一种水飞蓟宾-熊去氧胆酸的固体分散体及其制备方法

摘要

本发明涉及医药技术领域，涉及一种水飞蓟宾-熊去氧胆酸的固体分散体及其制备方法。所述的固体分散体中，水飞蓟宾与熊去氧胆酸的组成摩尔比为1:0.5-5，优选1：0.5-3，并采用溶剂法或研磨法制备。此固体分散体中药物以非结晶态存在，与原药相比，水飞蓟宾从此固体分散体中的溶出速度显著提高，大鼠经口投与此固体分散体后发现水飞蓟宾的体内吸收显著改善。

说明书

 

技术领域

本发明涉及医药技术领域，涉及一种水飞蓟宾-熊去氧胆酸的固体分散体及其制备方法。此固体分散体中药物以非结晶态存在，与原药相比，水飞蓟宾从此固体分散体中的溶出速度显著提高，大鼠经口投与此固体分散体后发现水飞蓟宾的体内吸收显著改善。

背景技术

水飞蓟宾（Silybin, Silibinin，SLB，C₂₅H₂₂O₁₀，482.44）是从菊科植物水飞蓟的果实中提取分离而得的2种近乎等摩尔的黄酮木脂素类立体异构体水飞蓟宾A和水飞蓟宾B的混合物，其化学结构如图1所示。水飞蓟宾是疗效确切的肝损伤修复药物，并具有良好的治疗高血脂症、消除自由基、抗脂质过氧化和抗缺血再灌注损伤作用。但是水飞蓟宾的水中溶解度极低，其体内吸收差、生物利用度低。因而增加水飞蓟宾的水中溶出度可利于人体吸收，提高生物利用度及药效。常见的可提高水飞蓟宾溶出度的制剂有：复合物（吴正红，黄欣，顾琳. 水飞蓟宾复合物及其制备方法. 中国专利，申请号201110165534.6）、微乳（禹钟守，徐贤珠. 水飞蓟素的口服微乳剂组合物. 中国专利，申请号00801319.5）、环糊精包合物（周勇，徐柏衡. 水溶性水飞蓟素及其制备方法. 中国专利：申请号200910264177.1），纳米制剂（张景勤，秦少荣，李晓林，巴斯卡，刘佳. 水飞蓟宾纳米粒及其制备方法. 中国专利：200710078126.0；徐希明，余江南，朱源，童珊珊. 水飞蓟宾纳米制剂药物及其制备方法. 中国专利：申请号200510094008.X），滴丸，（李永强，郑永峰. 一种水飞蓟素滴丸及其制备方法. 中国专利：申请号200510013609.3），脂质体制剂（余江南，徐希明，沈珠，等. 水飞蓟宾前体多相脂质体制剂及其制备方法. 中国专利：申请号200710191464.5），固体分散体（邓莉，邹豪. 水飞蓟宾固体分散体的制备及其体外溶出研究. 第二军医大学学报，2000年[J]，10：961-964）等。

胆汁酸类具有油水两亲的表面活性作用，可以提高疏水性药物的亲水性，提高药物的溶出度，因而胆汁酸类也被用作药物固体分散体的载体。

熊去氧胆酸（Ursodeoxycholic Acid，UDCA，C₂₄H₄₀O₄，392.58）是一种亲水、非细胞毒性的胆汁酸，是熊胆汁的主要成分之一，其化学结构如附图2所示。熊去氧胆酸具有利胆、细胞保护、抗凋亡、抗氧化和免疫调节作用。是目前唯一被FDA批准用于胆汁淤积性肝病治疗的药物，因其良好的保肝护肝作用，临床上也被广泛用于各种肝病的治疗。

此外，将水飞蓟宾与熊去氧胆酸联合应用治疗肝病可以提高疗效(陈一平，施军平. 熊去氧胆酸联合复方益肝灵片治疗非酒精性脂肪性肝病疗效观察[J].现代中西医结合杂志，2007，16（1）：36.)。动物实验也表明二者联合应用可以增强抗炎效果(Esmaily H, Vaziri-Bami A, Miroliaee AE, Baeeri M, Abdollahi M., The correlation between NF-κB inhibition and disease activity by coadministration of silibinin and ursodeoxycholic acid in experimental colitis. Fundam Clin Pharmacol. 2011 Dec;25(6):723-33. )。

发明内容

本发明的目的是利用熊去氧胆酸的包和特性和油水两亲特性制备水飞蓟宾-熊去氧胆酸的药物组合，药物以非结晶态存在可以显著提高水飞蓟宾体外溶出度。并且可以进一步制成水飞蓟宾-熊去氧胆酸的复方制剂，发挥二者的协同作用，提高疗效，方便服药。

