不同浓度α-MSH处理黑色素细胞后Gnαq基因表达特性的试验方法

摘要

本发明公开了不同浓度α‑MSH处理黑色素细胞后Gnαq基因表达特性的试验方法，步骤包括：黑色素细胞的分离与纯化；引物设计及合成；不同浓度α‑MSH处理黑色素细胞后总RNA提取及鉴定；反转录与目的片段扩增；PCR扩增产物纯化与回收；Gnαq cDNA序列测定；重组质粒的转化；质粒DNA提取；不同浓度α‑MSH处理黑色素细胞后Gnαq mRNA qRT‑PCR检测；不同浓度α‑MSH处理黑色素细胞后Gnαq蛋白水平检测；数据处理与统计分析。本发明通过分离纯化绵羊黑色素细胞，不同浓度α‑MSH处理，Real time PCR检测和WB检测结果显示，不同浓度α‑MSH处理黑色素细胞后，Gnαq基因的表达量呈降低趋势，α‑MSH对于Gnαq基因的表达不具有促进作用。因此，本发明验证了Gnαq基因对于黑色素的调控和α‑MSH不属于同一信号通路有关，作用机制得到了证实。