藏药岩生鸢尾抗氧化提取物及其制备方法和用途

摘要

本发明涉及含有抗氧化作用的岩生鸢尾有效提取物及其制备方法，所述有效提取物选自从岩生鸢尾醇提物中萃取得到的石油醚提取物、氯仿提取物、乙酸乙酯提取物、正丁醇提取物和水提取物之一或其其组合，研究证明，其中石油醚提取物、氯仿提取物和正丁醇提取物具有明显的体外清除羟基自由基能力；乙酸乙酯提取物和水提取物具有明显体外清除DPPH（二苯代苦味肼）脂性自由基的能力，因此，所述有效提取物可用于制备抗氧化药物和化妆品。

说明书

技术领域

本发明涉及一种藏药岩生鸢尾抗氧化提取物及其制备方法；本发明进一步涉及所述提取物的药物组合物；本发明还涉及所述提取物在抗氧化药物或化妆品中的应用；属于中药领域。

背景技术

1956年，英国人Harman提出“自由基学说”，该学说认为自由基攻击生命大分子造成组织损伤，是引起机体衰老的根本原因，也是诱发肿瘤恶性疾病的重大原因。随着人们对自由基研究的深入，这一学说也为越来越多的人接受。自由基是指“任何包含一个未成对电子的原子或原子团”，对人体健康影响极大。在生理情况下，氧处于较低水平，其产生和清除处于动态平衡，但在某些病理情况下，自由基过剩，导致机体损伤。自由基除本身对生物大分子（蛋白质、DNA）有损伤作用外，还会造成多不饱和脂肪酸的脂质过氧化( LPO) ，而LPO 反应的终产物是丙二醛(MDA)，从而使蛋白质、核酸、脑磷脂发生交联并丧失其活性。大量研究表明，与老化相关的疾病和基因的突变，如癌症、心血管疾病、风湿性关节炎、糖尿病、神经性疾病、衰老等都同自由基导致的损伤相关,清除了体内多余的自由基就能预防衰老和疾病。因此寻求利用人体易于吸收的、能清除体内过量自由基的外源抗氧化剂成为一个新的研究热点。然而，随着合成抗氧化剂日益突出的潜在毒性和致癌作用被人们排斥，从植物中寻找天然、高效、低毒的抗氧化剂就成为了目前抗氧化剂发展的一个必然趋势，同时也为现代医学和保健行业的指明了方向。

鸢尾属(Iirs)是鸢尾科的一个大属，全世界约有300余种植物，该属植物被广泛作为传统的民间药物，用来治疗多种疾病，例如，癌症、炎症、细菌和病毒感染。据报道，已从鸢尾属植物中分离得到具有抗肿瘤、抗氧化、抗结核、坑疟原虫等活性的化合物。其中鸢尾（Iris tectorum Maxim）、喜碱鸢尾（Iris halophila Pall）、香根鸢尾（Irish pallida）、射干（Belamcanda chinensis (L.) DC）均有抗氧化活性报道，特别是香根鸢尾根部提取物被用于某些化妆品中。岩生鸢尾（Iris uniflora Pall），藏名则合纪泽玛，是鸢尾科鸢尾属多年生草本植物，产于西藏、青海、内蒙等地，常以种子入药，能杀虫，解毒，藏医中用于驱虫；外敷撒疮口，可去腐生肌，治烧伤；其花能明目，根可治雀斑和癣，全草烧灰存性可乌发。其化学成分和活性并无报道，更未见到岩生鸢尾及其有效部位抗氧化作用研究与应用方面的报道。我们对其总提物及不同溶剂极性部位进行了抗氧化活性的初步研究，活性实验表明：其总提物和某些极性部位具有良好抗氧化活性。

发明内容

本发明的目的之一是，提供一种岩生鸢尾的抗氧化提取物及其制备方法。本发明的目的之二是，提供一种以所述提取物为有效成分的药物组合物。本发明的目的之三是，提供所述提取物在制备抗氧化及其相关药物和化妆品中的应用。

