一种舒筋活络、活血散瘀的中药制剂的质量检测方法

摘要

本发明涉及一种舒筋活络、活血散瘀的中药制剂的质量检测方法，其中该中药制剂由红花3.05%、醋香附11.41%、烫狗脊15.21%、香加皮7.6%、络石藤11.41%、伸筋草11.41%、泽兰叶11.41%、槲寄生15.21%、鸡血藤11.41%、煅自然铜1.9%制成药剂学上任一种剂型，通过舒经活络、活血散瘀，用于筋骨疼痛，肢体拘挛，腰背酸痛，跌打损伤。本发明提供的质量检测方法稳定、可靠，优于中华人民共和国卫生部药品标准（中药成方制剂）第十三册WS3-B-2624-97所提供的检测方法，更有效的保证了产品的质量。

说明书

技术领域

本发明涉及一种舒筋活络、活血散瘀的中药制剂的质量检测方法，属于制药技术领域。

背景技术

中华人民共和国卫生部药品标准（中药成方制剂）第十三册WS₃-B-2624-97提供的舒经活血片由红花80g、香附（制）300g、狗脊（制）400g、香加皮200g、络石藤300g、伸筋草300g、泽兰叶300g、槲寄生400g、鸡血藤300g、自然铜（煅）50g制成，其质量检测方法单一，仅采用了显微鉴别方法，对成品质量的优劣无法实现全方位的检测，对产品质量的要求较低，一定程度上增加了劣质产品投入市场的可能性。本发明采用了显微鉴别方法、四个薄层鉴别方法以及含量测定方法通过多点多面的多项检测，该检测方法稳定可靠、且准确度高，更有效的保证了投入市场的产品质量，促进了在制备过程中加强了对产品质量的控制，保障了产品的有效性和稳定性。

发明内容

本发明的目的是提供一种舒筋活络、活血散瘀的中药制剂的质量检测方法，该质量检测方法稳定可靠、且准确度高，有效保证投入市场的产品质量。

为实现上述目的，本发明采用了如下技术方案：

本发明所述的中药制剂由红花3.05%、醋香附11.41%、烫狗脊15.21%、香加皮7.6%、络石藤11.41%、伸筋草11.41%、泽兰叶11.41%、槲寄生15.21%、鸡血藤11.41%、煅自然铜1.9%制成，该中药制剂可以是药剂学上所述的任一种剂型，其质量检测方法包括鉴别方法与含量测定方法：

鉴别：

   （1）取本品，置显微镜下观察：花冠碎片黄色，有红棕色或黄棕色分泌管；分泌细胞类圆形，含淡黄色至红棕色分泌物，其周围细胞作放射状排列；梯纹管胞淡黄色至金黄色，纹孔排列整齐；

   （2）取相当于生药材13.78～20.67g的本品，研细，加乙醚20～40ml，放置1小时，时时振摇，滤过，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液,另取香附对照药材0.5g～1g，同法制成对照药材溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯-二乙胺9～20:3～6:0～1为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点；

（3）取4-甲氧基水杨醛对照品，加甲醇制成每1 ml含1mg的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法试验，吸取对照品溶液及上述（2）项下的供试品溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚60～90℃-乙酸乙酯-冰醋酸15～25:1～4:0.1～0.8为展开剂，展开，取出，晾干，喷以二硝基苯肼乙醇试液，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

（4）取相当于生药材13.78～27.56g的本品，研细，加甲醇40～60ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用盐酸调PH值至1～2，摇匀，加乙酸乙酯提取2次，每次20ml,合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液，另取原儿茶醛对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液,作为对照品溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-丙酮-甲酸10～60:0～8:0～5:1～2为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%三氯化铁乙醇溶液，放置至斑点显色清晰,供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

（5）取相当于生药材13.78～20.67g的本品，研细，加80%丙酮20～30ml，浸渍1小时，时时振摇，滤过，滤液作为供试品溶液，另取红花对照药材0.5g,加80%丙酮10ml, 振摇15分钟，静置，取上清液作为对照药材溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-甲酸-水5～9:0.3～0.6:1～3:1～4为展开剂，展开，取出，晾干，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点；

     含量测定:

色谱条件与系统适用性试验      以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水-醋酸（40∶60∶2）为流动相；检测波长278nm,理论塔板数按4-甲氧基水杨醛峰计算，应不低于2000；

