5-(3’,5’-二甲氧基苯甲撑基)-2-硫代-咪唑-4-酮在制备治疗脑血管疾病的药物中的应用

摘要

本发明公开了5-(3’,5’-二甲氧基苯甲撑基)-2-硫代-咪唑-4-酮在制备治疗脑血管疾病的药物中的应用。本发明的相关研究表明，该化合物具有显著的脑神经保护作用，明显减少局灶性脑缺血大鼠脑梗塞体积及显著改善神经症状；并发现IV

说明书

技术领域

本发明涉及药物领域，具体涉及5-(3’，5’-二甲氧基苯甲撑基)-2-硫代-咪唑-4-酮在制备治疗哺乳动物脑血管疾病的药物中的应用。

背景技术

脑中风是一组以脑组织缺血及出血性损伤症状为主要临床表现的疾病，又称脑卒中或脑血管意外。该病发病急，有极高的致残率和较高的死亡率，是当今世界上危害人类健康的最主要的疾病之一。脑中风主要分为出血性脑中风(脑出血或蛛网膜下腔出血)和缺血性脑中风(缺血性脑损伤，包括脑梗塞、脑血栓形成)二大类，其中以缺血性脑中风最为常见。

目前临床上对缺血性脑中风的治疗主要采用药物治疗，包括溶栓、扩血管和抗血小板聚集等。上述治疗缺血性脑中风药物的共同特点是：针对性强、作用靶点明确，但疗效单一，只能提供部分的保护作用，临床疗效较小，且有不同程度的毒副作用。如，溶栓药物很难通过血脑屏障进入受损的脑组织而发挥效用，因而疗效不肯定，且有引起再灌注损伤及出血的副作用；扩血管药物可使正常部位血管扩张，造成病变区的血液流向正常脑组织，产生所谓“盗血”现象。因此，深入研究缺血性脑中风的病理生理学机制，寻找抗缺血性脑中风药物作用的新靶点，以此研发治疗缺血性脑中风的新药是一件亟待探索的工作。

溶酶体破裂及其水解酶释放到细胞浆的量影响细胞死亡的命运：溶酶体不完全破裂引起凋亡，而爆发性破裂导致细胞坏死。溶酶体酶由许多不同种类的蛋白酶组成，其中具代表性的一类溶酶体酶是cathepsins，其中神经元中富含cathepsin B，L 和D。研究表明：cathepsins B参与脑缺血性神经元死亡，cathepsin B在大脑中动脉阻塞2小时，再灌注2小时内，其表达和激活都增加，侧脑室注射cathepsin B抑制剂stefin A，能有效的降低大鼠脑梗死体积。因此，cathepsin B可能成为防治缺血性脑损伤药物的潜在治疗靶点。

所以，以cathepsin B为治疗靶点，研究与开发活性强、毒副作用小的新型抗缺血性脑中风药物具有重要的现实意义。

发明内容

本发明的发明目的是提供一种化合物的新用途，以解决现有脑血管疾病治疗药物存在的上述缺陷。

为达到上述发明目的，本发明采用的技术方案是：一种化合物在制备治疗脑血管疾病的药物中的应用，所述化合物为5-(3’，5’-二甲氧基苯甲撑基)-2-硫代-咪唑-4-酮，它的结构式为：

。

该化合物以下称为化合物IV₄。

在公开文献“郑丽玲； 敖桂珍； 李振卿. 3,5-二甲氧基苯乙烯环酮类化合物的合成及表征.化学研究与应用, 2007, 19（9）：1051-1055”中，制备获得了该化合物，但是没有任何关于药理活性的报道。

药理实验显示，化合物IV₄具有显著的脑神经保护作用，能够明显减少局灶性脑缺血大鼠脑梗塞体积及显著改善其神经症状；同时，IV₄可抑制缺血缺氧诱导的神经细胞系HT₂₂细胞cathepsin B的激活。因此，IV₄可用于制备治疗脑血管疾病的药物。

优选地，所述脑血管疾病是缺血性脑损伤。

所述缺血性脑损伤是脑中风、脑血栓形成、脑栓塞、脑梗塞、短暂性脑缺血发作或腔隙性脑梗塞、脑动脉硬化或者糖尿病脑血管并发症。

本发明所述化合物可以单独或与一种以上可接受的载体组合剂制成制剂给药。

由于上述技术方案运用，本发明与现有技术相比具有下列优点：

本发明提供了一种化合物IV₄的新用途，该化合物具有显著的脑神经保护作用，能明显减少局灶性脑缺血大鼠脑梗塞体积及显著改善神经症状，其神经保护作用与抑制cathepsin B的激活有关。此化合物可用于制备预防或治疗缺血性脑损伤、脑血栓、脑栓塞、脑梗塞、脑卒中、腔隙性脑梗塞、短暂性脑缺血发作、脑动脉硬化、糖尿病脑血管并发症等病症的药物。

附图说明

图1是实施例1中单用化合物IV₄对HT₂₂ 细胞乳酸脱氢酶（LDH）漏出率的影响图；

图2是实施例1中化合物IV₄抑制缺糖缺氧（OGD）诱导的HT₂₂ LDH的漏出率图；

图3是实施例2中化合物IV₄减少脑缺血大鼠的神经症状评分图；

图4是实施例2中化合物IV₄改善脑缺血大鼠的抓力图；

图5是实施例2中化合物IV₄减少大鼠的脑梗塞体积图；

图6是实施例3中化合物IV₄抑制缺糖缺氧诱导的HT₂₂细胞中激活的cathepsin B表达的增加图。

具体实施方式

下面结合附图及实施例对本发明作进一步描述：

实施例1：

化合物 对体外培养的神经细胞系HT₂₂细胞缺糖缺氧损伤的保护作用。该化合物在下文中被称为IV₄。

神经细胞系HT₂₂细胞培养24小时，分为非缺糖缺氧对照组、缺糖缺氧（OGD）组、非缺糖缺氧(non-OGD)+IV₄ 0.1, 1, 10, 50, 100μM组及OGD+IV₄ 0.1, 1, 10, 50或100μM组。缺糖缺氧12小时后，采用乳酸脱氢酶（LDH）法检测细胞损伤程度。按公式LDH漏出率=A培养液/（A培养液+ A细胞匀浆液）×100%。

