一种皮内注射用布氏菌活疫苗冻干保护剂

摘要

本发明公开了一种无动物源性明胶成分的疫苗冻干保护剂，以灭菌注射用水为溶剂，每升冻干保护剂中含有乳糖10-100g、谷氨酸钠5-20g和硫脲5-20g，用于皮内注射用布氏菌活疫苗的冻干保护。

说明书

技术领域

本发明涉及一种不含明胶的疫苗冻干保护剂，用于皮内注射用布氏菌活疫苗的冻干 保护，属于疫苗生产技术领域。

背景技术

为了便于活菌疫苗的运输和储存，通常将其制成冻干制剂。为了确保活菌疫苗在冻 干过程以及在运输和储存过程中的活菌率，现有技术在制备活菌疫苗的过程中一般会使 用冻干保护剂。目前国内布氏菌疫苗均为皮上划痕用冻干活疫苗，进行接种时操作步骤 多，且划痕常常深浅不一，导致免疫效果很难控制。为了解决这一问题，人们试图制备 用于皮内注射的布氏菌活疫苗。已知的用于制备皮上划痕用布氏菌活疫苗的冻干保护剂 中含有明胶、蔗糖、谷氨酸钠和硫脲，由于含有动物源性的明胶成分，部分皮上划痕用 布氏菌活疫苗的接种者会因体内产生抗明胶的IgE抗体而表现出过敏反应，另外，虽然 使用了冻干保护剂，在一定程度上提高了皮上划痕用布氏菌活疫苗在冻干过程以及在运 输和储存过程中的活菌率，但是现有的皮上划痕用布氏菌活疫苗的活菌率仍然较低，一 般来说在冻干后很难超过45%，并且随着运输和储存时间的延长，活菌率还会进一步降 低，这导致疫苗的稳定性较差，进一步导致疫苗的效力较低。

发明内容

本发明提供了一种不含明胶的皮内注射用布氏菌活疫苗冻干保护剂，解决了动物源 性明胶成分可能导致的疫苗过敏问题。特别是，本发明的冻干保护剂出人意料地能够使 皮内注射用布氏菌活疫苗在冻干过程中以及在运输和储存过程中保持高的活菌率，使疫 苗具有良好的稳定性，从而具有较高的效力。

本发明的皮内注射用布氏菌活疫苗冻干保护剂中不含明胶，其以灭菌注射用水为溶 剂，在每升冻干保护剂中含有：乳糖10-100g、谷氨酸钠5-20g和硫脲5-20g，优选 含有：乳糖约50g、谷氨酸钠约10g和硫脲约9g。在优选的实施方案中，每升冻 干保护剂中进一步含有蔗糖10-100g。在更优选的实施方案中，每升冻干保护剂中 含有：乳糖约25g、谷氨酸钠约10g、硫脲约9g和蔗糖约25g。

在优选的实施方案中，本发明的皮内注射用布氏菌活疫苗冻干保护剂由灭菌注射用 水、乳糖、谷氨酸钠和硫脲组成，在每升冻干保护剂中各组分的含量为：乳糖10-100g、 谷氨酸钠5-20g、硫脲5-20g，优选含量为：乳糖约50g、谷氨酸钠约10g、硫脲约 9g。在更优选的实施方案中，冻干保护剂由灭菌注射用水、乳糖、谷氨酸钠、硫脲和蔗 糖组成，在每升冻干保护剂中各组分的含量为：乳糖10-100g、谷氨酸钠5-20g、硫脲 5-20g、蔗糖10-100g，优选含量为：乳糖约25g、谷氨酸钠约10g、硫脲约9g、 蔗糖约25g。

本发明的冻干保护剂pH值在7.2-7.6范围内，可以用氢氧化钠溶液调节冻干保护剂 的pH值使之在7.2-7.6范围内。

本发明的冻干保护剂可以通过包括如下步骤的方法制备得到：称取各组分并溶解于 适量灭菌注射用水中，定容并调节pH值在7.2-7.6范围内，高压灭菌或过滤除菌，即得。 本发明的冻干保护剂的保存条件为2-8℃。

本发明的冻干保护剂用于制备皮内注射用布氏菌活疫苗，包括如下步骤：收获时用 冻干保护剂洗下菌苔或刮取菌苔于冻干保护剂内，得原液；用冻干保护剂将原液稀释至 所需浓度，例如，每1ml含菌5×10⁸，得半成品；分装，例如，每安瓿含0.5ml（5次人 用剂量），冻干，得成品。

本发明还涉及皮内注射用布氏菌活疫苗，其通过对由布氏菌和本发明的冻干保护剂 组成的组合物冻干得到。本发明的皮内注射用布氏菌活疫苗优选是人用的。

本发明的冻干保护剂中由于不含有动物源性的明胶成分，减少了接种者对布氏菌活 疫苗的过敏反应的发生，不仅如此，本发明的冻干保护剂还能使皮内注射用布氏菌活疫 苗在冻干过程以及在运输和储存过程中均保持高的活菌率。在冻干过程中，使用现有皮 上划痕用布氏菌活疫苗冻干保护剂制备的皮内注射用布氏菌活疫苗活菌减少率为 21.4%，疫苗的活菌率为59.4%，而使用本发明的冻干保护剂制备的皮内注射用布氏菌 活疫苗活菌减少率均低于10%，在优选的实施方案中活菌减少率低至5%。并且，在2-8℃ 放置1、2和3个月以及在37℃放置3和28天的情况下，使用本发明的冻干保护剂制备 的皮内注射用布氏菌活疫苗的活菌数均明显高于使用现有皮上划痕用布氏菌活疫苗冻干 保护剂制备的皮内注射用布氏菌活疫苗，由此可见，本发明取得了意想不到的积极效果。 因此，本发明的冻干保护剂不仅赋予了皮内注射用布氏菌活疫苗更好的安全性，还使疫 苗具有良好的稳定性，从而具有较高的效力，而且，制备本发明的冻干保护剂的各原料 价格低廉，使得工业化生产的成本低。