对照品溶液的制备        取4-甲氧基水杨醛对照品适量，精密称定，加60%甲醇制成1m1含20μg的溶液，摇匀，即得；

供试品溶液的制备        取相当于生药材13.78g的本品，精密称定,研细，取约1.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入60%甲醇25m1，称定重量，回流或超声处理30～40分钟，放冷，再称定重量，用60%甲醇补足减失的重量，滤过，弃去初滤液，续滤液用孔径为0.45μm微孔滤膜滤过，即得；

测定法       分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μ1，注入液相色谱仪，测定，即得；

相当于1g生药材的本品含香加皮以4-甲氧基水杨醛（C₈H₈O₃）计，不得少于101.58μg。

    该中药制剂的质量检测方法可以是：

方法一：

鉴别：

   （1）取本品，置显微镜下观察：花冠碎片黄色，有红棕色或黄棕色分泌管；分泌细胞类圆形，含淡黄色至红棕色分泌物，其周围细胞作放射状排列；梯纹管胞淡黄色至金黄色，纹孔排列整齐；

   （2）取相当于生药材17.23g的本品，研细，加乙醚30ml，放置1小时，时时振摇，滤过，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液,另取香附对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶GF₂₅₄薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯9:1为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯254nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点；

（3）取4-甲氧基水杨醛对照品，加甲醇制成每1 ml含1mg的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法试验，吸取对照品溶液及上述（2）项下的供试品溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以以石油醚60～90℃-乙酸乙酯-冰醋酸20:3:0.5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以二硝基苯肼乙醇试液，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

（4）取相当于生药材20.67g的本品，研细，加甲醇50ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用盐酸调PH值至1～2，摇匀，加乙酸乙酯提取2次，每

次20ml,合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液，另取原儿茶醛

对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液,作为对照品溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-丙酮-甲酸60:5:2为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%三氯化铁乙醇溶液，放置至斑点显色清晰,供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

（5）取相当于生药材17.23g的本品，研细，加80%丙酮30ml，浸渍1小时，时时振摇，滤过，滤液作为供试品溶液，另取红花对照药材0.5g,加80%丙酮10ml, 振摇15分钟，静置，取上清液作为对照药材溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-甲酸-水7:0.4:2:3为展开剂，展开，取出，晾干，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点；

    含量测定:

    色谱条件与系统适用性试验      以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水-醋酸（40∶60∶2）为流动相；检测波长278nm,理论塔板数按4-甲氧基水杨醛峰计算，应不低于2000；

对照品溶液的制备        取4-甲氧基水杨醛对照品适量，精密称定，加60%甲醇制成1m1含20μg的溶液，摇匀，即得；

供试品溶液的制备       取相当于生药材13.78g的本品，精密称定,研细，取约1.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入60%甲醇25m1，称定重量，超声处理30分钟，功率为250W，频率为40kHz，放冷，再称定重量，用60%甲醇补足减失的重量，滤过，弃去初滤液，续滤液用孔径为0.45μm微孔滤膜滤过，即得；

 测定法       分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μ1，注入液相色谱仪，测定，即得；

相当于1g生药材的本品含香加皮以4-甲氧基水杨醛（C₈H₈O₃）计，不得少于101.58μg。

方法二：

鉴别：

   （1）取本品，置显微镜下观察：花冠碎片黄色，有红棕色或黄棕色分泌管；分泌细胞类圆形，含淡黄色至红棕色分泌物，其周围细胞作放射状排列；梯纹管胞淡黄色至金黄色，纹孔排列整齐；

   （2）取相当于生药材13.78g的本品，研细，加乙醚20ml，放置1小时，时时振摇，滤过，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液,另取香附对照药材1g，同法制成对照药材溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶GF₂₅₄薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯17:3为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯254nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点；

（3）取4-甲氧基水杨醛对照品，加甲醇制成每1 ml含1mg的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法试验，吸取对照品溶液及上述（2）项下的供试品溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚60～90℃-乙酸乙酯-冰醋酸15:1:0.1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以二硝基苯肼乙醇试液，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

（4）取相当于生药材13.78g的本品，研细，加甲醇40ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用盐酸调PH值至1～2，摇匀，加乙酸乙酯提取2次，每次20ml,合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液，另取原儿茶醛对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液,作为对照品溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸10:8:1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%三氯化铁乙醇溶液，放置至斑点显色清晰,供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

