发现替代性抗原特异性抗体变体的方法

摘要

本文报道了选择亲本抗体可变结构域编码核酸的变体的方法，其中由所述编码核酸编码的亲本抗体可变结构域氨基酸序列具有至少一个可开发性热点，该方法包括以下步骤(i)提供多个含DNA样品(分泌抗体的B细胞的基因组材料)，每个样品包括一个或多个抗体可变结构域编码核酸；(ii)使用共有序列特异性引物对(i)的所述抗体可变结构域编码核酸进行PCR扩增以获得扩增产物(其中所述共有序列特异性引物结合遗传基因座组中多个基因的共同的共有序列，从而产生扩增产物库)；(iii)对步骤(ii)中获得的多个所述扩增产物进行测序，以确定在测序读取中每个位置的每个核苷酸的相对比例；(iv)在(iii)的测序读取结果和亲本抗体可变结构域编码核酸之间进行序列比对；(v)在所述序列比对中对抗体可变结构域编码核酸进行基于序列同一性/同源性的排序，其中亲本抗体可变结构域编码核酸作为完美/模板/参照序列；和(vi)基于步骤(v)的序列排序选择变体抗体可变结构域编码核酸，其中选择步骤(vi)中选择的变体，使得除去可开发性热点。