一种啤酒酵母中表达苯丙酮酸脱羧酶Aro10的构建方法

摘要

本发明的目的在于构建一种啤酒酵母中表达苯丙酮酸脱羧酶Aro10的方法，具体步骤如下：(1)啤酒酵母基因组的获得：将啤酒酵母TT21三区培养，直至出单克隆，然后平涂在平板上获得菌体，用SDS处理获得啤酒酵母基因组；(2)目的基因的克隆：利用合理引物、条件，PCR扩增出Aro10(S.c)、Aro10(S.b)的基因；(3)构建表达载体：以pYPGE15质粒为载体，将Aro10(S.c)、Aro10(S.b)基因分别插入启动子PGK下游，构建pYPGE‑ARO10(S.c)、pYPGE‑ARO10(S.b)表达载体；(4)获取重组菌株：将pYPGE‑ARO10(S.c)、pYPGE‑ARO10(S.b)表达载体通过醋酸锂化学转化法转入啤酒酵母TT21中，得到Aro10的重组酵母；(5)重组菌株的啤酒发酵；(6)苯乙醇含量检测：采用高效液相色谱法进行检测芳香醇含量的变化。