（5）取相当于生药材13.78g的本品，研细，加80%丙酮20ml，浸渍1小时，时时振摇，滤过，滤液作为供试品溶液，另取红花对照药材0.5g,加80%丙酮10ml, 振摇15分钟，静置，取上清液作为对照药材溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-甲酸-水5:0.3:1:1为展开剂，展开，取出，晾干，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点；

     含量测定:

色谱条件与系统适用性试验      以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水-醋酸（40∶60∶2）为流动相；检测波长278nm,理论塔板数按4-甲氧基水杨醛峰计算，应不低于2000；

对照品溶液的制备       取4-甲氧基水杨醛对照品适量，精密称定，加60%甲醇制成1m1含20μg的溶液，摇匀，即得；

供试品溶液的制备       取相当于生药材13.78g的本品，精密称定,研细，取约1.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入60%甲醇25m1，称定重量，超声处理40分钟，功率为250W，频率为40kHz，放冷，再称定重量，用60%甲醇补足减失的重量，滤过，弃去初滤液，续滤液用孔径为0.45μm微孔滤膜滤过，即得；

测定法       分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μ1，注入液相色谱仪，测定，即得；

相当于1g生药材的本品含香加皮以4-甲氧基水杨醛（C₈H₈O₃）计，不得少于101.58μg。

方法三：   

鉴别：

   （1）取本品，置显微镜下观察：花冠碎片黄色，有红棕色或黄棕色分泌管；分泌细胞类圆形，含淡黄色至红棕色分泌物，其周围细胞作放射状排列；梯纹管胞淡黄色至金黄色，纹孔排列整齐；

   （2）取相当于生药材20.67g的本品，研细，加乙醚40ml，放置1小时，时时振摇，滤过，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液,另取香附对照药材1g，同法制成对照药材溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯-二乙胺20:6:1为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点；

（3）取4-甲氧基水杨醛对照品，加甲醇制成每1 ml含1mg的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法试验，吸取对照品溶液及上述（2）项下的供试品溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚60～90℃-乙酸乙酯-冰醋酸25:4:0.8为展开剂，展开，取出，晾干，喷以二硝基苯肼乙醇试液，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

（4）取相当于生药材27.56g的本品，研细，加甲醇60ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用盐酸调PH值至1～2，摇匀，加乙酸乙酯提取2次，每次20ml,合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液，另取原儿茶醛对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液,作为对照品溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-丙酮-甲酸60:5:2为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%三氯化铁乙醇溶液，放置至斑点显色清晰,供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

（5）取相当于生药材20.67g的本品，研细，加80%丙酮30ml，浸渍1小时，时时振摇，滤过，滤液作为供试品溶液，另取红花对照药材0.5g,加80%丙酮10ml, 振摇15分钟，静置，取上清液作为对照药材溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-甲酸-水9:0.6:3:4为展开剂，展开，取出，晾干，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点；

     含量测定:

色谱条件与系统适用性试验      以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水-醋酸（40∶60∶2）为流动相；检测波长278nm,理论塔板数按4-甲氧基水杨醛峰计算，应不低于2000；

对照品溶液的制备         取4-甲氧基水杨醛对照品适量，精密称定，加60%甲醇制成1m1含20μg的溶液，摇匀，即得；

供试品溶液的制备          取相当于生药材13.78g的本品，精密称定,研细，取约1.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入60%甲醇25m1，称定重量，回流提取40分钟，放冷，再称定重量，用60%甲醇补足减失的重量，滤过，弃去初滤液，续滤液用孔径为0.45μm微孔滤膜滤过，即得；

测定法        分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μ1，注入液相色谱仪，测定，即得；

相当于1g生药材的本品含香加皮以4-甲氧基水杨醛（C₈H₈O₃）计，不得少于101.58μg。

本发明所述的一种舒筋活络、活血散瘀的中药制剂的质量检测方法，其中该中药制剂由红花3.05%、醋香附11.41%、烫狗脊15.21%、香加皮7.6%、络石藤11.41%、伸筋草11.41%、泽兰叶11.41%、槲寄生15.21%、鸡血藤11.41%、煅自然铜1.9%制成药剂学上任一种剂型，通过舒经活络、活血散瘀，用于筋骨疼痛，肢体拘挛，腰背酸痛，跌打损伤。所提供的该制剂的质量检测方法稳定、可靠，优于中华人民共和国卫生部药品标准（中药成方制剂）第十三册WS₃-B-2624-97所提供的检测方法，更有效的保证了产品的质量。

