慢性阻塞性颌下腺炎小鼠模型及其制备方法

摘要

本发明公开了慢性阻塞性颌下腺炎小鼠模型及其制备方法，涉及生物医学领域。本发明采用血管硬化剂注射于口底中部，使该局部组织产生无菌性坏死，之后逐渐被纤维结缔组织所替代，以阻塞颌下腺导管口达到建模的目的。本发明建立了一种新的小鼠慢性阻塞性颌下腺炎模型的建造方法，与传统方法相比，减少了建模需要的步骤，降低建模难度，并更大程度上保证了腺体的完整性，降低小鼠死亡风险，为慢性阻塞性颌下腺炎的研究提供一个可靠的平台。

说明书

技术领域

本发明涉及生物医学领域，尤其是一种慢性阻塞性颌下腺炎小鼠模型及其制备方法。

背景技术

慢性阻塞性颌下腺炎(Chronic obstructive submaxillaritis，COS)是口腔颌面外科临床常见的疾病。主要表现是颌下腺反复肿胀和疼痛，并可引发逆行性感染。引起局部阻塞的原因主要是结石、炎症等。诊断主要根据患者的临床体征和X线摄片、B超等方法，但对于阴性结石、或位于深部的结石，以及原因不明的阻塞症状，诊断较为困难。

一般认为，COS是一种慢性炎症过程，由于导管内和导管外机械性梗阻导致唾液流速降低，偶尔发生逆行感染引起。虽然导管梗阻与COS密切相关，但其潜在的发病机制尚不清楚。深入研究这一机制需要一个可靠的模型来模拟疾病的发生和进展。通过研究阻塞性颌下腺的发生发展及其影响因素，对更好地了解该病病因，治疗等均有重要意义。

小鼠COS模型是相关研究中使用的主要体内模型，但如何成功建模一直是一个难点。目前多采用结扎小鼠颌下腺导管的方法，但该方法存在操作时步骤多且复杂、由于需要切开下颌及颈部皮肤，存在感染风险、结扎线容易脱落、腺体在结扎后容易与粘膜粘连、术后小鼠易死亡等缺陷。

发明内容

本发明的第一发明目的在于：针对上述存在的问题，提供一种慢性阻塞性颌下腺炎小鼠模型的制备方法，该方法减少了建模需要的步骤，降低建模难度，并更大程度上保证了腺体的完整性，降低小鼠死亡风险。

本发明的第二发明目的在于，提供一种慢性阻塞性颌下腺炎小鼠模型，为慢性阻塞性颌下腺炎的研究提供一个可靠的平台。

本发明采用的技术方案如下：

慢性阻塞性颌下腺炎小鼠模型的制备方法，采用血管硬化剂注射于小鼠口底中部，随后正常饲养即得。

本发明的一种慢性阻塞性颌下腺炎小鼠模型的制备方法，所述血管硬化剂选自鱼肝油酸钠或无水乙醇。

本发明的一种慢性阻塞性颌下腺炎小鼠模型的制备方法，所述血管硬化剂的注射量为8-15μL。

由于采用了上述技术方案，将血管硬化剂注射于口底中部，使该局部组织产生无菌性坏死，之后逐渐被纤维结缔组织所替代，以阻塞颌下腺导管口达到建模的目的。与传统方法相比，该方法减少了建模需要的步骤，降低建模难度，并更大程度上保证了腺体的完整性，降低小鼠死亡风险。

本发明的一种慢性阻塞性颌下腺炎小鼠模型的制备方法，注射血管硬化剂后正常饲养7-30天。

本发明的一种慢性阻塞性颌下腺炎小鼠模型的制备方法，所述小鼠品种选自BALB/c小鼠、C57BL小鼠、C3H小鼠、C3H/He小鼠、KM小鼠、ICR小鼠、NIH小鼠、CFW小鼠、LACA小鼠中的任意一种。

本发明的一种慢性阻塞性颌下腺炎小鼠模型的制备方法，所述小鼠体重在15-30g内，6-8周龄。

慢性阻塞性颌下腺炎小鼠模型，其采用上述的任意一种慢性阻塞性颌下腺炎小鼠模型的制备方法制备而成。

综上所述，由于采用了上述技术方案，本发明的有益效果是：

本发明提供了慢性阻塞性颌下腺炎小鼠模型及其制备方法，采用血管硬化剂注射于口底中部，使该局部组织产生无菌性坏死，之后逐渐被纤维结缔组织所替代，以阻塞颌下腺导管口达到建模的目的。本发明建立一种新的小鼠COS模型的建造方法，与传统方法相比，减少了建模需要的步骤，降低建模难度，并更大程度上保证了腺体的完整性，降低小鼠死亡风险，为慢性阻塞性颌下腺炎的研究提供一个可靠的平台。

附图说明

本发明将通过例子并参照附图的方式说明，其中：

图1是实施例6中小鼠建模后0-30天的唾液流率变化趋势图；

图2是实施例6中小鼠建模后第30天的腺体切片HE染色图。

具体实施方式

本说明书中公开的所有特征，或公开的所有方法或过程中的步骤，除了互相排斥的特征和/或步骤以外，均可以以任何方式组合。

本说明书（包括任何附加权利要求、摘要）中公开的任一特征，除非特别叙述，均可被其他等效或具有类似目的的替代特征加以替换。即，除非特别叙述，每个特征只是一系列等效或类似特征中的一个例子而已。