本发明是通过如下技术方案实现的：

本发明的药物固体分散体中，水飞蓟宾与熊去氧胆酸的组成摩尔比为1:0.5-5，优选1:0.5-3。

本发明所述的组合物的制备方法如下：

（1）溶剂法（共沉淀法）

分别称取适量水飞蓟宾和熊去氧胆酸, 在25-80℃下，加入适量的溶剂，直至得到澄清透明的淡黄色溶液，用旋转蒸发仪减压浓缩至干后，转移产品至真空干燥器内，在20mmHg以下真空度内室温继续干燥12-24h，得到黄白色疏松干燥固体即成。

   溶剂法中所述溶剂尤其包括但不限于甲醇、乙醇、异丙醇、丙酮、乙酸乙酯、二氯甲烷和水及它们的混合物。溶剂温度愈高，药物溶解度愈大，溶剂用量愈小，但温度太高水飞蓟宾容易降解，在25-80℃水飞蓟宾稳定，所需溶剂用量为固体物质量的3-50倍（w/v）。

（2）研磨法

分别称取适量过80目筛的水飞蓟宾和熊去氧胆酸,混合均匀，置球磨机（或其它通用干法研磨机，如震动磨）内连续研磨12-24h即成。

为了更好的了解发明的实质，下面分别从以下几个方面的实验来评价本发明。

溶出度实验评价。精密称取水飞蓟宾原药（SLB）35mg、含有水飞蓟宾35mg的水飞蓟宾-熊去氧胆酸（UDCA）的等摩尔物理混合物（PM）、含有水飞蓟宾35mg的各摩尔比为1:0.5，1:1，1:2，1:3，1:0.878的水飞蓟宾-熊去氧胆酸固体分散体（SD），参照中国药典2010版二部附录XC溶出度测定法桨法，选择溶出介质为pH6.8的磷酸盐缓冲溶液900ml，温度为37℃，搅拌桨转速为100r/min，分别在5，10，15，30，45，60，90，120min取样6ml，并及时补充溶出介质6ml，在288nm处测定吸收度，计算并绘制溶出度曲线。结果如附图3，水飞蓟宾原药、水飞蓟宾-熊去氧胆酸物理混合物中水飞蓟宾的溶出度极低，而制备成水飞蓟宾-熊去氧胆酸固体分散体后水飞蓟宾的溶出度显著提高。

热分析法评价水飞蓟宾-熊去氧胆酸药物组合中物质状态。采用差示扫描热量法（DSC）对水飞蓟宾，熊去氧胆酸，两者的物理混合物以及各个比例的固体分散体进行热分析。试验方法：取样品约2-3mg，置于铝质样品坩埚中，参比物为空铝坩埚，以10℃/min升温速率，从室温升温到300℃，气氛为氮气。结果如图4所示。从DSC图谱可以观察到，水飞蓟宾原药在149.50℃出现尖锐熔解吸热峰，熊去氧胆酸在206.68℃出现尖锐的熔解吸热峰，在二者等摩尔比的物理混合物（PM1:1）图谱中能观察到水飞蓟宾和熊去氧胆酸的吸热特征峰还各自存在，说明二者仅是简单的混合，未发生物理或者化学变化。而在水飞蓟宾-熊去氧胆酸摩尔比1:0.5，1:1，1:3的固体分散体中DSC曲线较平滑没有明显的吸热峰存在，说明此时的水飞蓟宾和熊去氧胆酸的以非晶体无定形状态存在。

粉末X射线衍射（PXRD）分析评价水飞蓟宾-熊去氧胆酸药物组合中物质状态。采用X射线衍射分析方法分别对水飞蓟宾原药、熊去氧胆酸原药、两者物理混合物以及各个比例的固体分散体进行样品分析，分析结果如图5所示。从X射线图谱可以观察到，水飞蓟宾和熊去氧胆酸的图谱中都有明显的晶体衍射峰，物理混合物的图谱中水飞蓟宾和熊去氧胆酸的晶体衍射峰也清楚可见，且只是简单叠加，并没有新的衍射峰生成，说明水飞蓟宾和熊去氧胆酸都还是以各自的晶体形式存在，两者之间没有发生物理或化学作用。在摩尔比1:0.5，1:1，1:3的固体分散体图谱中没有观察到晶体衍射峰存在，说明水飞蓟宾与熊去氧胆酸都处于一种高度分散的非结晶状态。一般无定形药物的分子多呈不规则排列，自由能较高，溶解度和溶解速度较结晶态原药显著提高。

