一种分析分离6,12-二苯基二苯并b, f1, 5二氮杂环辛四烯光学异构体的方法

摘要

本发明公开了一种用HPLC分析6,12-二苯基二苯并[b,f][1,5]二氮杂环辛四烯光学异构体的方法。本发明的技术特征在于以直链淀粉或纤维素类衍生物为固定相的手性色谱柱，流动相为正己烷、异丙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、液态二氧化碳中的两种或两种以上的混合物，检测波长为220nm～254nm。用该方法可以快速、准确地分析出6,12-二苯基二苯并[b,f][1,5]二氮杂环辛四烯的两种光学异构体。

说明书

技术领域

本发明涉及一种高效液相色谱法，特别涉及一种利用高效液相色谱分析分离6,12-二苯基二苯并[b,f][1,5]二氮杂环辛四烯的两种光学异构体的方法。

背景技术

6,12-二芳基二苯并[b,f][1,5]二氮环辛四烯类化合物具有抗促性腺激素、降血压、降血脂胆固醇和雌情激素等生物和药物活性（D.M.Wakankar,B.D.Hosangadi,Indian J.Chem.1980,19B,703;G.W.Duncan,S.C.Lyster,J.B.Wright,Proc.Soc.Exp.Biol.Med.1965,120,725）。此类化合物的合成方法已很成熟，特别是2-氨基二苯甲酮在P₂O₅脱水作用下无溶剂法合成6,12-二芳基二苯并[b,f][1,5]二氮环辛四烯，产率较高（96%）（T.Chanda,R.K.Verma,M.S.Singh,Chem.Asian J.2012,7,778）。但有关此类化合物的手性问题一直无人问津。

6,12-二苯基二苯并[b,f][1,5]二氮环辛四烯，由于分子结构中八元环不能自由翻转而导致分子产生一对光学异构体：

目前，对于6,12-二苯基二苯并[b,f][1,5]二氮环辛四稀光学异构体的拆分和光学活性尚无人报道。因此，发现并拆分出具有光学纯的6,12-二苯基二苯并[b,f][1,5]二氮环辛四烯光学异构体对于其在生物和制药领域的应用研究具有重要的现实意义。此外，对于6,12-二苯基二苯并[b,f][1,5]二氮环辛四稀这类不含手性碳的对映异构体的分析，也一直是化学工作者的兴趣和重要任务之一。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是：现有技术中，6,12-二苯基二苯并[b,f][1,5]二氮环辛四稀的光学异构体的分析分离尚无人报道。

为解决这一技术问题，本发明提供的技术方案是：

本发明提供了一种利用高效液相色谱方法，分析6,12-二苯基二苯并[b,f][1,5]二氮环辛四稀光学异构体的方法，

其中，采用纤维素类或直链淀粉类手性柱，并且流动相为正己烷、异丙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、液态二氧化碳中的两种或两种以上的混合物，正己烷和异丙醇的体积比例为80:20～98:2；正己烷和乙酸乙酯的体积比例为80:20～95:5；液态二氧化碳、异丙醇和二氯甲烷的体积比例为80:15:5～90:8:2，

具体地说，手性柱选自Chiralcel IE(Daicel,250mm×4.6mm,5μm)手性柱或ChiralcelAD-H(Daicel,250mm×4.6mm,5μm)手性柱，

此时，具体操作步骤为：

（1）取6,12-二苯基二苯并[b,f][1,5]二氮环辛四烯样品，用异丙醇溶解，得到1mL含0.1mg～0.5mg6,12-二苯基二苯并[b,f][1,5]二氮环辛四烯的样品溶液；

（2）设置流动相流速为0.4～5.0mL/min，检测波长为254nm，色谱柱柱温箱温度为25℃；

（3）取步骤（1）的样品溶液2～20μL注入液相色谱仪，记录色谱图。

另外，手性柱还可以选用Chiralcel IA(SFC)(Daicel,150mm×4.6mm,5μm)超临界流体色谱用手性柱，

此时，具体操作步骤为：

（1）取6,12-二苯基二苯并[b,f][1,5]二氮环辛四烯样品，用异丙醇/二氯甲烷=80/20(v/v)溶解，得到1mL含0.1mg～0.5mg6,12-二苯基二苯并[b,f][1,5]二氮环辛四烯的样品溶液；