附图1为单用化合物IV₄ 0.1, 1, 10, 50, 100μM对HT₂₂ 细胞LDH漏出率的影响图，mean ± SD，n=6。

图1表明：与对照组比，单用IV₄ 0.1, 1, 10, 50, 100μM对LDH漏出率无明显影响，说明以上剂量的IV₄对HT₂₂细胞无毒性作用。

附图2为化合物IV₄抑制OGD诱导的HT₂₂ LDH漏出率图，mean ± SD，n=6；与对照组(non-OGD组)比较，## p <0.01; 与（缺糖缺氧）OGD组比较，*p <0.05 ，**p <0.01。

图2表明：与对照组比，OGD组LDH漏出率显著增加，而IV₄  1, 10, 50μM可明显抑制OGD诱导的HT₂₂LDH漏出率增加，说明IV₄对体外培养的神经细胞系HT₂₂细胞缺糖缺氧损伤具有保护作用。

实施例2：化合物IV₄对大鼠永久性局灶性缺血性脑损伤的保护作用。

雄性SD大鼠，随机分为对照组（假手术组）、模型组、IV₄高、中及低剂量组（10mg/kg^-1、5mg/kg^-1和1mg/kg^-1），每组10只。采用线栓法制作大鼠永久性大脑中动脉闭塞(MCAO)模型。于缺血后3小时静脉注射IV₄，以不同浓度等容积给药。缺血24 h后采用5分评分法。评分越高，神经功能缺陷越明显。抓力法进行神经功能的测定，以TTC染色法观察IV₄对脑梗死体积的影响。

附图3为化合物IV₄减少脑缺血大鼠的神经症状评分图，mean ± SD，n=10；与模型组比较，*p <0.05。

附图4为化合物IV₄改善脑缺血大鼠的抓力图，mean ± SD，n=10；与对照组比较^##p <0.01；与模型组比较，*p<0.05。

附图5为化合物IV₄减少大鼠的脑梗塞体积图，mean ± SD，n=10；与模型组比较，*p<0.05。

图3和图4表明：与假手术相比，缺血模型组大鼠表现出明显的神经运动功能障碍。缺血后3小时给予IV₄，IV₄对大鼠神经功能缺陷均有明显的改善作用，肌力明显增加，与模型组相比差异有显著性（P<0.05)；图5表明：与模型组相比，IV₄亦能显著减少大鼠的脑梗塞体积。以上结果提示IV₄对大鼠永久性局灶性脑缺血损伤具有保护作用。

实施例3：神经细胞系HT₂₂细胞培养24小时，分为非缺糖缺氧对照组(non-OGD组)、缺糖缺氧（OGD）组、非缺糖缺氧IV₄ 0.1, 1, 10, 50, 100μM组及OGD+IV₄ 0.1, 1, 10, 50或100μM组。缺糖缺氧6小时后，采用Western Blotting法检测cathepsin B的表达。

附图6为缺糖缺氧诱导的神经细胞系HT₂₂细胞中cathepsin B的表达图。图6A为代表性的Western Blotting图; 图6B为Western Blotting统计图; mean±SD，n=3；与对照组比较^##p <0.01；与模型组比较，**p<0.01。

图6表明，与非缺糖缺氧组比较，缺糖缺氧6 h显著诱导HT₂₂细胞活性cathepsin B表达的增加；而与缺糖缺氧组比较，IV₄可明显抑制OGD诱导的HT₂₂细胞活性cathepsin B表达的增加，说明IV₄可抑制cathepsin B的激活。

从以上结果可推测：式IV₄的化合物对脑缺血损伤具有一定的保护作用，可以用于这一疾病的预防和治疗，IV₄的化合物对脑缺血损伤的保护作用与抑制cathepsin B的激活有关。

实施例4：

5-(3’，5’-二甲氧基苯甲撑基)-2-硫代-咪唑-4-酮（IV₄）的制备

甘氨酸(2.1g，27.5mmol)、硫氰酸铵（1.9g，25.0mmol）、乙酸酐14.4mL和冰醋酸1.6mL在100℃油浴中搅拌40min，冷却，倾入150mL水中，有黄色固体析出，水洗，乙醇重结晶，得淡黄色片状晶体1-乙酰硫代海因, 收率71.4%，mp 175～177℃。 

将3，5-二甲氧基苯甲醛 (0.83g, 5mmol)，1-乙酰硫代海因(0.79g, 5mmol)，熔融的醋酸钠(1.44g, 17.5mmol)和7mL冰醋酸回流搅拌10 h，冷却至室温后，加入5mL水，抽滤，水洗，DMF和水重结晶得棕黄色晶体，收率91.6%，mp：254~255℃。

IR (KBr, cm^-1): 3268(NH), 2995(CH₃), 1725(C=O), 1649, 1596, 1495; HR-MS(FAB): Calcd. for C₁₂H₁₁SNO₄: 264.0569, Found: 264.0382; ¹HNMR(400MHz, DMSO-d₆),δ(ppm): 3.78(s, 6H, CH₃), 6.54(s, 1H, ArH), 6.88(s, 2H, ArH), 7.97(s, 1H, =CH)。