发明人对该中药制剂中4-甲氧基水杨醛的含量做了如下研究：

一、实验药品

1.实验药品的处方： 

 红   花 21g        醋香附78.6g             烫狗脊 104.8g     

香加皮52.4g        络石藤78.6g             伸筋草78.6g  

泽兰叶78.6g        槲寄生104.8g            鸡血藤78.6g

 煅自然铜13.1g

2.实验药品的制备：  以上十味，先将红花、醋香附、烫狗脊、香加皮粉碎成细粉，过筛。煅自然铜加水煎煮2小时，然后加入络石藤、伸筋草、泽兰叶、槲寄生、鸡血藤煎煮二次，第一次3小时，第二次2小时，合并煎液，滤过。滤液静置8～10小时，上清液浓缩成相对密度为1.25～1.35（70℃）的稠膏，加入上述细粉混匀，加入淀粉适量、麦芽糖39g，制成颗粒，干燥，压制成1000片，包薄膜衣，即得。

二、研究过程：

1、仪器与试药

仪器：Agilent 1100型高效液相色谱仪，G1314A型紫外检测器（美国安捷伦科技公司）；BP211D型电子分析天平（德国赛多利斯集团公司）；KQ250B型超声波清洗器（功率250W，频率40kHz），（昆山市超声仪器有限公司）； UV-1800 型紫外可见分光光度计，（日本岛津公司）。

试剂：甲醇为色谱纯（美国Honeywell公司）；水为二次蒸馏水；其余试剂均为分析纯（西安化学试剂厂）。

对照品：4-甲氧基水杨醛对照品购自中国药品生物制品检定所（批号0790-200202  含量测定用）。

2、测定波长的选择  取4-甲氧基水杨醛对照品溶液，用紫外可见分光光度计，在190～400nm波长范围内进行扫描测定。结果表明，4-甲氧基水杨醛最大吸收波长为278nm。

3、色谱条件

色谱柱：Agilent TC-C₁₈ (250mm×4.6mm  5μ)色谱柱； 流动相：甲醇-水-醋酸（40:60:2）；流速：1ml/min ；柱温：室温；检测波长：278nm；进样量：10μl。

在选定条件下，4-甲氧基水杨醛与制剂中其它组分色谱峰可达到基线分离，4-甲氧基水杨醛与相邻峰的分离度为3.26,5.81。理论板数以4-甲氧基水杨醛峰计为15806。

4、供试品溶液的制备

（1）、提取溶媒的确定  参考文献及《中国药典》2010年版一部香加皮药材项下4-甲氧基水杨醛的含量测定，确定60%甲醇为提取溶媒。

（2）、提取方法的确定  取本品，研细，取约1.5g，二份，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加60%甲醇25ml，称定重量，一份超声处理（功率250W，频率40kHz ）40分钟，另一份回流提取40分钟，放凉，称定重量，用60%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过。续滤液用微孔滤膜(0.45μm)滤过，测定， 结果见表1。

表1 提取方法的比较

结果表明，回流法与超声法测定结果无明显差异，故选简便易行的超声法作为提取方法。    （3）、提取时间的确定  取本品，研细，取约1.5g，四份，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加60%甲醇25ml，称定重量，分别超声处理（功率250W，频率40kHz ）10、20、30、40分钟，放冷，再称定重量，用60%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过。续滤液用微孔滤膜(0.45μm)滤过，测定， 结果见表2。

表2 提取时间的比较

结果表明，提取30分钟和40分钟4-甲氧基水杨醛的含量接近，故选超声30分钟作为提取时间。

综上所述，供试品溶液的制备，取本品20片，精密称定,研细，取约1.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入60%甲醇25m1，称定重量，超声处理（功率250W，频率40kHz ）30分钟，放冷，再称定重量，用60%甲醇补足减失的重量，滤过，弃去初滤液，续滤液用微孔滤膜（0.45μm）滤过，即得。

5、干扰性试验

取不含香加皮药材的制剂，按照供试品溶液的制备方法同法制成空白对照溶液，按拟定的色谱条件分别进样，结果表明,在与4-甲氧基水杨醛色谱峰相应位置无色谱峰出现，阴性无干扰。

