一种测定扇贝闭壳肌内总类胡萝卜素含量用扇贝比色扇的制作方法及其应用

摘要

本发明涉及一种测定扇贝闭壳肌内总类胡萝卜素含量用扇贝比色扇的制作方法及其应用。利用本发明制作的扇贝比色扇与扇贝闭壳肌颜色进行比较，3-5秒内就可得出该扇贝闭壳肌内总类胡萝卜素的含量范围。本发明测定的华贵栉孔扇贝闭壳肌内总类胡萝卜素含量范围为10-250μg/g。本发明制作测定扇贝闭壳肌内总类胡萝卜素含量用扇贝比色扇的方法简单，可操作性强。本发明测定华贵栉孔扇贝闭壳肌内总类胡萝卜素含量的方法快速、简便、效率高、成本低、易推广、实用性强、环保性强。

说明书

技术领域

本发明涉及一种测定海洋贝类总类胡萝卜素含量用比色工具的制作方法及其应用，具体说是一种测定扇贝闭壳肌内总类胡萝卜素含量用扇贝比色扇的制作方法及其应用。 

背景技术

类胡萝卜素(carotenoids)也称脂色素，属于类萜化合物，通常是40碳的碳氢化合物(胡萝卜素)和它们的氧化衍生物(叶黄素)两大类色素的总称，由高等植物、藻类和微生物合成，以黄色、橙红色或红色等色素形式存在于自然界，迄今为止已被发现达750种。 

由于类胡萝卜素分布广泛，并且具有多样功能和特殊性质，自1831年人们首次从胡萝卜中分离出黄色的β-胡萝卜素起，类胡萝卜素研究就一直是人们最感兴趣的领域之一。类胡萝卜素色泽鲜亮、色价极高，已被广泛地应用于着色剂、饲料添加剂中；类胡萝卜素具有生物活性，特别是抗氧化能力强，除了作为功能食品外，它还具有保健和药用价值，如清除自由基抗氧化延缓衰老、猝灭单线态氧防癌抗癌、增加免疫系统中B细胞的活力增强机体免疫、作为维生素A的前体治疗光敏性疾病和防止白内障发生等等。因此，类胡萝卜素的应用领域也从最初的着色功能逐步转向营养食品、保健品及药品三大领域。 

软体动物本身不能够合成类胡萝卜素，但它们通过摄食富含类胡萝卜素的藻类而在体内不同组织中积累大量的类胡萝卜素，并作为重要的食物源被鱼类、海鸟、海洋哺乳动物和人类摄食进入脊椎动物体内（Kantha，1989）。因此，在食物链中，软体动物是类胡 萝卜素进入人等高等脊椎动物体内非常重要的一环。 

华贵栉孔扇贝(Chlamys nobilis Reeve)为暖水性海产双壳类（齐钟彦，1998；蔡英亚等，2006），以营养丰富、味道鲜美、肉质细嫩而著称，其闭壳肌干制品俗称“干贝”，是著名的海产八珍之一。自上世纪七十年代末以来，在我国南方开始人工养殖华贵栉孔扇贝，八十年代中后期就发展成为南方沿海重要的海水养殖种类之一。 

华贵栉孔扇贝不仅在贝壳上具有金黄、橙褐、紫褐、浅褐等多种外部颜色，而且在外套膜、闭壳肌等内部组织的颜色上也有不同，如褐色个体的外套膜、闭壳肌全部是白色；而金黄色个体的外套膜通常为金黄色、20~30%个体的闭壳肌也为金黄色，这种金黄色的闭壳肌、外套膜等组织富含类胡萝卜素，并且受到遗传控制。通过人工选育，不但已培育出了外部色泽美观且富含天然类胡萝卜素的金色新品系，而且已在福建、广东等海域进行规模化养殖。由于这种金色品系的外观色泽符合我国广大消费者的习惯，其高含量的类胡萝卜素又具有较高的经济、医疗和保健等价值，因此，产品的价值远高于普通品种。这样不仅解决了目前华贵栉孔扇贝养殖业遭遇的产品价格贱、产值低等问题，而且也可以进一步丰富我国海水养殖业的多品种需求。由于这种新品系的主要特征和经济性状之一就是其体内富含类胡萝卜素，因此，在生产、市场销售等过程中，快速简便地测定它们体内总类胡萝卜素含量将成为一个重要的环节。 

