neuron.2003Mar27;37(6): 925-37；以及Hsieh H,Boehm J,Sato C,Iwatsubo T,Tomita T,Sisodia S,Malinow R.AMPAR removal underlies Abeta-induced synaptic depression and dendritic spine loss（在Abeta引导 的突触衰退和树突棘损失之下的AMPER移除）.Neuron.2006Dec7;52(5):831-43）。通 过甲瓒形态学的变化来测量由寡聚物诱导的膜运输速率的改变已被用于细胞系中，来发现 Abeta寡聚物－阻断药物[Maezawa I、Hong HS、Wu HC、Battina SK、Rana S、Iwamoto T、 Radke GA、Pettersson E、Martin GM、Hua DH和Jin LW，A novel tricyclic pyrone compound ameliorates cell death associated with intracellular amyloid-beta oligomeric complexes（新颖的 三环吡喃酮化合物改善与细胞内β淀粉样蛋白寡聚物复合物有关的细胞死亡），J Neurochem.2006Jul;98(1):57-67；Liu Y、Schubert D.，Cytotoxic amyloid peptides inhibit cellular3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide（MTT）reduction by enhancing MTT formazan exocytosis（细胞毒素的淀粉样蛋白肽通过增加MTT甲瓒胞吐抑 制细胞的3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5二苯基四氮唑溴盐（MTT）还原）.J Neurochem.1997Dec; 69(6):2285-93；Liu Y,Dargusch R,Banh C,Miller CA,Schubert D.Detecting bioactive amyloid beta peptide species in Alzheimer’s disease（检测在阿尔兹海默氏疾病中生物活性的 β淀粉样蛋白肽种类）.J Neurochem.2004Nov;91(3):648-56；Liu Y,Schubert D.Treating Alzheimer’s disease by inactivating bioactive amyloid beta peptide（通过抑制生物活性的β淀 粉样蛋白肽的活性治疗阿尔兹海默氏疾病）.Curr Alzheimer Res.2006Apr;3(2):129-35； Rana S,Hong HS,Barrigan L,Jin LW,Hua DH.Syntheses of tricyclic pyrones and pyridinones and protection of Abeta-peptide induced MC65neuronal cell death（三环吡喃酮和吡啶酮的合 成以及Abeta-肽引导的MC65神经元细胞死亡的保护）.Bioorg Med Chem Lett.2009Feb1; 19(3):670-4.Epub2008Dec24；以及Hong HS,Maezawa I,Budamagunta M,Rana S,Shi A, Vassar R,Liu R,Lam KS,Cheng RH,Hua DH,Voss JC,Jin LW.Candidate anti-Abeta fluorene compounds selected from analogs of amyloid imaging agents（选自淀粉样蛋白成像助 剂的类似物的候选抗-Abeta芴化合物）.Neurobiol Aging.2008Nov18.(Epub ahead of print)] 在啮齿动物体内降低Abeta脑水平[Hong HS,Rana S,Barrigan L,Shi A,Zhang Y,Zhou F, Jin LW,Hua DH.Inhibition of Alzheimer's amyloid toxicity with a tricyclic pyrone molecule in vitro and in vivo（体外和体内用三环吡喃酮分子对阿尔兹海默氏淀粉样蛋白毒性的抑制）. J Neurochem.2009Feb;108(4):1097-1108]。
