Эффективность коррекционной репарации MMR) и мутация гена MSH2 в клетках карциномы толстого кишечника COLO320HSR

摘要

Рак толстого кишечника (РТЮ - одна из двух патологий, в которых строго доказана связь между генетическим дефектом репарации ДНК и канцерогенезом. Дефект затрагивает один из генов механизма коррекционной репарации (mismatch repair. MMR). Связь между мнкросателлитной нестабильностью (MCH). мутациями генов MMR и дефицитом активности MMR однозначно прослеживается в случае семейной формы колоректального рака, синдрома Линча. При этом заболевании процесс формирования опухоли инициируется биаллельной мутацией в одном из главных генов MMR -MSH2 и MLHL Мутация одного аллеля - терминальная, присутствует во всех соматических и половых клетках организма: вторая мутация - соматическая. Инициирующая мутация при спорадическом РТК не идентифицирована, но в большой части спорадических колоректалъных опухолей обнаруживаются признаки дефицита MMR. В генетических исследованиях рака часто используют клеточные линии, полученные из первичных опухолей. Две широко используемые линии колоректальных опухолевых клеток НСТ116 и COLO30HSR фенотипически соответствуют семейной и спорадической формам рака толстого кишечника. Клетки линииНСТ116 (дефицитные по MMR благодаря делеции в гене MLH1, полностью инактивирующей кодируемый белок) характеризуются высокой МСН и имеют близкий к диплоидному кариотип (near diploid karyotype). Клетки COLO320HSR микросателлит-стабильны, что свидетельствует об активной системе MMR. Вместе с тем они имеют, подобно линии НСТ135. кариотип. близкий к диплоидному, но высокую частоту спонтанных аберраций хромосом. Ранее мы показали, что количество вторичных двунитевых разрывов ДНК. индуцированных метилнитрозомочевиной, адекватно отражает функциональную активность MMR в клетке.Используя этот подход, мы оценили активность MMR в этих линиях клеток по сравнению с MMR-профицитными клетками HeLa. Показано, что клетки COLO320HSR характеризуются низкой активностью MMR, близкой к таковой в MMR-дефицитных клетках линии НСТ116. В клетках COLO обнаружена нейтральная мутация вгене MSH2-G520A. По-видимому, эта мутация не связа а с полиморфизмом, так как у 30 исследованных больных спорадическим колоректальным раком мы необнаружили такой мутации.