一种联合他汀类降胆固醇药与噻嗪类抗高血压药物的复方抗癌药物

摘要

本发明提供一种复方抗癌药物，包括他汀类药物和噻嗪类药物。他汀类药物是在临床上广泛应用的一种安全和有效控制高胆固醇血脂的药物，该类药能抑制3-羟基-3-甲基辅酶A（HMG-CoA）还原酶。氢氯噻嗪为噻嗪类利尿药、抗高血压药。本发明表明，低剂量阿托伐他汀联合氢氯噻嗪使用能够比单独使用高剂量更有效地抑制前列腺癌细胞、胰腺癌细胞以及结肠癌细胞的生长。

说明书

技术领域

本发明涉及一种联合抗癌药物，更具体地，涉及一种联合他汀类降胆固醇药与噻嗪类抗高血压药物的复方抗癌药物。 

背景技术

癌症是严重威胁人类健康的恶性疾病，是人类死亡的主要“杀手”之一。过去30年，中国癌症死亡率增加了80%，占全球癌症死亡人数的1/4，且发病呈年轻化趋势。2010年世界卫生组织2号警告说，如果人们不认真采取措施预防癌症，到2030年全球每年的癌症死亡人数将可能在现有基础上翻番，达1700万。 

    前列腺癌(Prostate cancer)是发生于男性前列腺组织中的恶性肿瘤，发病随年龄而增长，其发病率具有明显的地理和种族差异。在欧美等发达国家和地区，它是男性最常见的恶性肿瘤，其死亡率居各种癌症的第二位；在亚洲，其发病率低于西方国家，在我国的发病率以前较低，但随着人口老龄化，近年来呈迅速上升趋势。病情进展恶化至晚期的前列腺癌病人由于化疗效果差毒性大往往无法救治。研发抑制前列腺癌的低毒有效治疗药物，已经成为降低死亡率的一项重大挑战。 

    胰腺癌(Pancreatic cancer)的发病率在全世界范围内有增加趋势。在我国，近20年来其发病率增长约6倍。胰腺癌早期缺乏典型症状，到了晚期病人常有腹痛、黄疸、消瘦、食欲减退、腹水等症状。因病人多已失去根治性手术的机会，化疗效果差，故临床生存期极短。现代医学治疗胰腺癌主要采用手术方法。然而，胰腺癌很难早期诊断，加之疾病进展迅速，疗效极差，非手术疗法如放射疗法、化学抗癌药物疗法对胰腺癌细胞也不敏感，免疫疗法、内分泌疗法疗效并不肯定，故现代医学并无治疗胰腺癌的有效手段。 

    结肠癌(Colon cancer)是西欧、北美等发达国家最常见的恶性肿瘤，也是我国九大常见恶性肿瘤之一。在过去30多年的时间里，包括我国在内的多数国家或地区结肠癌发病率呈上升趋势。在我国，因结肠癌死亡者，男性居恶性肿瘤死亡的第5位，女性居第6位。从流行病学的观点看，结肠癌的发病与社会环境、生活方式(尤其是饮食习惯、缺乏体力活动)、遗传因素有关。年龄、结直肠息肉史、溃疡性结肠炎及胆囊切除史也是结肠癌的高危因素。但总体而言，结肠癌的病因似不十分清楚。在结肠癌的治疗上，早期病人手术效果较好，已经有转移病灶的病人化疗毒性大，效果差。 

    研究表明，不同药效的药物联合使用可以达到优化治疗一些癌症的作用。在现代医学尤其是肿瘤的治疗中，联合用药已经成为一种趋势。采用单药治疗时，虽然增加剂量可以提高疗效，但随之而来的是毒副作用的增加。而相当一部分抗肿瘤药都有可能危及病人生命的毒副作用。本发明旨在提供一种将他汀类降胆固醇药阿托伐他汀(Atorvastatin)和一种噻嗪类抗高血压药物氢氯噻嗪(Hydrochlorothiazide)联合复方低剂量用药在抗前列腺癌、胰腺癌及结肠癌中的应用。 

