受DNA guide引导的具有核酸内切酶活性的RecJ蛋白及其在基因编辑中的应用

摘要

本发明提供一种受DNA guide引导的具有核酸内切酶活性的BaRecJ蛋白及其突变体BaRecJM在基因编辑中的应用。本发明提供的是一种来源于细菌的RecJ核酸酶，其能够结合磷酸化的小DNA,对互补的目标DNA特定位点发挥核酸内切酶作用，进行基因编辑；所述的BaRecJ核酸酶的氨基酸序列为SEQ ID NO:1。本发明另一个方面还提供上述BaRecJ核酸酶的突变体，从而有效的削弱其外切酶活性，增强受DNA guide引导对目标DNA的定点剪切能力；所述RecJ核酸酶的突变体BaRecJM，其氨基酸序列为SEQ ID NO:3。目前报道的受DNA片段引导进行剪切的Ago蛋白来自嗜热菌，需要大于65℃才能发挥作用。本发明的BaRecJ及其突变体BaRecJM能够在37℃的温和条件下对DNA双链进行剪切，从而更方便进行基因工程操作。