常规的测定贝类总类胡萝卜素含量一直采用如下方法：1）采用活体解剖取其内部组织样品；2）真空冷冻干燥并研磨粉碎：3）按Zheng等（2010）【Zheng HP，Liu HL,Zhang T,Wang SQ,Sun ZW，Liu WH,Li YY.Total carotenoid differences in scallop tissues of Chlamys nobilis(Bivalve:Pectinidae)with regard to gender and shell color.Food Chemistry，122,1164-1167.】方法用丙酮在暗处过夜，提取样品中的总类胡萝卜素；4）5000rpm离心5min取上清，用分光光度计进行 光谱扫描；5）最后参照Zheng等（2010）方法计算样品中的总类胡萝卜素含量。这种方法有许多缺点：1）流程复杂、耗时长，从取样、干燥、研磨、萃取、离心、分析到测定完成一般需用1周时间；2）仪器设备多且昂贵，包括昂贵的真空冷冻干燥机、紫外分光光度计、高速离心机以及研磨机、移液器等设备；3）需用有机溶剂进行化学提取总类胡萝卜素，不但成本高，而且容易污染环境；4）实用性差：不能够进行现场测定，必须在实验室内进行；方法繁琐、需要专业人员才能够进行操作，无法应用于实践中。 

由于华贵栉孔扇贝是我国南方海区重要的养殖贝类，规模大、产量高。这种富含类胡萝卜素的新品种在养殖推广中需要经常现场活体测定产品的类胡萝卜素含量。因此，必须有一种快速简便而又实用的方法来测定总类胡萝卜素含量。然而，迄今为止，尚未见到任何有关快速简便的测定贝类总类胡萝卜素含量的报道。 

发明内容

本发明的目的是提供一种测定扇贝闭壳肌内总类胡萝卜素含量用扇贝比色扇的制作方法及其应用。 

本发明的测定扇贝闭壳肌内总类胡萝卜素含量用扇贝比色扇包括扇体和扇柄，所述扇体包括颜色区域和数值区域，所述颜色区域包括10个从左到右相互隔开的颜色标准梯度；所述数值区域包括10个数值，分别对应颜色区域的10个颜色标准梯度；所述扇体和扇柄相连。 

所述颜色区域的10个颜色标准梯度均为单一金黄色，颜色从左到右由浅到深。 

所述数值区域的10个数值表示总类胡萝卜素含量，单位为μg/g。 

优选地，所述数值区域的10个数值从左到右分别为10、30、50、70、100、130、160、190、220和250，单位为μg/g。 

所述数值区域的10个数值与其对应的颜色标准梯度相邻，分别 位于与其对应的颜色标准梯度的上方或下方。 

所述扇贝比色扇的扇柄包括一个系绳孔。 

所述扇贝比色扇的高×宽为7cm×7cm-10cm×10cm，其中所述扇贝比色扇的高和宽相等。 

优选地，所述扇贝比色扇的高×宽为9cm×9cm。 

优选地，所述扇贝比色扇的形状为扇贝状。 

本发明的目的是提供一种测定扇贝闭壳肌内总类胡萝卜素含量用扇贝比色扇的制作方法，所述方法包括如下步骤： 

1）挑选贝壳全部为金黄色、闭壳肌颜色由浅黄到深黄不等的华贵栉孔扇贝活体个体； 

2）在同一条件下对扇贝闭壳肌进行拍照，并用Photoshop获取每个个体的三原色值R、G、B值； 

3）采用常规方法测定每个个体闭壳肌内总类胡萝卜素含量TCC（Total Carotenoids Content）； 

4）采用Matlab软件将上述R、G、B值与TCC值分别进行线性拟合，并将TCC标准值以10为单位梯度递增获取标准的R、G、B值； 

5）将上述数值输入Photoshop中，获取与TCC标准值相对应的颜色块； 

6）根据10个颜色块由浅到深制作成一个扇贝比色扇，所述扇贝比色扇由浅到深有10个颜色标准梯度，分别对应10个表示总类胡萝卜素含量TCC的数值，单位为μg/g。 

优选地，所述10个表示总类胡萝卜素含量TCC的数值分别为10、30、50、70、100、130、160、190、220、250，单位为μg/g。 

优选地，所述扇贝比色扇的形状为扇贝状。 

优选地，制作扇贝比色扇的材料为塑料或相片纸等。 

本发明的另一目的是提供所述制作方法制作的扇贝比色扇在测 定扇贝闭壳肌内总类胡萝卜素含量中的应用。 

所述应用为一种测定华贵栉孔扇贝闭壳肌内总类胡萝卜素含量的方法，所述方法为利用所述扇贝比色扇与华贵栉孔扇贝闭壳肌颜色进行比较，根据所述扇贝比色扇的10个颜色标准梯度对应的总类胡萝卜素含量就能够获得所测扇贝闭壳肌内总类胡萝卜素含量范围。所述方法快速、简便、实用性强。 