（2）设置流动相流速为0.4～5.0mL/min，检测波长为220nm，色谱柱柱温箱温度为25℃；

（3）取步骤（1）的样品溶液2～20μL注入超临界液相色谱仪，记录色谱图。

本发明的有益效果是：本发明提供了一种用仪器分析分离6,12-二苯基二苯并[b,f][1,5]二氮环辛四烯的光学异构体的方法，采用了不同类型的手性柱，对该类化合物的光学异构体进行手性分析，具有操作简便、快速、准确的优点。发现并拆分出具有光学纯的6,12-二苯基二苯并[b,f][1,5]二氮环辛四烯光学异构体，可实现该类化合物的光学异构体在制药上的光学质量可控，对于其在生物和制药领域的应用研究具有重要的现实意义。

附图说明

附图1实施例1，正己烷:异丙醇=95:5，流速：1.0mL/min，AD-H手性柱上的HPLC图；

附图2实施例2，正己烷:异丙醇=98:2，流速：1.0mL/min，AD-H手性柱上的HPLC图；

附图3实施例3，正己烷:异丙醇=90:10，流速：1.0mL/min，AD-H手性柱上的HPLC图；

附图4实施例4，正己烷:异丙醇=80:20，流速：1.0mL/min，AD-H手性柱上的HPLC图；

附图5实施例5，正己烷:异丙醇=80:20，流速：0.5mL/min，AD-H手性柱上的HPLC图；

附图6实施例6，正己烷:乙酸乙酯=95:5，流速：1.0mL/min，IE手性柱上的HPLC图；

附图7实施例7，液态二氧化碳:（异丙醇/二氯甲烷)=85:15(80/20)，流速：1.0mL/min，IA(SFC)手性柱上的HPLC图。

具体实施方式

实施例1

仪器与条件

高效液相色谱仪：岛津LC-20A；

色谱柱：Chiralcel AD-H（Daicel，250mm×4.6mm，5μm）硅胶表面涂覆有纤维素-三（3,5-二甲苯基氨基甲酸酯）手性色谱柱；

流动相体积比：正己烷/异丙醇=95:5；

检测波长：254nm；

流速：1.0mL/min；

进样体积：10μL；

柱温：25℃。

实验步骤：取6,12-二苯基二苯并[b,f][1,5]二氮环辛四烯辛样品5mg置于10mL容量瓶中，加异丙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，用滤膜过滤，作为样品溶液。取样品溶液按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图。

结果见附图1，可以看出该条件下，两种6,12-二苯基二苯并[b,f][1,5]二氮环辛四烯异构体完全达到基线分离，出峰时间相差2.363分钟。

实施例2

仪器与条件

高效液相色谱仪：岛津LC-20A；

色谱柱：Chiralcel AD-H（Daicel，250mm×4.6mm，5μm）硅胶表面涂覆有纤维素-三（3,5-二甲苯基氨基甲酸酯）手性色谱柱；

流动相体积比：正己烷/异丙醇=98:2；

检测波长：254nm；

流速：1.0mL/min；

进样体积：10μL；

柱温：25℃。

实验步骤：

取6,12-二苯基二苯并[b,f][1,5]二氮环辛四烯辛样品5mg置于10mL容量瓶中，加异丙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，用滤膜过滤，作为样品溶液。取样品溶液按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图。

结果见附图2，可以看出该条件下，两种6,12-二苯基二苯并[b,f][1,5]二氮环辛四烯异构体完全达到基线分离，出峰时间相差2.924分钟。

实施例3

仪器与条件

高效液相色谱仪：岛津LC-20A；

色谱柱：Chiralcel AD-H（Daicel，250mm×4.6mm，5μm）硅胶表面涂覆有纤维素-三（3,5-二甲苯基氨基甲酸酯）手性色谱柱；

流动相体积比：正己烷/异丙醇=90:10；

检测波长：254nm；

流速：1.0mL/min；

进样体积：10μL；

柱温：25℃。

实验步骤：

取6,12-二苯基二苯并[b,f][1,5]二氮环辛四烯辛样品5mg置于10mL容量瓶中，加异丙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，用滤膜过滤，作为样品溶液。取样品溶液按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图。