实施例1

本实施例提供一种慢性阻塞性颌下腺炎小鼠模型及其制备方法，该方法将血管硬化剂注射于口底中部，使该局部组织产生无菌性坏死，之后逐渐被纤维结缔组织所替代，以阻塞颌下腺导管口，从而得到慢性阻塞性颌下腺炎小鼠。具体步骤如下：

取8周龄的BALB/c小鼠，体重18±2g，用口腔麻醉注射器于口底中部注射无水乙醇8μL，然后正常饲养7天即得。小鼠的正常饲养方法是本领域技术人员应该掌握的常规技术，本文不在赘述。

实施例2

本实施例提供一种慢性阻塞性颌下腺炎小鼠模型及其制备方法，该方法将血管硬化剂注射于口底中部，使该局部组织产生无菌性坏死，之后逐渐被纤维结缔组织所替代，以阻塞颌下腺导管口，从而得到慢性阻塞性颌下腺炎小鼠。具体步骤如下：

取6周龄的ICR小鼠，体重20±2g，用口腔麻醉注射器于口底中部注射无水乙醇10μL，然后正常饲养15天即得。小鼠的正常饲养方法是本领域技术人员应该掌握的常规技术，本文不在赘述。

实施例3

本实施例提供一种慢性阻塞性颌下腺炎小鼠模型及其制备方法，该方法将血管硬化剂注射于口底中部，使该局部组织产生无菌性坏死，之后逐渐被纤维结缔组织所替代，以阻塞颌下腺导管口，从而得到慢性阻塞性颌下腺炎小鼠。具体步骤如下：

取7周龄的C3H/He小鼠，体重24±2g，用口腔麻醉注射器于口底中部注射鱼肝油酸钠注射液10μL，然后正常饲养21天即得。小鼠的正常饲养方法式本领域技术人员应该掌握的常规技术，本文不在赘述。

实施例4

本实施例提供一种慢性阻塞性颌下腺炎小鼠模型及其制备方法，该方法将血管硬化剂注射于口底中部，使该局部组织产生无菌性坏死，之后逐渐被纤维结缔组织所替代，以阻塞颌下腺导管口，从而得到慢性阻塞性颌下腺炎小鼠。具体步骤如下：

取8周龄的LACA小鼠，体重28±2g，用口腔麻醉注射器于口底中部注射无水乙醇15μL，然后正常饲养30天即得。小鼠的正常饲养方法是本领域技术人员应该掌握的常规技术，本文不在赘述。

实施例5

本实施例提供一种慢性阻塞性颌下腺炎小鼠模型及其制备方法，该方法将血管硬化剂注射于口底中部，使该局部组织产生无菌性坏死，之后逐渐被纤维结缔组织所替代，以阻塞颌下腺导管口，从而得到慢性阻塞性颌下腺炎小鼠。具体步骤如下：

取8周龄的KM小鼠，体重25±2g，用口腔麻醉注射器于口底中部注射鱼肝油酸钠注射液12μL，然后正常饲养15天即得。小鼠的正常饲养方法是本领域技术人员应该掌握的常规技术，本文不在赘述。

实施例6

本实施例对本发明的慢性阻塞性颌下腺炎小鼠模型及其制备方法的有效性和实用性进行验证，为该方法的实际应用提供实验基础。

实验方法：

（1）建模：取20只6周龄的C57BL小鼠，体重20±2g，随机分为两组，分别标记为对照组和实验组。实验组使用口腔麻醉注射器于口底正中注射10uL鱼肝油酸钠注射液，对照组使用同样的方法注射等量生理盐水，分别于0，7，15，30天后观察并测量唾液流率，并取颌下腺。

（2）计算模型小鼠唾液流率：腹腔注射水合氯醛（0.004ml/g）麻醉小鼠。肌注毛果云香碱（2mg/kg），15分钟后开始收集混合唾液，收集15分钟，保持小鼠正常坐位，头朝下将吸水纸塞入小鼠口内，让唾液不流出，收集完成后将吸水纸置于ep管，吸水纸及ep管测量前后称重得出唾液量，与时间计算得出小鼠唾液流率。小鼠建模后0-30天的唾液流率变化趋势如图1所示。由图1可知，小鼠建模后第7天，小鼠唾液流率明显降低，模型初见成效。

（3）组织解剖：计算唾液流率后，采用颈椎脱位法处死小鼠，将小鼠颈部及下颌毛发剃除以暴露颈部及下颌皮肤，在小鼠颈部及下颌中线做纵切口，剪开皮肤粘膜，在此过程中注意避免损伤腺体，仔细剥离暴露的腺体，后置于10%福尔马林溶液中，隔日换为7%蔗糖溶液脱水，脱水后制作石蜡标本，切片进行HE染色，观察建模情况。

以上实验结果显示，小鼠建模7天后开始出现炎症，唾液流率与对照组相比明显减慢，15天后开始出现纤维化，30天时纤维化明显。

建模30天后腺体切片HE染色结果如图2所示。由图2可知，建模30天后，实验组小鼠颌下腺腺体纤维化，模型构建成功。

本发明并不局限于前述的具体实施方式。本发明扩展到任何在本说明书中披露的新特征或任何新的组合，以及披露的任一新的方法或过程的步骤或任何新的组合。