本发明比较了不同溶剂的萃取物的抗氧化活性，确定了具有抗氧化作用的提取物及其制备方法。

本发明所述岩生鸢尾提取物选自从岩生鸢尾醇提物中萃取得到的石油醚提取物（YS-1）、氯仿提取物（YS-2）、乙酸乙酯提取物（YS-3）、正丁醇提取物（YS-4）和水提取物（YS-5）之一或其组合; 优选从岩生鸢尾醇提物中萃取得到的石油醚提取物（YS-1）、氯仿提取物（YS-2）或其组合;或者优选从岩生鸢尾醇提物中萃取得到的乙酸乙酯提取物、水提取物或其组合;或者优选从岩生鸢尾醇提物中萃取得到的正丁醇提取物。

本发明的提取物可以经过提取、浓缩、系列萃取得到，其制备方法包括以下步骤：

（1）取岩生鸢尾全草或地下部分粗粉， 用乙醇浸泡，超声波助溶提取，过滤，滤渣重复上述提取，过滤，合并提取液;

（2）将提取液减压浓缩得到浓缩液，再将浓缩液与水混合，得到稀释后的浓缩液;

（3）用不同极性的溶剂石油醚、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇梯度萃取，每种溶剂重复萃取，合并相同有机相，减压浓缩得到各溶剂的提取物。

所述方法优选包括以下步骤: (1)取岩生鸢尾全草或地下部分粗粉， 用30倍质量的乙醇浸泡24 h，超声波助溶提取1 h，过滤，滤渣重复上述提取过程2次，过滤，合并三次提取液，其中所用乙醇优选60-90%乙醇;(2)将提取液减压浓缩至相对密度为1.10-1.24 mg/mL(50℃)，得到浓缩液，再将浓缩液与水按体积比1：1混合，得到稀释后的浓缩液;(3)用与稀释后浓缩液等体积的不同极性溶剂石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇梯度萃取，每种溶剂分别重复萃取2次萃取2次，合并相同有机相，减压浓缩得到各溶剂的提取物。

本发明还提供以所述方法制备的各溶剂提取物的药物组合物。所述药物组合物是以本发明的提取物为有效成分，与药学上可接受的载体所组成，并以合适的药用制剂形式存在，这些制剂可以是片剂(优选糖衣片剂、薄膜衣片剂、肠溶衣片剂和缓释片剂)、胶囊剂(优选硬胶囊剂、软胶囊剂或缓释胶囊剂)、口服液、合剂、口含剂、颗粒剂、冲剂、丸剂、散剂、膏剂、丹剂、混悬剂、溶液剂、注射剂、粉针剂、冻干粉针剂、栓剂、软膏剂、硬膏剂、霜剂、喷雾剂、滴丸、滴丸剂、贴剂等。

本发明进一步提供了各种提取物在制备治疗和或预防氧化药物和化妆品中的应用。为此进行的抗氧化相关实验以清除DPPH自由基、羟基自由基为活性指标。实验结果表明，乙酸乙酯提取物和水提取物具有明显体外清除DPPH脂性自由基的能力；石油醚提取物和氯仿提取物具有较好清除羟基自由基，具有抗氧化作用，可用于制备抗氧化药物和化妆品。

具体实施方案：

实施例1：

各提取物的制备方法：

1）总提物提取

取岩生鸢尾全草粗粉20 g， 用600 ml 90%乙醇浸泡24 h，超声波助溶提取1 h，过滤，滤渣重复上述提取过程2次，过滤，合并三次提取液。

2）浓缩

将提取液减压回收乙醇得浓缩液（相对密度为1.12g/mL, 50℃），再将浓缩液与水按体积比1：1混合，得到稀释后的浓缩液( 100 ml)。

3）梯度萃取

依次用石油醚(100 ml/次×3次)、氯仿(100 ml/次×3次)、乙酸乙酯(100 ml/次×3次)、正丁醇(100 ml/次×3次)萃取稀释后的浓缩液，合并相同有机相，减压浓缩，得到石油醚提取物（YS-1, 0.35 g, 提取率: 1.75%）、氯仿提取物（YS-2，0.62 g, 提取率: 3.1%）、乙酸乙酯提取物（YS-3, 0.23 g, 提取率：1.15%）、正丁醇提取物（YS-4，0.14 g， 提取率：0.7%）和水提取物（YS-5，0.67 g， 提取率：3.35%）。