6、线性关系的考察

精密吸取4-甲氧基水杨醛对照品溶液（0.023mg/ml）4、8、10、12、16、20μl，按拟定的色谱条件进样，测定峰面积，结果见表3。

表3  4-甲氧基水杨醛线性关系测定结果

以峰面积对进样量进行回归，得标准曲线方程Y=6228.9X-18.329（r=0.9998），以峰面积值对进样量(μg)作图，得一直线。以上结果表明，4-甲氧基水杨醛在0.092～0.46μg范围内，峰面积积分值与进样量呈良好的线性关系。

7、精密度试验  取配制好的供试品溶液，按拟定的色谱条件测定，重复进样6次，结果见表4。

表4 精密度试验结果

结果4-甲氧基水杨醛峰面积的RSD为0.97%，表明本方法的精密度良好。

8、稳定性试验  取供试液分别在0小时、2小时、4小时、6小时、8小时、24小时进样，结果见表5。

表5 稳定性试验结果

结果4-甲氧基水杨醛峰面积的RSD为2.05%，表明供试品溶液在24小时内基本稳定。

9、重复性试验 按拟定的含量测定方法，对同一批样品分别制备6份供试品溶液，测定4-甲氧基水杨醛的含量，结果见表6。

表6 重现性试验结果

结果4-甲氧基水杨醛含量的RSD为1.65%，表明本方法的重复性良好。

10、回收率试验  取4-甲氧基水杨醛对照品（0.2888mg/ml）8ml，用60%甲醇稀释并定容至200 ml容量瓶中，摇匀，备用；再取已知含量的供试品（201101001，含量）0.292 mg/g)约0.75g,6份，精密称定，分别精密加入上述对照品溶液25ml，按拟定的含量测定方法测定，以下列公式计算回收率，结果见表7。

表7 回收率试验结果

结果表明，本方法4-甲氧基水杨醛加样回收率良好。

11、样品的测定  取三批中试素片和薄膜衣片，按上述方法测定其4-甲氧基水杨醛的含量，测定结果见表8。

 

表8   三批素片和薄膜衣片中4-甲氧基水杨醛含量测定结果

根据3批中试素片及薄膜衣片中4-甲氧基水杨醛的含量测定结果，素片与薄膜衣片4-甲氧基水杨醛的含量无明显差异，投料香加皮药材中4-甲氧基水杨醛的含量（0.273%，每片含香加皮药材0.052g），3批中试薄膜衣片4-甲氧基水杨醛的平均含量为112.9μg/片,计算每片中4-甲氧基水杨醛的转移率为：79.5%，结合生产实际情况及《中国药典》2010年版一部香加皮药材的含量限度（不得少于0.20%），暂定本品每片含香加皮以4-甲氧基水杨醛（C₈H₈O₃)计，不得少于70μg。

12、香加皮药材的含量测定 取不同批次的香加皮药材粉末 (过三号筛)约0.3g，精密称定，置具塞三角瓶中，精密加60%甲醇25ml，称重，超声提取（功率250W，频率40kHz ）30分钟，放冷，用60%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，续滤液用微孔滤膜(0.45μm)滤过，照拟定的色谱条件，测定4-甲氧基水杨醛的含量，测定结果见表9。

表9 三批香加皮药材的含量测定结果

三批香加皮药材中4-甲氧基水杨醛的测定结果均符合《中国药典》2010年版一部香加皮药材项下的规定。

具体实施方式

下文所列实施例不应构成对本发明的限制。

实施例1

将红花21g、醋香附78.6g、烫狗脊104.8g、香加皮52.4g粉碎成细粉，过筛。煅自然铜13.1g加水煎煮2小时，然后加入络石藤78.6g、伸筋草78.6g、泽兰叶78.6g、槲寄生104.8g、鸡血藤78.6g煎煮二次，第一次3小时，第二次2小时，合并煎液，滤过。滤液静置8～10小时，上清液浓缩成相对密度为1.25～1.35（70℃）的稠膏，加入上述细粉混匀，加入淀粉适量、麦芽糖39g，制成颗粒，干燥，压制成1000片，包薄膜衣，即得。