使胞吐试验适用于与体外生长3周的成熟初级神经元培养物。Abeta寡聚物引起填充 以还原的紫色甲瓒的细胞内囊泡（点）的量上，剂量相关的减少（图2A，方块；对应于 图2C中图像的3μM剂量），如通过使用Cellomics VTI自动化的显微镜检查系统的图像 处理所测量的。增加Abeta寡聚物的量最终导致明显毒性。由此，神经活性Abeta寡聚物 的浓度比引起细胞死亡的浓度低得多。该减少可以通过在寡聚物添加之前，添加化学计量 量的抗-Abeta单克隆抗体6E10（IgG）到培养物，而被阻断（图2A，圆形；圆形对应于 图2D中的图像；单独的抗体[倒三角]对神经元没有作用）。测试了已被报道阻断Abeta 寡聚物的作用的若干化合物，包括糖醇鲨肌醇（AZD-103），nAChR拮抗剂六甲溴铵， 以及NMDAR拮抗剂MK-801，并且没有一个为活性（Fenili等，’07、Calabrese等，’06、 LeCor等，‘07）。
用自动液体处理机器人针对化合物配制和试验板冲压，针对在384-孔微量滴定板中的 性能对试验进行优化，惯例达到运载体与经Abeta寡聚物处理的神经元之间统计学上显著 的二重分离（Student’s t-检验，不等变异）。将化合物首先添加到神经元，然后添加寡聚 物。当以此方式配置时，试验能够检测通过寡聚物的破坏、对寡聚物结合到神经元的抑制， 或由寡聚物结合引发的行为的信号转导机制的抵抗，起作用的化合物。
当将化合物自己剂量给药时，如果它们显著阻断膜运输中Abeta介导的改变，而不显 著影响膜运输，则认为化合物为活性的。实施例示于图2B中；CT0109以7μM的EC50 抑制寡聚物在膜运输上的作用。
CT0109是4-(3-(4-(三氟甲基)苄氨基)丁基)-2-甲氧苯酚，CT0109的结构是：
图2A示出由胞吐Abeta42寡聚物处理加速引起的，细胞内甲瓒填充的囊泡（点）的 剂量相关的减少（方块）。寡聚物作用被抗Abeta IgG（圆形和正三角形；圆形指计量量 的IgG，即3μM的Aβ和1.5μM的IgG；正三角形指亚计量IgG，即3μM的Aβ和0.5μM 的IgG）阻断。IgG自身（倒三角）没有影响。图2B示出CT0109，其抑制寡聚物在膜运 输上的作用。图2C示出活体外21DIV海马神经元的代表性显微图像，显示寡聚物影响膜 运输（对应于图2A中数据点3μM）；并且图2D示出由抗-Abeta抗体的阻断（对应于图 2A中的圆形）。数据是3个实验的平均。图2D中的比例尺=20微米。
如图10所示，CT0109和CT0093两者在预防（图10D）和治疗规程（图10E）两者 中均是有效的，其中来自两种结构上有区别的系列（CT0109和CT0093）的有效力的小分 子的递增剂量阻止寡聚物的作用，并且培养物看起来更像运载体处理的培养物（图10A-C 中上半部分的显微照片）。无论所述分子存在于寡聚物加入之前或之后，所述分子同样可 以阻止寡聚物在膜运输上的作用，并且如左下和右下的曲线图分别所示，不管添加顺序如 何，两种候选药物的EC50看上去是相似的。这显示了这些药物及其靶点在存在的障碍的 预防和治疗两者中可能是有效的。
实施例8-恐惧条件化试验
在被称作恐惧条件化的记忆依赖性行为任务的动物模型中测试CT0109和CT0093。 研究程序基于已公开的程序（参见，如Puzzo D,Privitera L,Leznik E,FàM,Staniszewski A, Palmeri A,Arancio O.Picomolar amyloid-beta positively modulates synaptic plasticity and memory in hippocampus（β淀粉样蛋白的物质的量的浓度向性调节海马体中突触可塑性和 记忆）.J Neurosci.2008Dec31;28(53):14537-45.）来设计。情境记忆的形成依赖于内侧颞 叶结构（例如海马体）的完整性。该试验中，训练小鼠记住，具体的显著情境（条件刺激； CS）与厌恶的事件相关联，在该情况为轻微足部电击（非条件刺激，US）。显示良好学 习的动物在被放回到相同情境中时，将展示僵直行为（freezing behavior）的增加。该僵直 在新的情境中不存在。情境中增加的僵直表明动物中强的海马相关性记忆形成。恐惧条件 化中测试的记忆对可溶性Aβ的升高敏感。图3示出，与运载体给予（以“a”标记的柱） 相比，在训练期间给予Abeta寡聚物（以“b”标记的柱）导致当动物在24小时后测试时 的记忆障碍的结果。CT0109和CT0093两者在停止Abeta寡聚物介导的对膜运输的作用方 面有效（图3）。当在Abeta寡聚物给予之前被给予动物时，CT0109和CT0093在2pmol 剂量时阻断寡聚物对记忆的作用（图3，以“c”和“d”标记的柱）。该行为效力证实， 膜运输试验能够预测哪些化合物将在治疗由寡聚物引起的行为性记忆丧失中是有效力的。 针对记忆的恐惧条件模型如本文所述来进行。
图3示出，在情境恐惧条件记忆任务中，Abeta相对于运载体（p<0.05）产生记忆形 成中的显著障碍。图3示出，2pmol剂量的CT0109+Abeta（200nM）和CT0093+Abeta （200nM）完全阻断Abeta对记忆的作用（p<0.05，一元方差分析，有Bonferroni修正的 事后比较）。单独的化合物没有观察到作用（数据未示出）。在任何剂量均未观察到不良 行为改变。