实施例2：

各提取物的制备方法：

1）总提物提取

取岩生鸢尾全草粗粉20 g， 用600 ml 80%乙醇浸泡24 h，超声波助溶提取1 h，过滤，滤渣重复上述提取过程2次，过滤，合并三次提取液。

2）浓缩

将提取液减压回收乙醇得浓缩液（相对密度为1.16g/ml, 50℃），再将浓缩液与水按体积比1：1混合，得到稀释后的浓缩液( 80 ml)。

3）梯度萃取

依次用石油醚(80 ml/次×3次)、氯仿(80 ml/次×3次)、乙酸乙酯(80 ml/次×3次)、正丁醇(80 ml/次×3次)萃取稀释后的浓缩液，合并相同有机相，减压浓缩，得到石油醚提取物（YS-1, 0.21 g, 提取率: 1.05%）、氯仿提取物（YS-2，0.95 g, 提取率: 4.75%）、乙酸乙酯提取物（YS-3, 0.33 g, 提取率：1.65%）、正丁醇提取物（YS-4，0.14 g， 提取率：2.8%）和水提取物（YS-5，0.29 g， 提取率：1.45%）。

实施例3：

清除DPPH自由基活性实验：

采用实施例1中所制备各极性部位进行活性实验。

抗氧化活性以清除DPPH自由基能力大小表示。根据预实验确定的实验条件，测定岩生鸢尾不同样品清除脂性自由基DPPH的活性。取不同浓度样品溶液2.0 mL，加入2.0 mL 1.52×10^-4 mmol/L的DPPH无水乙醇溶液充分混匀，室温避光静置30 min 后，以溶剂为空白对照，517 nm处测吸光度A₁；以同体积溶剂代替样品溶液做阴性对照，测定吸光度A₂；以同体积无水乙醇代替DPPH溶液做空白组，测定吸光度A₃。以VC为对照，每组做3个重复，求其平均值。按下式计算清除率：

样品对DPPH·的清除率(%)=[1-(A₁-A₃)/A₂] ×100%

实施例4：

清除羟基自由基活性试验：

采用实施例1中所制备各极性部位进行活性实验。

抗氧化活性以清除羟基自由基能力大小表示。根据预实验确定的实验条件，测定岩生鸢尾不同样品清除羟基自由基的活性。将1.5 mL 1.8 mol/L 水杨酸溶液与2.0 mL 1.8 mol/L FeSO₄ 溶液于试管中混匀后，加入1 mL 不同浓度样品溶液，然后加入0.1 mL 0.03% H₂O₂，摇匀，于37 ℃保温30 min，510 nm 处测得样品组吸光度A_i；同时将样品组中H₂O₂换成0.1 mL蒸馏水，测得样品参照组吸光度A_j；将样品组中样品换成1.0 mL溶剂，测得空白组吸光度A₀。以VC为对照，每组做3个重复，求其平均值。按下式计算清除率：

·OH清除率(%) = [A₀－(A_i－A_j)] /A₀×100%

表1 岩生鸢尾各部位体外清除DPPH自由基活性实验 

注：IC₅₀±s，n=3

表2 岩生鸢尾各部位体外清除羟基自由基活性实验 

结果表明，采用本发明工艺制备得到的石油醚提取物（YS-1）、氯仿提取物（YS-2）、乙酸乙酯提取物（YS-3）、正丁醇提取物（YS-4）和水提取物（YS-5）具有良好抗氧化活性，其中石油醚提取物、氯仿提取物具有良好清除羟基自由基能力，抗氧化力分别约为VC的5/6和3/4; 乙酸乙酯提取物和水提取物具有良好清除DPPH自由基能力,抗氧化力分别为VC的1/7和1/11；而正丁醇部位清除羟基自由基能力在60-1250 μg/mL范围内均维持在50%左右，在浓度低于250 μg/mL时均强于VC。