该中药制剂采用如下检测方法：

鉴别：

   （1）取本品，置显微镜下观察：花冠碎片黄色，有红棕色或黄棕色分泌管（红花）。分泌细胞类圆形，含淡黄色至红棕色分泌物，其周围细胞作放射状排列（香附）。梯纹管胞淡黄色至金黄色，纹孔排列整齐（狗脊）。

 （2）取本品25片，研细，加乙醚30ml，放置1小时，时时振摇，滤过，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液。另取香附对照药材0.5g,同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录Ⅵ B）试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶GF₂₅₄薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯（9:1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（254nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点。

（3）取4-甲氧基水杨醛对照品，加甲醇制成每1 ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录Ⅵ B）试验，吸取对照品溶液及【鉴别】（2）项下的供试品溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚（60～90℃）-乙酸乙酯-冰醋酸（20:3:0.5）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以二硝基苯肼乙醇试液。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

（4）取本品30片，研细，加甲醇50ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用盐酸调PH值至1～2，摇匀，加乙酸乙酯提取2次，每次20ml,合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取原儿茶醛对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液,作为对照品溶液。照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录Ⅵ B）试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-丙酮-甲酸（60:5:2）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%三氯化铁乙醇溶液，放置至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

（5）取本品25片，研细，加80%丙酮30ml，浸渍1小时，时时振摇，滤过，滤液作为供试品溶液。另取红花对照药材0.5g,加80%丙酮10ml, 振摇15分钟，静置，取上清液作为对照药材溶液。照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录Ⅵ B）试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-甲酸-水（7:0.4:2:3）为展开剂，展开，取出，晾干。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点。

含量测定：

色谱条件与系统适用性试验  以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水-醋酸（40∶60∶2）为流动相；检测波长278nm。理论塔板数按4-甲氧基水杨醛峰计算，应不低于2000。

对照品溶液的制备  取4-甲氧基水杨醛对照品适量，精密称定，加60%甲醇制成1m1含20μg的溶液，摇匀，即得。

供试品溶液的制备  取本品20片，精密称定,研细，取约1.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入60%甲醇25m1，称定重量，超声处理（功率250W，频率40kHz ）30分钟，放冷，再称定重量，用60%甲醇补足减失的重量，滤过，弃去初滤液，续滤液用微孔滤膜（0.45μm）滤过，即得。

测定法  分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μ1，注入液相色谱仪，测定，即得。

本品每片含香加皮以4-甲氧基水杨醛（C₈H₈O₃）计，不得少于70μg。

实施例2

将红花21g、醋香附78.6g、烫狗脊104.8g、香加皮52.4g粉碎成细粉，过筛。煅自然铜13.1g加水煎煮2小时，然后加入络石藤78.6g、伸筋草78.6g、泽兰叶78.6g、槲寄生104.8g、鸡血藤78.6g煎煮二次，第一次3小时，第二次2小时，合并煎液，滤过。滤液静置8～10小时，上清液浓缩成相对密度为1.25～1.35（70℃）的稠膏，加入上述细粉混匀，加入淀粉适量、麦芽糖39g，制成颗粒，干燥，压制成1000片，包薄膜衣，即得。

该中药制剂采用如下检测方法：

鉴别：

   （1）取本品，置显微镜下观察：花冠碎片黄色，有红棕色或黄棕色分泌管（红花）。分泌细胞类圆形，含淡黄色至红棕色分泌物，其周围细胞作放射状排列（香附）。梯纹管胞淡黄色至金黄色，纹孔排列整齐（狗脊）。

 （2）取本品20片，研细，加乙醚20ml，放置1小时，时时振摇，滤过，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液。另取香附对照药材1g,同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录Ⅵ B）试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶GF₂₅₄薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯（17:3）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（254nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点。

（3）取4-甲氧基水杨醛对照品，加甲醇制成每1 ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录Ⅵ B）试验，吸取对照品溶液及【鉴别】（2）项下的供试品溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚（60～90℃）-乙酸乙酯-冰醋酸（15:1:0.1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以二硝基苯肼乙醇试液。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

（4）取本品20片，研细，加甲醇40ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用盐酸调PH值至1～2，摇匀，加乙酸乙酯提取2次，每次20ml,合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取原儿茶醛对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液,作为对照品溶液。照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录Ⅵ B）试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸（10:8:1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%三氯化铁乙醇溶液，放置至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