实施例9-CT0093活性立体异构体的表征
来自分泌酶抑制剂的试验的临床数据显示，发挥作用降低总Abeta蛋白水平的药物在 阿尔兹海默氏疾病患者中可能不是临床上有效力的，也许因为Abeta单体可能对于正常认 知是必要的（参见L.A.Hyde，R.A.Del Vecchio等；Merck Res.Labs，凯尼尔沃思，新泽 西；一种新颖的γ-分泌酶抑制剂SCH1375975对后斑块转基因CRND8-APPswe/ind （TgCRND8）小鼠的长期给药显著地降低了Aβ，停滞了淀粉样蛋白斑块进展并且良好被 耐受（Chronic administration of a novelγ-secretase inhibitor SCH1375975to post-plaque transgenic CRND8-APPswe/ind(TgCRND8)mice dramatically reduced Aβ,halted amyloid plaque progression and was well tolerated）；2010年，神经科学文摘（Society for Neuroscience Abstracts），650.16）。阻断单独地病理学物种，即Abeta寡聚物，的作用的药物的发展 可能是更好的治疗目标。
CT0093在体外抑制Abeta1-42寡聚物对突触的结合，并且完全阻断Abeta寡聚物诱 导的膜运输的改变和突触损失。CT0093在体内还完全阻断在严重的阿尔兹海默氏疾病小 鼠模型中的寡聚物诱导的记忆障碍。核磁共振波谱表明原始CT0093母体化合物是四种立 体异构体的混合物。为了确定这些结构，CT0093以克量级经过反相制备型高效液相色谱 分离，并收集到三种纯化的化合物。CT1296（4-(异丁基氨基)-2-甲基-6-(4-甲基环己-1,3- 二烯基)庚-2-醇）和CT1297（4-(异丁基氨基)-2-甲基-6-p-甲苯基庚-2-醇）为98%纯分离物， 分别包含相同分子量的非对映异构体。第三种，CT1298为70%纯度，并且包含化合物的 混合物。CT1296和CT1297代表原始CT0093结构的非常接近的类似物。高纯度非对映异 构体还可以使用固定相柱通过手性层析色谱法来分离。分离的化合物在我们的测量寡聚物 诱导的膜运输障碍的初级试验中被筛选。有效力的化合物在体外（21DIV）阻断寡聚物诱 导的成熟初级神经元的膜运输速率方面的障碍，并产生高速率的抑制。尽管效力稍差（图 4），CT01296具有与母体化合物CT0093相似的EC50。CT1296和CT1297的附加效应可 以解释母体化合物CT0093的高度的效力。CT01297和混合物CT01298两者比母体化合物 CT0093的效能明显要差些。
设计合成路线以达到原始CT0093结构以及作为分离的非对映异构体的推定的 CT01296/CT01297结构两者。
表2CT0093化合物的HPLC和药物动力学参数
寡聚物假设认为，在寡聚物作用被阻断时，抑制寡聚物的作用的化合物应该即立刻改 善突触的紧张性抑制又改善认知功能，并且导致棘状突起的再生长（G.A Krafft和W.L. Klein，ADDLs与造成阿尔兹海默氏疾病的信号传导网络，神经药理学（2010）59:230-42 （G.A Krafft and W.L.Klein.ADDLs and the signaling web that leads to Alzheimer’s disease. Neuropharmacology(2010)59:230-42.））。针对其在阻断寡聚物作用的有效性，我们比较 了在寡聚物加入我们培养物之前或之后加入的化合物活性。结果显示无论在Abeta寡聚物 加入之前加入（预防形式）或之后加入（治疗形式），CT0093同样有效，并且因此在治 疗Abeta诱导的神经元功能中的缺陷将是有效的。
表3CT0093在治疗或预防模式中给药的有效性
表4.化合物的相对活性
1按照由所确定的；2膜运输试验中的相对活性。
在存在多种浓度的CT0093下，用Abeta进行剂量响应实验，导致Abeta EC50的向右 位移，说明CT0093和Abeta之间的竞争的相互作用。竞争曲线的Schild分析给出具有从 单一性上不可区分的斜坡的线性关系以及计算出的抑制常数0.57μM。该亚微摩尔效能 （potency）与我们原始申请中报道的使用Chen-Prusoff关系的数值一致，并且竞争机制支 持这一观点：我们的化合物种类比较有效能的Abeta配体更加有效能，如在人AD脑中发 现的那样。
在初步的筛选试验中，已经证明了CT0093的分离的立体异构体的相对有效性，并且 确定了其在大鼠中的药代动力学特性。CT1296保持母体化合物效能，但效力稍差，而 CT1297和CT1298比母体化合物的效能弱了近两倍。CT1297在血浆中具有比CT1296更 长的半生期。这些化合物逆转Abeta寡聚物对运输的作用的能力支持了我们的治疗目标： 通过修复神经元功能，对阿尔兹海默氏疾病的疾病改善治疗。