傅立叶变换红外光谱（FT-IR）分析。使用KBr压片法制样，取少量样品，与KBr混匀并压片，以KBr片作为空白对照，在4000-400cm^-1范围内测定红外吸收光谱。结果如图6所示，与熊去氧胆酸原药的红外图谱相比较，PM图谱中可以看到熊去氧胆酸中的羧基的1716 cm^-1处的羰基吸收峰并未发生位移，而在SD-1:0.5，1:1，，1:3的固体分散体中C=O振动峰向低波数方向移动了约7 cm^-1 ，在1709 cm^-1附近，推测在固体分散体中水飞蓟宾的羟基与熊去氧胆酸的羧基产生了氢键，因而导致1716 cm^-1处的羰基峰向低波数位移。

大鼠体内药动学实验。取6只大鼠禁食12 h后随机均分成2组，将水飞蓟宾-熊去氧胆酸等摩尔物理混合物（PM）与水飞蓟宾-熊去氧胆酸摩尔比为1:0.878的固体分散体（SD-1:0.878）分别用水配成混悬液，以9.1 mg/kg (以水飞蓟宾计)剂量灌胃，给药后于0.17，0.33，0.5，1，2，3，4，6，8，l0和12 h取血加入肝素钠处理过的试管，加入β萘酚为内标，采用葡糖醛酸酶解法处理血浆样品，经乙酸乙酯萃取氮气吹干后再以乙腈溶解再过滤后注入高效液相色谱仪。采用HPLC-UV法测定，过1周洗净期后，再交换给药。色谱分析条件为：岛津2010a色谱仪，色谱柱：Ultimate AQ-C18,250mm×4.6mm,5μm，流动相:甲醇-水-冰乙酸(52:48: 0.5)(v/v/v)，流速:1.0ml/min，检测波长:288nm，柱温35℃。血药浓度-时间曲线如图7所示，结果表明，灌胃物理混合物后的大鼠血药浓度很低，几乎难以检测，证明水飞蓟宾的体内吸收很差，灌胃固体分散体后大鼠的血药浓度可达到微克级，极大的提高了水飞蓟宾的体内吸收。

综上所述，本发明制备的固体分散体可使水飞蓟宾的溶出度极大提高，水飞蓟宾和熊去氧胆酸在此固体分散体以非结晶态存在，水飞蓟宾的羟基与熊去氧胆酸的羧基产生氢键作用。此水飞蓟宾-熊去氧胆酸固体分散体可进一步制成胶囊剂、片剂、干混悬剂、颗粒剂、散剂等剂型。

附图说明：

图1为水飞蓟宾（SLB）的化学结构式

图2为熊去氧胆酸（UDCA）的化学结构式

图3为溶出度曲线

SD-1:0.5、SD-1:1、SD-1:3，SD-1:0.878为水飞蓟宾与熊去氧胆酸摩尔比分别为1:0.5、1:1、1:3、1:0.878

的固体分散体；PM-水飞蓟宾与熊去氧胆酸的等摩尔物理混合物；SLB-水飞蓟宾原药；

图4为DSC图谱

SLB-水飞蓟宾原药； UDCA-熊去氧胆酸原药；PM-水飞蓟宾与熊去氧胆酸的等摩尔物理混合物；SD-1:0.5、SD-1:1、SD-1:3为水飞蓟宾与熊去氧胆酸摩尔比分别为1:0.5、1:1、1:3的固体分散体；

图5为PXRD图谱

SLB-水飞蓟宾原药； UDCA-熊去氧胆酸原药；PM-水飞蓟宾与熊去氧胆酸的等摩尔物理混合物；SD-1:0.5、SD-1:1、SD-1:3为水飞蓟宾与熊去氧胆酸摩尔比分别为1:0.5、1:1、1:3的固体分散体；

图6为FT-IR图谱

SLB-水飞蓟宾原药； UDCA-熊去氧胆酸原药；PM-水飞蓟宾与熊去氧胆酸的等摩尔物理混合物；SD-1:0.5、SD-1:1、SD-1:3为水飞蓟宾与熊去氧胆酸摩尔比分别为1:0.5、1:1、1:3的固体分散体；

