一种垂花蕙兰的组培快繁方法

摘要

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种垂花蕙兰的组培快繁方法。该方法包括如下步骤，（1）垂花蕙兰原球茎的诱导形成：培养基质为40%松树皮+60%培养基，培养基为1/2MS基本培养基；（2）垂花蕙兰原球茎的增殖培养：培养基质为40%松树皮+60%培养基，培养基为1/2MS+6-BA1.0～2.0mg/L+NAA0.3～0.8mg/L+KT0.3～0.8mg/L+50g/L CW；（3）垂花蕙兰原球茎分化和壮苗生根：培养基质为40%松树皮+60%培养基，培养基为1/2MS+6-BA0.5～1.2mg/L+NAA0.1～0.3mg/L+100g/L PJ；（4）垂花蕙兰试管苗的驯化和移栽。本发明建立了一个低廉高效的垂花蕙兰组培快繁体系。

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种垂花蕙兰的组培快繁方 法。

背景技术

兰花的经济价值很高，其中多数种是著名观赏花卉和名贵药用植 物；垂花蕙兰在国内面世后，更显王者气象，连续多年在广州花王评 选中当选为花王。目前国内外除育种研究外，大多数商业化兰花繁殖 均采用组织培养的方法进行。兰花的组织培养自20世纪60年代发展 至今，已得到了长足的发展，建立了较为完善的技术体系，但较高的 培养基成本和较长的组培周期极大地影响了兰花组培苗的利润空间。

树皮是加工木材时产生的有机废弃物，来源广泛，成本较低。目 前国内外一些兰花如大花蕙兰和铁皮石斛等的栽培主要以松树皮为 基质，树皮基质的特点是重量轻、有机质含量高、保水性较好、透气 性强和具有较高的阳离子交换量，树皮还可提供植物生长所需的微量 元素。陈卿然等（2013）报道发酵处理后的松树皮更有利于大花蕙兰 的栽培，因为新鲜的松树皮中有较多的酚类物质和较高的C/N比。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术的不足，提供一种垂花蕙兰的组培 快繁方法，以建立一个低廉高效的垂花蕙兰组培快繁技术体系。

本发明解决所述技术问题的方案是：一种垂花蕙兰的组培快繁方 法，包括如下步骤，

（1）垂花蕙兰原球茎的诱导形成：培养基质为40%松树皮+60% 培养基；其中培养基为1/2MS基本培养基，白糖30g/L，琼脂5～8g/L， pH5.6；培养基质在121℃、1.1kg/cm²下灭菌18min；剖开消毒好的 蒴果，把种子撒到无菌水中，摇匀，然后接种至培养基质上；培养温 度为25±2℃，光照强度为1500～2000Lx，光暗周期比为12h:12h；

（2）垂花蕙兰原球茎的增殖培养：培养基质为40%松树皮+60% 培养基；培养基为1/2MS+6-BA1.0～2.0mg/L+NAA0.3～0.8mg/L+KT 0.3～0.8mg/L+50g/L CW(椰乳)；1/2MS为基本培养基，白糖20g/L， 琼脂5～8g/L，pH5.6；培养基质在121℃、1.1kg/cm²下灭菌18min； 取已诱导出的原球茎，接种于增殖培养基上；培养温度为25±2℃， 光照强度为1500～2000Lx，光暗周期比为12h:12h；

（3）垂花蕙兰原球茎分化和壮苗生根：培养基质为40%松树皮 +60%培养基；培养基为1/2MS+6-BA0.5～1.2mg/L+NAA0.1～0.3 mg/L+100g/L PJ(马铃薯汁)；1/2MS为基本培养基，白糖20g/L，琼 脂5～8g/L，pH5.6；培养基质在121℃、1.1kg/cm²下灭菌18min；将 增殖培养的原球茎接种于分化和壮苗生根培养基上；培养温度为25 ±2℃，光照强度为1500～2000Lx，光暗周期比为12h:12h；

（4）垂花蕙兰试管苗的驯化和移栽：将垂花蕙兰生根试管苗从 培养室移至塑料大棚放置3～5d后，去瓶盖炼苗3～5d，然后从瓶内 取出垂花蕙兰幼苗，用水轻轻洗去培养基，将待栽的垂花蕙兰幼苗根 部用0.1%多菌灵处理10s后，将幼苗移栽入穴盘中的栽培基质内， 覆膜保湿5～7d，其间每天通风透气5～15min两次，视光照强度适当 加盖遮阳网，一周后完全揭除塑料薄膜小拱棚，喷施1000倍液的甲 基托布津，此后进行正常的栽培管理。