发明内容

他汀类药物是在临床上广泛应用的一种安全和有效控制高胆固醇血脂的药物，该类药能抑制3-羟基-3-甲基辅酶A（HMG-CoA）还原酶。阿托伐他汀（atorvastatin）是一种人工合成的他汀类药物，它是最常用的降胆固醇的处方药，全世界每年有100多万病人服用阿托伐他汀。流行病学和实验室研究表明，高胆固醇可能在前列腺癌的发生和发展中起到巨大的促进作用。大规模的前瞻性研究发现，服用他汀类药物使发生晚期前列腺癌的风险减少了25-75％。单独应用他汀类药在剂量较低时并不能有效的降低前列腺癌病人的PSA（前列腺特异抗原）水平。增加他汀类药物剂量能提高疗效，但同时也可能会引起副作用。解决这个问题的一个有效策略是使用低剂量的他汀类药和其他有效的药物相结合。氢氯噻嗪为噻嗪类利尿药、抗高血压药。主要适用于心原性水肿、肝原性水肿和肾性水肿：如肾病综合征、急性肾小球肾炎、慢性肾功能衰竭以及肾上腺皮质激素与雌激素过多引起的水肿；高血压；尿崩症。我们的研究表明，低剂量阿托伐他汀联合氢氯噻嗪使用能够比单独使用高剂量更有效地抑制前列腺癌细胞、胰腺癌细胞以及结肠癌细胞的生长。 

本发明的一个目的是针对目前药物高剂量单独使用治疗癌症时的毒副作用随之增大的缺陷，独创性地将以上两种药物通过一定的剂量配伍，提供一种联合低剂量使用达到优化效果的治疗方法，以便开发出新型的抗癌复方药物。 

    本发明提供一种复方抗癌药物，包括他汀类药物和噻嗪类药物。 

    所述的他汀类药物和噻嗪类药物的重量比为1：1。 

    所述的他汀类药物为阿托伐他汀，所述的噻嗪类药物为氢氯噻嗪。 

    所述的抗癌为抗前列腺癌、胰腺癌或结肠癌。 

    根据需求，再提供一种他汀类药物和噻嗪类药物在抗癌药物中的联合应用。 

    所述的他汀类药物和噻嗪类药物的重量比为1：1。 

    所述的他汀类药物为阿托伐他汀，所述的噻嗪类药物为氢氯噻嗪。 

    所述的抗癌为抗前列腺癌、胰腺癌或结肠癌。 

与现有技术相比，本发明的特色在于将他汀类降胆固醇药和噻嗪类抗高血压药联合低剂量使用，达到优化抑制前列腺癌、胰腺癌及结肠癌发展的作用。 

本发明发现，在联合使用将他汀类降胆固醇药和噻嗪类抗高血压药联合使用，药效是原来两类药物单独使用抗癌时的数倍。 

具体实施方式

    本发明上述目的通过以下技术方案予以实现： 

    分别将相应的前列腺癌细胞、胰腺癌细胞及结肠癌细胞按照不同接种密度接种于96孔板或者35mm培养皿，培养24h后给药单独或联合处理相应的时间，然后用不同的技术手段进行相应检测，并进行结果分析，得出结论。

实施例1：给药阿托伐他丁和氢氯噻嗪对前列腺癌VCaP-N细胞NF-κB的作用 

    将前列腺癌VCaP/N细胞以0.01x106 cells/ml的密度接种，培养24h。然后用阿托伐他汀和氢氯噻嗪处理24h。检测NF-κB蛋白活性，用荧光素酶报告基因的方法测定。把荧光素酶基因导入PC-3细胞，形成稳定的克隆，然后单独及联合给药，作用24h；然后用荧光素酶检测试剂盒来检测NF-kB荧光素酶的活性，间接地反映NF-kB的水平。

作用效果如下： 

处理荧光素酶活性(% 对照组)对照组100阿托伐他汀组 (10μM)89.2氢氯噻嗪组 (10μM)90.3阿托伐他汀 (10μM) + 氢氯噻嗪 (10μM)组66.5

   由表格可以看出，单独给药阿托伐他汀（10μM）和氢氯噻嗪（10μM）组的荧光素酶活性（%对照组）分别是89.2%和90.3%，而联合给药组（阿托伐他汀 (10μM) + 氢氯噻嗪 (10μM)组）是66.5%，有明显的荧光素酶活性的降低。