（5）取本品20片，研细，加80%丙酮20ml，浸渍1小时，时时振摇，滤过，滤液作为供试品溶液。另取红花对照药材0.5g,加80%丙酮10ml, 振摇15分钟，静置，取上清液作为对照药材溶液。照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录Ⅵ B）试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-甲酸-水（5:0.3:1:1）为展开剂，展开，取出，晾干。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点。

含量测定：

色谱条件与系统适用性试验  以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水-醋酸（40∶60∶2）为流动相；检测波长278nm。理论塔板数按4-甲氧基水杨醛峰计算，应不低于2000。

对照品溶液的制备  取4-甲氧基水杨醛对照品适量，精密称定，加60%甲醇制成1m1含20μg的溶液，摇匀，即得。

供试品溶液的制备  取本品20片，精密称定,研细，取约1.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入60%甲醇25m1，称定重量，超声处理（功率250W，频率40kHz ）40分钟，放冷，再称定重量，用60%甲醇补足减失的重量，滤过，弃去初滤液，续滤液用微孔滤膜（0.45μm）滤过，即得。

测定法  分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μ1，注入液相色谱仪，测定，即得。

本品每片含香加皮以4-甲氧基水杨醛（C₈H₈O₃）计，不得少于70μg。

实施例3

将红花21g、醋香附78.6g、烫狗脊104.8g、香加皮52.4g粉碎成细粉，过筛。煅自然铜13.1g加水煎煮2小时，然后加入络石藤78.6g、伸筋草78.6g、泽兰叶78.6g、槲寄生104.8g、鸡血藤78.6g煎煮二次，第一次3小时，第二次2小时，合并煎液，滤过。滤液静置8～10小时，上清液浓缩成相对密度为1.25～1.35（70℃）的稠膏，加入上述细粉混匀，加入淀粉适量、麦芽糖39g，制成颗粒，干燥，压制成1000片，包薄膜衣，即得。

该中药制剂采用如下检测方法：

鉴别：

   （1）取本品，置显微镜下观察：花冠碎片黄色，有红棕色或黄棕色分泌管（红花）。分泌细胞类圆形，含淡黄色至红棕色分泌物，其周围细胞作放射状排列（香附）。梯纹管胞淡黄色至金黄色，纹孔排列整齐（狗脊）。

 （2）取本品30片，研细，加乙醚40ml，放置1小时，时时振摇，滤过，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液。另取香附对照药材1g,同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录Ⅵ B）试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯-二乙胺（20:6:1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点。

（3）取4-甲氧基水杨醛对照品，加甲醇制成每1 ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录Ⅵ B）试验，吸取对照品溶液及【鉴别】（2）项下的供试品溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚（60～90℃）-乙酸乙酯-冰醋酸（25:4:0.8）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以二硝基苯肼乙醇试液。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

（4）取本品40片，研细，加甲醇60ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用盐酸调PH值至1～2，摇匀，加乙酸乙酯提取2次，每次20ml,合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取原儿茶醛对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液,作为对照品溶液。照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录Ⅵ B）试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-丙酮-甲酸（60:5:2）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%三氯化铁乙醇溶液，放置至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

（5）取本品30片，研细，加80%丙酮30ml，浸渍1小时，时时振摇，滤过，滤液作为供试品溶液。另取红花对照药材0.5g,加80%丙酮10ml, 振摇15分钟，静置，取上清液作为对照药材溶液。照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录Ⅵ B）试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-甲酸-水（9:0.6:3:4）为展开剂，展开，取出，晾干。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点。

含量测定：

色谱条件与系统适用性试验  以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水-醋酸（40∶60∶2）为流动相；检测波长278nm。理论塔板数按4-甲氧基水杨醛峰计算，应不低于2000。

对照品溶液的制备  取4-甲氧基水杨醛对照品适量，精密称定，加60%甲醇制成1m1含20μg的溶液，摇匀，即得。

供试品溶液的制备  取本品20片，精密称定,研细，取约1.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入60%甲醇25m1，称定重量，回流提取40分钟，放冷，再称定重量，用60%甲醇补足减失的重量，滤过，弃去初滤液，续滤液用微孔滤膜（0.45μm）滤过，即得。

测定法  分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μ1，注入液相色谱仪，测定，即得。

本品每片含香加皮以4-甲氧基水杨醛（C₈H₈O₃）计，不得少于70μg。