一种提高铅结合蛋白特异性的定向进化方法

摘要

本发明公开了一种提高铅结合蛋白特异性的定向进化方法，步骤为：(1)采用易错PCR技术扩增铅结合蛋白基因pbrR，连入含有双向筛选系统的筛选质粒；(2)转化宿主细胞E.coli DH5α，涂布筛选平板进行定向筛选；(3)对筛选得到的突变体蛋白M(PbrR‑C134R)进行初步评估。本发明应用定向进化技术以定向改造三维结构未知的铅结合蛋白，进一步减弱锌离子干扰提高铅结合蛋白的特异性。通过定向筛选和突变体蛋白初步评估，分析确定与铅结合蛋白特异性相关的氨基酸突变位点，为初步解析铅结合蛋白与金属离子结合特异性的关系奠定了基础。同时为定向改造同家族结构未知金属调控蛋白的特异性提供了新颖且简便的改造策略。