具体的，测定华贵栉孔扇贝闭壳肌内总类胡萝卜素含量的方法包括如下步骤： 

1）取华贵栉孔扇贝活体，将其两枚贝壳张开； 

2）用扇贝比色扇与扇贝闭壳肌颜色比较； 

3）获得该扇贝闭壳肌内总类胡萝卜素含量范围。 

其中，所述方法测定华贵栉孔扇贝闭壳肌中总类胡萝卜素含量范围为10-250μg/g；所需时间为3-5秒。 

本发明的测定华贵栉孔扇贝闭壳肌内总类胡萝卜素含量用扇贝比色扇的制作方法及其应用具有如下优点： 

1、简单，可操作性强。本发明制作测定扇贝闭壳肌内总类胡萝卜素含量用扇贝比色扇的方法简单，可操作性强。 

2、快速、效率高。本发明测定华贵栉孔扇贝闭壳肌内总类胡萝卜素含量的方法只需要3-5秒钟即可测定华贵栉孔扇贝闭壳肌内总类胡萝卜素含量范围，快速、效率高。 

3、简便、成本低、易推广。本发明测定华贵栉孔扇贝闭壳肌内总类胡萝卜素含量的方法不需要任何仪器设备和药品，只需要用扇贝比色扇与闭壳肌颜色对比即可，简便、成本低、易推广。 

4、实用性强。本发明测定华贵栉孔扇贝闭壳肌内总类胡萝卜素含量的方法能够在生产现场快速测定每个活体扇贝闭壳肌内总类胡萝卜素含量范围，一般人员只需简单的讲解后，都能够应用扇贝比色扇，实用性强。 

5、环保性强。本发明测定华贵栉孔扇贝闭壳肌内总类胡萝卜素含量的方法不需要化学药品，不会对环境造成污染，环保性强。 

附图说明

图1为本发明的扇贝比色扇的结构图； 

图中：1为扇体；2为扇柄；3为颜色区域；4为数值区域；5为系绳孔。 

具体实施方式

以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。 

下面结合附图和实施例对本发明制作的扇贝比色扇作进一步详细说明。以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。 

在本发明的描述中，需要说明的是，术语“中心”、“”、“横向”、“上”、“下”、“前”、“后”、“左”、“右”、“竖直”、“水平”、“顶”、“底”“内”、“外”等指示的方位或位置关系为基于附图所示的方位或位置关系，仅是为了便于描述本发明和简化描述，而不是指示或暗示所指的装置或元件必须具有特定的方位、以特定的方位构造和操作，因此不能理解为对本发明的限制。此外，术语“第一”、“第二”、“第三”仅用于描述目的，而不能理解为指示或暗示相对重要性。 

在本发明的描述中，需要说明的是，除非另有明确的规定和限定，术语“安装”、“相连”、“连接”应做广义理解，例如，可以是固定连接，也可以是可拆卸连接，或一体地连接；可以是机械连接，也可以是电连接；可以是直接相连，也可以通过中间媒介间接相连，可以是两个元件内部的连通。对于本领域的普通技术人员而言，可以具体情况理解上述术语在本发明中的具体含义。 

此外，在本发明的描述中，除非另有说明，“多个”的含义是两个或两个以上。 

实施例1 

如图1所示，本发明制作的扇贝比色扇包括扇体1和扇柄2，所述扇体1包括颜色区域3和数值区域4，所述颜色区域3包括10个从左到右相互隔开的颜色标准梯度；所述数值区域4包括10个数值，所述数值从左到右分别为10、30、50、70、100、130、160、190、220和250，单位为μg/g，分别对应颜色区域3的10个颜色标准梯度；所述扇体1和扇柄2相连。 