作为改进，所述步骤（1）中蒴果的消毒方法为：取未开裂的垂 花蕙兰蒴果，先用70%～75%乙醇处理1～1.5min后，再蘸95%乙醇在 酒精灯火焰上灼烧2～3次。

作为改进，所述步骤（4）中栽培基质由松树皮和珍珠岩按体积 比1：1配制而成。

本发明在垂花蕙兰原球茎的诱导形成、原球茎增殖、原球茎分化 和生根壮苗阶段的培养基中添加了40%松树皮，而现有研究中松树皮 一般只在组培苗的驯化移栽过程中使用；培养基质经高温高压灭菌、 冷凝后，松树皮沉于底部，培养基位于上部，大大节约了培养基的用 量，而且实验发现培养效果优于普通的培养基；原球茎增殖后使用一 次性成苗技术进行原球茎分化和壮苗生根，简化了生产程序，缩短了 成苗时间；驯化移栽阶段利用50%松树皮+50%珍珠岩为基质对垂花蕙 兰组培苗进行假植炼苗，移栽成活率高达98%，建立了低廉高效的垂 花蕙兰组培快繁技术体系。该体系与常规兰花组培方法相比，可缩短 周期时长25%，节约成本35%，适用于工厂化生产。

具体实施方式

实施例1

一种垂花蕙兰的组培快繁方法，包括如下步骤：

（1）垂花蕙兰原球茎的诱导形成：培养基质为40%松树皮+60%培 养基；培养基为1/2MS基本培养基，白糖30g/L，琼脂5～8g/L，pH5.6； 培养基质在121℃、1.1kg/cm2下灭菌18min。取未开裂的垂花蕙兰 蒴果，先用70%～75%乙醇处理1～1.5min后，再蘸95%乙醇在酒精灯 火焰上灼烧2～3次；剖开消毒好的蒴果，把种子撒到无菌水中，摇 匀，再接种至培养基质上；培养温度为25±2℃，光照强度为 1500～2000Lx，光暗周期比为12h:12h。培养40d后，即可诱导形 成绿色的原球茎。

（2）垂花蕙兰原球茎的增殖培养：培养基质为40%松树皮+60% 培养基；培养基为1/2MS+6-BA1.0～2.0mg/L+NAA0.3～0.8mg/L+KT 0.3～0.8mg/L+50g/L CW(椰乳)；1/2MS为基本培养基，白糖20g/L， 琼脂5～8g/L，pH5.6；培养基质在121℃、1.1kg/cm2下灭菌18min。 取已诱导出的原球茎，接种于增殖培养基上培养；培养温度为25± 2℃，光照强度为1500～2000Lx，光暗周期比为12h:12h。40d后， 增殖系数可达12以上。

（3）垂花蕙兰原球茎分化和壮苗生根：培养基质为40%松树皮 +60%培养基；培养基为1/2MS+6-BA0.5～1.2mg/L+NAA0.1～0.3 mg/L+100g/L PJ(马铃薯汁)；1/2MS为基本培养基，白糖20g/L，琼 脂5～8g/L，pH5.6；培养基质在121℃、1.1kg/cm2下灭菌18min。 将增殖培养的原球茎接种于分化和壮苗生根培养基上；培养温度为 25±2℃，光照强度为1500～2000Lx，光暗周期比为12h:12h。60d 后，95%原球茎已分化出芽，芽基部长出根，即可长成完整植株，达 到移栽标准。

（4）垂花蕙兰试管苗的驯化和移栽：将垂花蕙兰生根试管苗从 培养室移至塑料大棚放置3～5d后，去瓶盖炼苗3～5d，然后从瓶内 取出垂花蕙兰幼苗，用水轻轻洗去培养基，将待栽的垂花蕙兰幼苗根 部用0.1%多菌灵处理10s后，将幼苗移栽入穴盘中的栽培基质内， 栽培基质由松树皮和珍珠岩按体积比1：1配制而成，覆膜保湿5～7d， 其间每天通风透气5～15min两次，视光照强度适当加盖遮阳网，一 周后完全揭除塑料薄膜小拱棚，喷施1000倍液的甲基托布津，此后 进行正常的栽培管理。30d后，垂花蕙兰试管苗的移栽成活率达98%。

组培苗是垂花蕙兰规模化栽培的主要种苗来源。本发明通过不断 的探索实验，形成了一套价廉而高效的垂花蕙兰组织培养繁殖技术体 系。通过在离体培养基中使用成本较低的有机废弃物松树皮，克服了 现有植物组培快繁中，由于使用较多的培养基而使组培苗价格居高不 下的问题；发明中使用的一次性成苗技术简化了生产程序，缩短了成 苗时间，提高了生产效率，进一步降低了垂花蕙兰组培苗成本。本发 明在原球茎的诱导形成、原球茎增殖、原球茎分化和生根壮苗的培养 基中使用了松树皮，松树皮经高温高压灭菌后释放的一些有效成分有 利于原球茎的诱导、增殖、分化和试管苗的生根；该方法全过程使用 了松树皮，提高了垂花蕙兰组培苗的适应性，促成了较高的移栽成活 率，也为后期提高垂花蕙兰组培苗的栽培效果和成品花质量奠定了基 础。