一种肠毒素基因LT敲除的大肠杆菌及其构建方法

摘要

本发明公开了一种肠毒素基因LT敲除的大肠杆菌的构建方法，包括如下步骤：1)构建LT基因同源重组供体LT donar，LT donar的碱基序列依次包括L‑arm、cat promoter、CmR、sgCommon、PAM、L‑short、R‑arm多核苷酸片段；以及2)制备含pCas‑Red质粒的感受态细胞，加入步骤1)的LT donar进行转化，然后筛选阳性克隆，即得无痕敲除了热不稳定肠毒素基因LT的大肠杆菌。本发明将Crispr/Cas9与λ‑Red同源重组系统结合，成功地对产肠毒大肠杆菌K88的LT基因进行无痕敲除，突变菌株丧失溶血能力，减缓生长；利用本发明的方法可快速、便捷的对产肠毒大肠杆菌K88基因进行无痕敲除，为研究LT功能提供了坚实的研究基础。