一种质粒型腺病毒载体pAd-IGF2及其构建方法和应用

摘要

本发明一种质粒型腺病毒载体pAd-IGF2及其构建方法和应用，属于基因工程技术领域。所述质粒型腺病毒载体pAd-IGF2的构建方法包括：(1)将秦川牛IGF2基因插入pAdTrack-CMV腺病毒穿梭质粒的CMV启动子之下，构建重组穿梭质粒pAdTrack-CMV-IGF2；(2)Pme Ⅰ线性化后转化含有pAdEasy-l质粒的E.col iBJ5183感受态细胞，利用E.coli BJ5183内Cre重组酶高效的同源重组系统，在细菌中完成pAdTrack-CMV-IGF2和pAdEasy-1的同源重组；将正确的重组腺病毒质粒命名为pAd-IGF2；(3)pAd-IGF2经Pac Ⅰ酶切线性化后，脂质体转染293A细胞和秦川牛原代肌肉细胞，产生并获得重组病毒颗粒。本发明的质粒型腺病毒载体pAd-IGF2具有可应用于秦川牛IGF2基因功能研究、鉴定和对种子细胞进行改造，调控肌肉生长发育相关基因的代谢。