图7为大鼠经口投与药物后的血药浓度-时间曲线

SD-1:0.878为水飞蓟宾与熊去氧胆酸摩尔比分别为1:0.878的固体分散体；PM-水飞蓟宾与熊去氧胆酸

的等摩尔物理混合物；

图8为固体分散体的物态稳定性长期考查结果（PXRD）。

为了更好的阐释本发明，以下内容为本发明的部分实施例，但本发明的内容并不局限于此。

具体实施方式：

实施例1

分别称取水飞蓟宾700g，熊去氧胆酸500g。用大约28L无水乙醇，将水飞蓟宾和熊去氧胆酸于60℃温度下完全溶解，得到淡黄色澄清透明溶液。用旋转蒸发仪迅速减压回收至干，收集溶剂蒸干后的固体残留物，放入方形瓷盘中摊匀，在真空干燥器中连续减压（压力小于20mmHg）干燥12h，使溶剂完全挥尽，得到酥松干燥的黄白色固体（必要时粉碎），过80目筛即成。

实施例2

分别称取水飞蓟宾48.2g，熊去氧胆酸19.6g。用大约400mL无水乙醇，将水飞蓟宾和熊去氧胆酸于60-80℃温度下完全溶解，得到淡黄色澄清透明溶液。用旋转蒸发仪迅速减压回收至干，收集溶剂蒸干后的固体残留物，放入方形瓷盘中摊匀，在真空干燥器中连续减压（压力小于20mmHg）干燥12h，使溶剂完全挥尽，得到酥松干燥的黄白色固体（必要时粉碎），过80目筛即成。

实施例3

分别称取水飞蓟宾48.2g，熊去氧胆酸117.8g。用大约1200mL无水乙醇，将水飞蓟宾和熊去氧胆酸于60-80℃温度下完全溶解，得到淡黄色澄清透明溶液。用旋转蒸发仪迅速减压回收至干，收集溶剂蒸干后的固体残留物，放入方形瓷盘中均匀摊薄，在真空干燥器中连续减压（压力小于20mmHg）干燥12h，使溶剂完全挥尽，得到酥松干燥的黄白色固体（必要时粉碎），过80目筛即成。

实施例4

分别称取水飞蓟宾70g，熊去氧胆酸50g。用约2000mL丙酮，将水飞蓟宾和熊去氧胆酸于60℃温度下完全溶解，得到淡黄色澄清透明溶液。用旋转蒸发仪迅速减压回收至干，收集溶剂蒸干后的固体残留物，放入方形瓷盘中均匀摊开，在真空干燥器中连续减压（压力小于20mmHg）干燥12h，使溶剂完全挥尽，得到酥松干燥的黄白色固体（必要时粉碎），过80目筛即成。

实施例5

分别称取水飞蓟宾70g，熊去氧胆酸50g。取3000mL甲醇，将水飞蓟宾和熊去氧胆酸于60℃温度下完全溶解，得到淡黄色澄清透明溶液。用旋转蒸发仪迅速减压回收至干，收集溶剂蒸干后的固体残留物，放入方形瓷盘中均匀摊开，在真空干燥器中连续减压（压力小于20mmHg）干燥12h，使溶剂完全挥尽，得到酥松干燥的黄白色固体（必要时粉碎），过80目筛即成。

实施例6

分别称取水飞蓟宾70g，熊去氧胆酸50g。取4L乙酸乙酯，将水飞蓟宾和熊去氧胆酸于60℃温度下完全溶解，得到淡黄色澄清透明溶液。用旋转蒸发仪迅速减压回收至干，收集溶剂蒸干后的固体残留物，放入方形瓷盘中摊匀，在真空干燥器中连续减压（压力小于20mmHg）干燥12h，使溶剂完全挥尽，得到酥松干燥的黄白色固体（必要时粉碎），过80目筛即成。

实施例7

精密称取水飞蓟宾2.4g，熊去氧胆酸1.96g，混合均匀后平均分装到两个50ml的球磨罐中，每罐放入直径0.4cm的研磨球60粒，在450rpm转速下研磨24小时，过30目筛将研磨球分离，即得水飞蓟宾-熊去氧胆酸固体分散体。

实施例8

将制备的水飞蓟宾-熊去氧胆酸固体分散体室温放置18个月，对其进行粉末X-射线衍射实验，结果发现各固体分散体仍呈非结晶无定形的状态。结果如图8所示。

实施例9

取实施例1制备的产品60g，加入微晶纤维素（PH-102）100g，微粉硅胶3g，按行业公知的方法混匀后装入胶囊，制备硬胶囊剂。

实施例10

取实施例1制备的产品60g，加入球形甘露醇（NP-108）240g，硬脂酸镁为1.5g。按行业公知的方法混匀后直接打片，制备片剂。