实施例10-行为效力
在初步的研究中，针对其逆转障碍的能力，在9个月大的雄性Swe/Ldn小鼠中经由渗 透微型泵法以1和10mg/kg/天测试CT0093。
在第三天的学习中，转基因小鼠（红色）表现显著差于非转基因的用运载体处理的动 物（蓝色）（通过方差分析），但在探针试验中不是这样（图9）。
CT0093的10mg/kg/天的皮下给药（以灰色方块和灰色实线以及实心条示出）达到540 nM的脑浓度（图9）。该浓度显著改善在测试的第二和第四天的转基因的表现，并且趋 向于记忆的探针测试（通过t-检验）中的走向。
在所述研究期间没有观察到不利的行为事件。如同CT0109、CT0093能够改善AD的 转基因模型中的认知表现（cognitive performance），并且逆转已建立的认知障碍。该效力 可以在比任何其他公开的治疗更短暂的治疗时间段看到。CT0109和CT0093两者解救这 些小鼠模型（mouse models）中的Abeta诱导的记忆障碍的能力是朝向可行的临床候选药 物的发展的重要的概念验证里程碑。
实施例11-非对映异构体的混合物的制备
在-78℃用TiCl4（1M，在DCM中，2.00mL，2.0mmol）处理在DCM（4mL）中的 姜黄酮（217mg,1.00mmol）和异丁基胺（150μL,1.50mmol）的溶液。所述混合物在-78 ℃持续搅拌2h。向反应混合物加入NaBH4（200mg）。在30min时间升温所得的混合物 至0℃。用乙酸乙酯稀释反应，并且用饱和NaHCO3洗涤。分离、干燥并浓缩有机相。
通过制备-HPLC纯化残余物以提供标题化合物（140mg，51%）。LC-MS：274(M+1) 1H NMR(300MHz,CDCl3)δ8.45(s,1H)、7.26–6.99(m,4H)、5.13–5.08(m,1H)、3.76–3.71 (m,1/2H)、3.36–3.32(m,1/2H)、2.76–2.37(m,2H)、2.31–2.29(m,2H)、1.95–1.75(m,5H)、 1.60–1.15(m,6H)、0.99–0.93(m,9H)。
实施例12-非对映异构体的分离
在ChiralCel OD-H柱（CO2/乙醇/DEA=95/5/0.1（v/v/v））上分离上述化合物 （290mg）的非对映异构体的混合物以给出两种级分。两种级分均在乙酸乙酯中用1N HCl 处理，以给出相应的盐：AB3494and和AB3495。
非对映异构体1（峰1,62mg）：LC-MS:274(M+1)1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.08 (br s,1H)、7.09(d,J=8.4Hz,2H)、7.05(d,J=7.6Hz,2H)、5.26(d,J=10.4Hz,1H)、3.74(br s,1H)、2.84(br m,1H)、2.56(m,3H)、2.28(s,3H)、2.11-2.07(m,1H)、1.73(s,3H)、1.57(d, J=4.4Hz,3H)、1.17(d,J=6.8Hz,3H)、0.91(d,J=6.8Hz,3H)、0.89(d,J=6.8Hz,3H)。
非对映异构体2（峰2,101mg）LC-MS：274(M+1)1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 9.19-9.17(br m,1H)、7.11(s,4H)、5.30(d，J=10.8Hz，1H)、3.40(br s，1H)、2.78(t，J=5.6 Hz，1H)、2.64-2.48(m，3H)、2.33(s，3H)、1.30(s，3H)、1.19(d，J=6.4Hz，3H)、1.04(d， J=6.4，1H)、0.97(d，J=6.0Hz，3H)。
尽管已参考本发明的某些优选变体对本发明做了相当详细的描述，其他变体也是可能 的。因此，本发明的精神和范围不应限于本文所描述的优选变体的说明。
说明书（包括摘要和附图）中公开的全部特征，以及所公开的任何方法或过程中的全 部步骤可以以任意组合来组合，除了其中这些特征和/或步骤的至少一些互相排斥的组合。 说明书（包括摘要和附图）中所公开的每个特征，均可以由服务于相同、对等或相似的目 的的可替换特征来代替，除非明确地另外说明。由此，除非明确地另外说明，所公开的每 个特征仅是通用系列的对等或相似特征的一个实施例。根据前文的描述，除本文描述的那 些以外，本发明的各种更改对本领域技术人员将是明显的。这种更改也意图落入所附权利 要求书的范围。
本申请中引用的每个参考文件通过引用整体并入本文。
机译： 从姜黄油中分离出的化合物及其使用方法
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