具体实施方式

实施例1

称取以下物质：乳糖10g、谷氨酸钠20g、硫脲20g；将上述物质溶解于适量灭菌 注射用水，定容至1L并用氢氧化钠溶液调节pH值至7.2；高压灭菌，即得。

实施例2

称取以下物质：乳糖50g、谷氨酸钠10g、硫脲9g；将上述物质溶解于适量灭菌注 射用水，定容至1L并用氢氧化钠溶液调节pH值至7.4；高压灭菌，即得。

实施例3

称取以下物质：乳糖100g、谷氨酸钠5g、硫脲5g；将上述物质溶解于适量灭菌注 射用水，定容至1L并用氢氧化钠溶液调节pH值至7.5；过滤除菌，即得。

实施例4

称取以下物质：乳糖100g、谷氨酸钠20g、硫脲20g、蔗糖10g；将上述物质溶解 于适量灭菌注射用水，定容至1L并用氢氧化钠溶液调节pH值至7.3；高压灭菌，即得。

实施例5

称取以下物质：乳糖10g、谷氨酸钠5g、硫脲5g、蔗糖100g；将上述物质溶解于 适量灭菌注射用水，定容至1L并用氢氧化钠溶液调节pH值至7.5；高压灭菌，即得。

实施例6

称取以下物质：乳糖25g、谷氨酸钠10g、硫脲9g、蔗糖25g；将上述物质溶解于 适量灭菌注射用水，定容至1L并用氢氧化钠溶液调节pH值至7.4；高压灭菌，即得。

实施例7

称取以下物质：乳糖75g、谷氨酸钠17.5g、硫脲7.5g、蔗糖50g；将上述物质溶 解于适量灭菌注射用水，定容至1L并用氢氧化钠溶液调节pH值至7.2；高压灭菌，即 得。

实施例8

称取以下物质：乳糖50g、谷氨酸钠7.5g、硫脲17.5g、蔗糖75g；将上述物质溶 解于适量灭菌注射用水，定容至1L并用氢氧化钠溶液调节pH值至7.6；过滤除菌，即 得。

实施例9（对照实施例）

称取以下物质：明胶10g、蔗糖50g、谷氨酸钠10g、硫脲9g，将上述物质溶解于 适量灭菌注射用水，定容至1L并用氢氧化钠溶液调节pH值至7.4；高压灭菌，即得。

实施例10

以肝琼脂为培养基，生产布氏菌，分别刮取菌苔于实施例1-9制备的冻干保护剂内， 得原液1-9；使用实施例1-9制备的冻干保护剂分别将原液1-9稀释至每1ml含菌5×108， 得半成品1-9；分装，每安瓿含0.5ml（5次人用剂量），冻干，得成品。

分别对上述疫苗进行冻干前的活菌数测定，冻干后的水分、活菌数、2-8℃稳定性和 37℃稳定性测定。结果如下：

（1）、疫苗冻干后的水分测定

按照2010年版《中华人民共和国药典》三部ⅦD提供的方法，分别对上述冻干后 的疫苗的部分样品进行水分测定，结果见下表：

上述结果表明，利用本发明的冻干保护剂（实施例1-8）制备的皮内注射用布氏菌活 疫苗在冻干后水分均小于3.0%，符合《中华人民共和国药典》关于冻干疫苗水分应不高 于3.0%的要求。

（2）、疫苗冻干前及冻干后的活菌数测定

分别对上述疫苗冻干前及冻干后的部分样品进行活菌数测定，结果见下表：

注：活菌减少率=（冻干前活菌数-冻干后活菌数）/冻干前活菌数

上述结果表明，利用本发明的冻干保护剂（实施例1-8）制备的皮内注射用布氏菌活 疫苗在冻干过程中活菌减少率要明显低于使用对照实施例（实施例9）制备的疫苗。

（3）、疫苗冻干后在2-8℃的稳定性测定

将上述冻干后的疫苗的部分样品放置在2-8℃，并分别于放置后的1、2、3个月进行 活菌数测定，结果见下表：

上述结果表明，利用本发明的冻干保护剂（实施例1-8）制备的皮内注射用布氏菌活 疫苗冻干后在2-8℃条件下分别放置1、2和3个月，活菌数均明显高于使用对照实施例 （实施例9）制备的疫苗。

（4）、疫苗冻干后在37℃的稳定性测定

将上述冻干后的疫苗的部分样品放置在37℃，并分别于3天和28天后进行活菌数 测定，结果见下表：

上述结果表明，利用本发明的冻干保护剂（实施例1-8）制备的皮内注射用布氏菌活 疫苗冻干后在37℃条件下分别放置3和28天，活菌数要明显高于使用对照实施例（实 施例9）制备的疫苗。

综合上述数据可以看出，本发明的不含明胶的皮内注射用布氏菌活疫苗冻干保护剂 与目前使用的含有明胶的皮上划痕用布氏菌活疫苗冻干保护剂相比，无论是在皮内注射 用布氏菌活疫苗的冻干过程中，还是在2-8℃条件下或者在37℃条件下，由前者制备的 疫苗的活菌数都明显高于后者，这表明，本发明的冻干保护剂与现有技术相比，明显改 善了皮内注射用布氏菌活疫苗的稳定性，从而提高了疫苗的效力。同时，由于本发明的 冻干保护剂中不含明胶，还进一步提高了疫苗的安全性。