所述颜色区域3的10个颜色标准梯度均为单一金黄色，颜色从左到右由浅到深。 

所述数值区域4的10个数值表示总类胡萝卜素含量，单位为μg/g。 

所述数值区域4的10个表示总类胡萝卜素含量的数值与其对应的颜色标准梯度相邻，分别位于与其对应的颜色标准梯度的下方。 

所述数值区域4的10个表示总类胡萝卜素含量的数值与其对应的颜色标准梯度相邻，分别位于与其对应的颜色标准梯度的上方。 

所述扇贝比色扇的扇柄2包括一个系绳孔5，绳穿过系绳孔5，可将所述扇贝比色扇悬挂，使所述扇贝比色扇使用和保管比较方便。 

所述扇贝比色扇的高×宽为9cm×9cm。 

优选地，所述扇贝比色扇的形状为扇贝状。 

实施例2： 

本发明的扇贝比色扇的制作方法如下： 

时间：2012年5月 

1)取20个华贵栉孔扇贝活体个体，贝壳全部为金黄色、闭壳肌颜色由浅黄到深黄不等； 

2)在同一条件下对扇贝闭壳肌进行拍照，并用Photoshop获取每个个体的三原色值R、G、B值； 

3）采用常规方法（Zheng等,2010）测定每个个体闭壳肌内总类胡萝卜素含量TCC（Total Carotenoids Content）； 

4）采用Matlab软件将上述R、G、B值与TCC值分别进行线性拟合，并将TCC标准值以10为单位梯度递增获取标准的R、G、B值； 

5）将上述数值输入Photoshop中，获取与TCC标准值相对应的颜色块； 

6）将10个颜色块由浅到深印制在塑料板或彩色打印在相纸上，制作成一个扇贝形状的比色扇。 

所述扇贝比色扇包括扇体和扇柄，所述扇体包括颜色区域和数值区域，所述颜色区域包括10个从左到右相互隔开的颜色标准梯度，所述颜色标准梯度均为单一金黄色，颜色从左到右由浅到深；所述数值区域包括10个表示总类胡萝卜素含量的数值，所述数值从左到右分别为10、30、50、70、100、130、160、190、220和250，单位为μg/g，分别对应颜色区域的10个颜色标准梯度；所述扇体和扇柄相连。 

所述数值区域的10个数值与其对应的颜色标准梯度相邻，分别位于与其对应的颜色标准梯度的上方或下方。 

所述扇贝比色扇的扇柄包括一个系绳孔。 

所述扇贝比色扇的高×宽为9cm×9cm。 

此外，根据所述方法制作的扇贝比色扇的高和宽相等，其高×宽可以为7cm×7cm-10cm×10cm。 

扇贝比色扇应用的实施例 

利用所述扇贝比色扇与华贵栉孔扇贝闭壳肌颜色进行比较，根据扇贝比色扇的10个颜色标准梯度对应的总类胡萝卜素含量就能够快速地测定所测扇贝闭壳肌内总类胡萝卜素含量的范围。 

实施例1 

时间：2012年7月。 

1）华贵栉孔扇贝1龄活体1个（编号为：#1），将其两枚贝壳张开； 

2）用扇贝比色扇与扇贝闭壳肌的颜色进行比较； 

3）得出#1个体的总类胡萝卜素含量为130~160μg/g，用时4秒。 

对比例1 

采用常规方法测定闭壳肌内总类胡萝卜素含量：对#1个体活体解剖取其闭壳肌，真空冷冻干燥并研磨粉碎，然后按Zheng等（2010）方法提取#1个体中的总类胡萝卜素，用UV2501PC型分光光度计（日本，岛津）进行光谱扫描，最后参照Zheng等（2010）方法计算出#1个体闭壳肌中的总类胡萝卜素含量为131.3μg/g，用时1周。 

实施例1和对比例1说明，采用本发明制作的扇贝比色扇能够快速地测定出华贵栉孔扇贝1龄贝闭壳肌内总类胡萝卜素含量范围。 

实施例2 

时间：2012年7月。 

1）华贵栉孔扇贝1龄活体1个（编号为：#2），将其两枚贝壳张开； 

2）用扇贝比色扇与扇贝闭壳肌的颜色进行比较； 

3）得出#2个体的总类胡萝卜素含量为50~70μg/g，用时5秒。 

对比例2 

采用常规方法测定闭壳肌内总类胡萝卜素含量：对#2个体活体解剖取其闭壳肌，真空冷冻干燥并研磨粉碎，然后按Zheng等（2010）方法提取#2个体中的总类胡萝卜素，用UV2501PC型分光光度计（日本，岛津）进行光谱扫描，最后参照Zheng等（2010）方法计算出#2个体闭壳肌中的总类胡萝卜素含量为69.8μg/g，用时1周。 

