新疆药桑组培快繁培养基

摘要

一套新疆药桑组培快繁培养基，其组分及其含量如为：萌发培养基：MS4.33g/L+6-BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L，蔗糖30g/L，琼脂7g/L，pH5.8；增殖培养基：MS4.33g/L+6-BA1.0mg/L,蔗糖30g/L，琼脂7g/L，pH5.8；延伸培养基：MS4.33g/L+ZT4.5umol/L，蔗糖30g/L，琼脂7g/L，pH5.8；生根培养基：WPM2.30g/L+NAA0.2mg/L+IBA0.2mg/L+活性炭0.4g/L，蔗糖20g/L，琼脂6g/L，pH6.0。所述培养基配制简便，增殖效率高，平均每株分化侧芽2.3株，4个月可由冬芽得到移栽苗，移栽后成活率高，达75%以上。

说明书

技术领域

    本发明涉及植物组织培养技术领域，具体涉及一套新疆药桑组培快繁培养基。

背景技术

新疆药桑在植物分类学上属桑科,桑属,黑桑种(Morus nigra Linn.),16世纪从伊朗西部引入我国,主要栽培于新疆南部的和田、喀什、阿克苏等广大地区，是重要的药用果桑种质资源。新疆药桑为落叶乔木，树高达3-7m或更高，树冠较大。发芽期为4月中下旬，开叶期为5月上旬；桑果成熟期在6月中下旬至8月中下旬，果实脱落期在八月下旬，果实成熟后呈紫黑色或紫红色，酸甜可口，出汁率较高。桑果从成熟到自然脱落时间长达30天以上。新疆药桑为喜光树种，耐干旱、瘠薄，较耐盐碱，抗风、抗寒性差，不耐修剪。新疆药桑对土壤适应性强，在pH值4.5-7.5土壤、含盐量0.2%以下的轻盐碱能正常生长，病虫害少。

新疆药桑的桑椹不仅是营养丰富的果实，也是维吾尔族的民间药材，维吾尔族人在扁桃腺炎、咽喉肿痛时，习惯服用药桑椹来消炎止痛，因此新疆药桑作为独特而珍稀的药食兼用桑树种质资源，自古以来就备受维吾尔民族推崇。现代研究表明新疆药桑椹果汁中的还原糖含量高于一般桑果汁，营养价值高，能增加人体能量，补充体液，对血糖过低、心肌炎有补助治疗作用；新疆药桑果汁的维生素C含量丰富，能增强人体的抗病能力、防治呼吸道和消化不良病症、有抗衰老的功效；利用新疆药桑果汁中丰富的氨基酸，可以研制复方药剂，治疗因患肝硬化、脂肪肝、痢疾等病引起的营养不良症。新疆药桑椹治疗咽炎效果好，无毒副作用，使用方便，患者易于接受，是值得推广使用治疗急慢性咽炎的“珍贵食品”。新疆药桑椹“既是食品又是药品”，在食品和药品上的应用前景极为广泛。

由于二十二倍体新疆药桑结实性差，种子不易萌发，目前主要采用嫁接的方法繁殖。但新疆药桑与用作砧木的二倍体桑树间亲和性差，嫁接后不易存活。目前新疆药桑集中连片大规模栽培很少，主要以零星方式分布于我国南疆地区农牧民的房前屋后、水渠边、县乡道路或乡村道路边。据不完全统计，全疆药桑栽培面积仅约100 hm²。

植物组织培养是实现工厂化、规模化育苗的一门技术，也是珍稀种质资源保存的常用方法。植物组织培养应用于桑树取得了一系列的成果，包括白桑、印度桑在内的许多品种都实现了快速繁殖或再生。然而，目前尚未见关于新疆药桑组织培养成功快速繁殖的研究报道。因此，利用组织培养技术实现新疆药桑的大规模繁殖显得尤为必要。

发明内容

本发明的目的是提供一套新疆药桑组培快繁培养基，以实现新疆药桑的工厂化育苗。该培养基的组分及其含量如下：

萌发培养基：MS 4.33g/L+6-BA 2.0mg/L+NAA 0.2mg/L，蔗糖30g/L，琼脂7g/L，pH 5.8；

增殖培养基：MS 4.33g/L+6-BA 1.0mg/L,蔗糖30g/L，琼脂7g/L，pH 5.8；

延伸培养基：MS 4.33g/L+ZT 4.5 umol/L，蔗糖30g/L，琼脂7g/L，pH 5.8；

生根培养基：WPM 2.30g/L+NAA 0.2mg/L+IBA 0.2mg/L+活性炭0.4g/L，蔗糖20g/L，琼脂6g/L，pH 6.0。

本发明所述的一套新疆药桑组培快繁培养基的制备方法如下：

    1.激素母液的配制：称取6-苄基腺嘌呤6-BA、萘乙酸NAA 各50 mg，分别用少量1.0 mol·L^-1 NaOH溶解，再分别加水定容至50 mL，得6-BA和NAA母液，浓度均为1.0 mg/mL，4℃保存；称取吲哚丁酸IBA 50 mg，先用少量体积比浓度为95%的乙醇溶解，再加水定容至50 mL，得IBA母液，浓度为1.0 mg/L，4℃保存；称取玉米素ZT 39.5 mg，先用2 mL体积比浓度为95%的乙醇溶解，再加水定容至20 mL，得ZT母液，浓度为9 umol/L，过滤膜后分装，-20℃保存。 

