恒温检测细胞培养液中支原体污染的方法及试剂盒

摘要

本发明属于核酸检测技术领域，具体为一种恒温检测细胞培养液中支原体污染的方法及试剂盒。本发明方法包括：构建反应体系，包含：RPA恒温扩增反应成分，特异性扩增支原体的引物对，Cas12a蛋白，靶向目标序列的crRNA和单链DNA报告分子；取1mL细胞培养上清液，加热培养，取1uL作为检测样品加入到一体化检测体系中，经过反应，可直接观察检测体系荧光变化进行支原体检测；试剂盒含有：扩增支原体16s rRNA保守区域DNA序列的引物对，RPA恒温扩增反应成分，Cas12a蛋白，与靶基因互补的crRNA和两端分别被荧光基团和猝灭基团修饰的单链DNA报告分子。本发明操作简单，检验周期短，并且解决了常规支原体检测过程中出现的开盖污染问题。