实施例2和对比例2说明，采用本发明制作的扇贝比色扇能够快速地测定出华贵栉孔扇贝1龄贝闭壳肌内总类胡萝卜素含量范围。 

实施例3 

时间：2012年7月。 

1）华贵栉孔扇贝1.5龄活体1个（编号为：#3），将其两枚贝壳 张开； 

2）用扇贝比色扇与扇贝闭壳肌的颜色进行比较； 

3）得出#3个体的总类胡萝卜素含量为100~130μg/g，用时4秒。 

对比例3 

采用常规方法测定闭壳肌内总类胡萝卜素含量：对#3个体活体解剖取其闭壳肌，真空冷冻干燥并研磨粉碎，然后按Zheng等（2010）方法提取#3个体中的总类胡萝卜素，用UV2501PC型分光光度计（日本，岛津）进行光谱扫描，最后参照Zheng等（2010）方法计算出#3个体闭壳肌中的总类胡萝卜素含量为118.5μg/g，用时1周。 

实施例3和对比例3说明，采用本发明制作的扇贝比色扇能够快速地测定出华贵栉孔扇贝1.5龄贝闭壳肌内总类胡萝卜素含量范围。 

实施例4 

时间：2012年7月。 

1）华贵栉孔扇贝1.5龄活体1个（编号为：#4），将其两枚贝壳张开； 

2）用扇贝比色扇与扇贝闭壳肌的颜色进行比较； 

3）得出#4个体的总类胡萝卜素含量为100~130μg/g，用时5秒。 

对比例4 

采用常规方法测定闭壳肌内总类胡萝卜素含量：对#4个体活体解剖取其闭壳肌，真空冷冻干燥并研磨粉碎，然后按Zheng等（2010）方法提取#4个体中的总类胡萝卜素，用UV2501PC型分光光度计（日本，岛津）进行光谱扫描，最后参照Zheng等（2010）方法计算出#4个体闭壳肌内总类胡萝卜素含量为107.8μg/g，用时1周。 

实施例4和对比例4说明，采用本发明制作的扇贝比色扇能够快速地测定出华贵栉孔扇贝1.5龄贝闭壳肌内总类胡萝卜素含量范围。 

实施例5 

时间：2012年7月。 

1）华贵栉孔扇贝2龄活体1个（编号为：#5），将其两枚贝壳张开； 

2）用扇贝比色扇与扇贝闭壳肌的颜色进行比较； 

3）得出#5个体的总类胡萝卜素含量为100~130μg/g，用时3秒。 

对比例5 

采用常规方法测定闭壳肌内总类胡萝卜素含量：对#5个体活体解剖取其闭壳肌，真空冷冻干燥并研磨粉碎，然后按Zheng等（2010）方法提取#5个体中的总类胡萝卜素，用UV2501PC型分光光度计（日本，岛津）进行光谱扫描，最后参照Zheng等（2010）方法计算出#5个体闭壳肌内总类胡萝卜素含量为103.6μg/g，用时1周。 

实施例5和对比例5说明，采用本发明制作的扇贝比色扇能够快速地测定出华贵栉孔扇贝2龄贝闭壳肌内总类胡萝卜素含量范围。 

实施例6 

时间：2012年7月。 

1）华贵栉孔扇贝2龄活体1个（编号为：#6），将其两枚贝壳张开； 

2）用扇贝比色扇与扇贝闭壳肌的颜色进行比较； 

3）得出#6个体的总类胡萝卜素含量为130~160μg/g，用时3秒。 

对比例6 

采用常规方法测定闭壳肌内总类胡萝卜素含量：对#6个体活体解剖取其闭壳肌，真空冷冻干燥并研磨粉碎，然后按Zheng等（2010）方法提取#6个体中的总类胡萝卜素，用UV2501PC型分光光度计（日本，岛津）进行光谱扫描，最后参照Zheng等（2010）方法计算出#6个体闭壳肌内总类胡萝卜素含量为139.5μg/g，用时1周。 

实施例6和对比例6说明，采用本发明制作的扇贝比色扇能够 快速地测定出华贵栉孔扇贝2龄贝闭壳肌内总类胡萝卜素含量范围。 

上述实施例说明，采用本发明方法能够制作出测定扇贝闭壳肌内总类胡萝卜素含量用的扇贝比色扇，并且应用这种扇贝比色扇能够快速地测定出华贵栉孔扇贝1-2龄贝闭壳肌内总类胡萝卜素含量范围。本发明提供的扇贝比色扇测定华贵栉孔扇贝闭壳肌内总类胡萝卜素含量范围为10-250μg/g；所需时间为3-5秒。 

另外，凡通过比色扇或颜色卡来测定贝类体内总类胡萝卜素含量也为本发明所述创意思想之所及。 

虽然，上文中已经用一般性说明、具体实施方式及试验，对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。