2．萌发培养基的配制：称取MS粉4.33 g，蔗糖30 g，先用少量蒸馏水溶解，然后加入6-BA母液2 mL、NAA母液0.2 mL，再加水定容至1000mL，1.0 mol·L^-1 NaOH调pH至5.8，加入7 g琼脂，121 ℃,0.15 kpa下灭菌15 min，灭菌后分装备用。

3.增殖培养基的配制：称取MS粉4.33 g，蔗糖30 g，先用少量蒸馏水溶解，然后加入6-BA母液1 mL，再加水定容至1000 mL，1.0 mol·L^-1 NaOH调pH至5.8，加入7 g琼脂，121 ℃,0.15 kpa下灭菌15 min，灭菌后分装备用。

4.延伸培养基的配制：称取MS粉4.33 g，蔗糖30 g，蒸馏水定容至1000 mL，1.0 mol·L^-1 NaOH调pH至5.8，加入7 g琼脂，121 ℃,0.15 kpa下灭菌15 min，灭菌后加入玉米素ZT母液0.5 mL，分装备用。

5.生根培养基的配制：称取木本植物培养基WPM粉2.30 g，蔗糖20 g，用少量蒸馏水溶解后，加入NAA、IBA母液各0.2 mL，再加水定容至1000 mL，1.0 mol·L^-1 NaOH调pH至6.0，加入6 g琼脂，0.4g活性炭，121 ℃,0.15 kpa下灭菌15 min，灭菌后分装备用。

本发明所述培养基用于新疆药桑的快繁方法如下：

将灭菌后的新疆药桑冬芽外植体剥去表面鳞片，接种至配制好的萌发培养基上2-3周，待冬芽萌发后，转至增殖培养基上培养30天，株高2.5-4.0cm，切去幼苗底部愈伤团并转至延伸培养基上培养30天，苗高5-8cm后切取单株转至生根培养基上培养，10天左右长出新根，待主根数大于4，根长不小于5cm后，移至室外炼苗。

初代培养方法及炼苗过程将在下面的实例中详细阐述。

附图说明

图1为新疆药桑冬芽在萌发培养基上诱导出幼苗。

图2为新疆药桑幼苗在增殖培养基上继代培养。

图3为新疆药桑幼苗于延伸培养基上快速抽长。

图4为新疆药桑在生根培养基上萌发大量新根。

图5为新疆药桑的水培炼苗。

图6为新疆药桑移栽入土。

本发明的优点是：

1.培养基配制简便。

2.增殖效率高，平均每株分化侧芽2.3株（侧芽<0.5cm的不统计），4个月可由冬芽得到移栽苗。

3.移栽后成活率高，达75%以上。

具体实施方式：下列实施例中所涉及百分比浓度均为质量百分比浓度

实施例1：

10月取新疆药桑一年生带冬芽枝条（20-25cm），切取健康、饱满冬芽，剥去芽基部及外被鳞片，清洗芽体表面后流水冲洗30-60min，然后置于超净工作台上，75%酒精消毒30s，无菌水冲洗3次，再用0.1% HgCl₂溶液灭菌10min,无菌水冲洗5次，于接种盘上剥去表面鳞片使其露出绿色芽体，接种于萌发培养基上，置24℃±2℃生长，光照强度30μEm^-2s^-1下培养2-3周（图1），光照时间为14小时/天。2-3周后将萌发的幼芽切下，置于增殖培养基上继代培养，培养条件同初代，15天后侧芽大量萌发，25-30天后苗高2.5-4.0cm（图2）。切下幼苗丛基部愈伤团，单株转至延伸培养基上培养30天，苗高达5-8cm，植株长势良好，叶色浓郁。切下幼苗基部愈伤团单株转至生根培养基上培养，10天后萌发新根，30天后苗基部产生大量新根（图4）。 

新根数大于4条，根长大于5cm的新疆药桑组培苗移出培养室，揭盖彻底洗净培养瓶及根部培养基，加水浸没根部于培养箱中水培4-6天（图5），移栽入混合土（营养土：蛭石：珍珠岩质量比为6:1:1），移至室外（图6），存活率83.6% 。1-2个月后苗高30-45cm，移栽至实验田。

实施例2：

 3月取2月继代的新疆药桑苗，切下苗基部愈伤组织使其分散为单株，将主茎（大于4.0cm）接种于延伸培养基上，侧枝（1.0-3.0cm）先接种至增殖培养基上（图3），24℃±2℃生长，光照强度30μEm^-2s^-1，培养一个月后转至延伸培养基上，当苗高达5-8cm，植株长势良好，切下幼苗基部愈伤团单株转至生根培养基上培养，10天后萌发新根，30天后苗基部产生大量新根。

新根数大于4条，根长大于5cm的新疆药桑组培苗移出培养室，揭盖彻底洗净培养瓶及根部培养基，加水浸没根部于培养箱中水培4-6天后移栽入混合土（营养土：蛭石：珍珠岩质量比为6:1:1），移至室外，存活率79.1% 。1-2个月后苗高30-45cm，移栽至实验田。