实施例2：给药阿托伐他丁和氢氯噻嗪对前列腺癌PC-3细胞的作用 

    将PC-3细胞以0.02x106 cells/ml的密度接种于35mm培养皿，培养24h。然后用10 μM浓度的阿托伐他汀和氢氯噻嗪处理96h。用台盼蓝排斥实验测活细胞及死细胞数。适当培养时间后，收集细胞，用台盼蓝染色，在倒置显微镜下计数蓝染及不染色的细胞，用公式“活细胞率（%）=活细胞总数/（活细胞总数+死细胞总数）×100%”计算细胞存活率。

作用效果如下： 

处理活细胞数 (1x104)死细胞率（%）生长抑制率（%）对照组37.22.9-氢氯噻嗪组(10μM)32.87.511.8阿托伐他汀组(10μM)35.34.05.1氢氯噻嗪 (10μM) + 阿托伐他汀 (10μM)组24.322.634.7

   由表格可以看出，单独给药阿托伐他汀（10μM）和氢氯噻嗪（10μM）组的PC-3细胞生长抑制率（%对照组）分别是11.8%和5.7%，而联合给药组（阿托伐他汀 (10μM) + 氢氯噻嗪 (10μM)组）是34.7%，有明显的PC-3细胞生长抑制率。

实施例3：给药阿托伐他丁和氢氯噻嗪对前列腺癌CWR细胞的作用 

    将CWR细胞以0.02x106 cells/ml的密度接种于35mm培养皿，培养24h。然后用10 μM浓度的氢氯噻嗪和阿托伐他汀处理96h。用台盼蓝排斥实验测活细胞及死细胞数。适当培养时间后，收集细胞，用台盼蓝染色，在倒置显微镜下计数蓝染及不染色的细胞，用公式“活细胞率（%）=活细胞总数/（活细胞总数+死细胞总数）×100%”计算细胞存活率。

作用效果如下： 

   由表格可以看出，单独给药阿托伐他汀（10μM）和氢氯噻嗪（10μM）组的PC-3细胞生长抑制率（%对照组）分别是33.1%和28.1%，而联合给药组（阿托伐他汀 (10 μM) + 氢氯噻嗪 (10 μM)组）是80.7%，明显比单独用药组有更好的CWR细胞生长抑制率。

实施例4：给药阿托伐他丁和氢氯噻嗪对胰腺癌Panc-1细胞的作用 

    将Panc-1细胞以0.02x106 cells/ml的密度接种于35mm培养皿，培养24小时。然后用10 μM浓度的氢氯噻嗪和阿托伐他汀处理96小时。用台盼蓝排斥实验测定活细胞及死细胞数。处理结束后，收集细胞，用台盼蓝染色，在倒置显微镜下计数台盼蓝染及不染色的细胞。

作用效果如下： 

   由表格可以看出，单独给药阿托伐他汀（10μM）和氢氯噻嗪（10μM）组的Panc-1细胞生长抑制率（%对照组）分别是27.5%和17.3%，而联合给药组（阿托伐他汀 (10 μM) + 氢氯噻嗪 (10 μM)组）是62.3%，明显比单独用药组有更好的细胞生长抑制率。单独给药阿托伐他汀（10μM）组死细胞有12.1%，单独给药氢氯噻嗪（10μM）组死细胞有7.7%，联合给药组（阿托伐他汀 (10 μM) + 氢氯噻嗪 (10 μM)组）死细胞有29.3%，明显比单独用药组高。

实施例5：给药阿托伐他丁和氢氯噻嗪对结肠癌HT-29细胞的作用 

    将HT-29细胞以0.02x106 cells/ml的密度接种于35mm培养皿，培养24小时。然后用10 μM浓度的氢氯噻嗪和阿托伐他汀处理96小时。用台盼蓝排斥实验测定活细胞及死细胞数。处理结束后，收集细胞，用台盼蓝染色，在倒置显微镜下计数台盼蓝染及不染色的细胞。

作用效果如下： 

   由表格可以看出，单独给药阿托伐他汀（10μM）和氢氯噻嗪（10μM）组的HT-29细胞生长抑制率（%对照组）分别是20.8%和15.1%，而联合给药组（阿托伐他汀 (10 μM) + 氢氯噻嗪 (10 μM)组）是58.0%，明显比单独用药组有更好的细胞生长抑制率。单独给药阿托伐他汀（10μM）组死细胞有11.7%，单独给药氢氯噻嗪（10μM）组死细胞有9.1%，联合给药组（阿托伐他汀 (10 μM) + 氢氯噻嗪 (10 μM)组）死细胞有31.5%，明显比单独用药组高。