一种在哺乳动物细胞中检测CRISPR/Cas PAM序列的方法和系统

摘要

本发明属于基因编辑技术领域，具体为一种在哺乳动物细胞中检测CRISPR/Cas PAM序列的方法和系统。本发明方法的具体步骤如下：(1)构建包含PAM序列的质粒文库；(2)构建包含PAM序列的慢病毒文库；(3)构建包含PAM序列文库的细胞系；(4)流式分选去除荧光报告基因假阳性背景；(5)转染CRISPR/Cas至包含PAM序列文库的细胞系进行编辑；(6)流式分选出荧光报告基因阳性细胞，通过PCR构建二代测序文库；(7)生物信息学分析二代测序结果，找出能够产生基因编辑的PAM序列。本发明将快速筛选出在哺乳动物细胞中能产生基因编辑的CRISPR/Cas系统，并通过测序找出其需要的PAM序列。