结果见附图3，可以看出该条件下，两种6,12-二苯基二苯并[b,f][1,5]二氮环辛四烯异构体完全达到基线分离，出峰时间相差1.549分钟。

实施例4

仪器与条件

高效液相色谱仪：岛津LC-20A；

色谱柱：Chiralcel AD-H（Daicel，250mm×4.6mm，5μm）硅胶表面涂覆有纤维素-三（3,5-二甲苯基氨基甲酸酯）手性色谱柱；

流动相体积比：正己烷/异丙醇=80:20；

检测波长：254nm；

流速：1.0mL/min；

进样体积：10μL；

柱温：25℃。

实验步骤：

取6,12-二苯基二苯并[b,f][1,5]二氮环辛四烯辛样品5mg置于10mL容量瓶中，加异丙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，用滤膜过滤，作为样品溶液。取样品溶液按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图。

结果见附图4，可以看出该条件下，两种6,12-二苯基二苯并[b,f][1,5]二氮环辛四烯异构体完全达到基线分离，出峰时间相差1.208分钟。

实施例5

仪器与条件

高效液相色谱仪：岛津LC-20A；

色谱柱：Chiralcel AD-H（Daicel，250mm×4.6mm，5μm）硅胶表面涂覆有纤维素-三（3,5-二甲苯基氨基甲酸酯）手性色谱柱；

流动相体积比：正己烷/异丙醇=80:20；

检测波长：254nm；

流速：0.5mL/min；

进样体积：10μL；

柱温：25℃。

实验步骤：

取6,12-二苯基二苯并[b,f][1,5]二氮环辛四烯辛样品5mg置于10mL容量瓶中，加异丙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，用滤膜过滤，作为样品溶液。取样品溶液按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图。

结果见附图5，可以看出该条件下，两种6,12-二苯基二苯并[b,f][1,5]二氮环辛四烯异构体完全达到基线分离，出峰时间相差2.451分钟。

实施例6

仪器与条件

高效液相色谱仪：Agilent1200；

色谱柱：Chiralcel IE（Daicel，250mm×4.6mm，5μm）硅胶表面键合有直链淀粉-三（3,5-二甲苯基氨基甲酸酯）手性色谱柱；

流动相体积比：正己烷/乙酸乙酯=95:5；

检测波长：254nm；

流速：1.0mL/min；

进样体积：10μL；

柱温：25℃。

实验步骤：

取6,12-二苯基二苯并[b,f][1,5]二氮环辛四烯样品5mg置于10mL容量瓶中，加异丙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，用滤膜过滤，作为样品溶液。取样品溶液按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图。

结果见附图6，可以看出该条件下，两种6,12-二苯基二苯并[b,f][1,5]二氮环辛四烯异构体恰好达到基线分离，出峰时间相差1.047分钟。

实施例7

仪器与条件

高效液相色谱仪：JASCO超临界液相色谱仪；

色谱柱：Chiralcel IA(SFC)（Daicel，150mm×4.6mm，5μm）硅胶表面共价键合有直链淀粉-三(3,5-二甲苯基氨基甲酸酯)超临界流体色谱用手性柱；

流动相体积比：液态二氧化碳/(异丙醇/二氯甲烷)=85/15(80/20)；

检测波长：220nm；

流速：2.0mL/min；

进样体积：5μL；

柱温：25℃。

实验步骤：

取6,12-二苯基二苯并[b,f][1,5]二氮环辛四烯样品5mg置于10mL容量瓶中，加异丙醇/二氯甲烷=80/20(v/v)溶解并稀释至刻度，摇匀，用滤膜过滤，作为样品溶液。取样品溶液按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图。

结果见附图7，可以看出该条件下，两种6,12-二苯基二苯并[b,f][1,5]二氮环辛四烯异构体恰好达到基线分离，出峰时间相差0.547分钟。