ТЕОРЕТИЧЕСКАЯ ОЦЕНКА ВЕРОЯТНОСТНЫХ ХАРАКТЕРИСТИК КОЛИЧЕСТВЕННОГО АНАЛИЗА, ОСНОВАННОГО НА СОЧЕТАНИИ МЕТОДОВ КАПЕЛЬНОЙ МИКРОФЛЮИДИКИ И ПОЛИМЕРАЗНОЙ ЦЕПНОЙ РЕАКЦИИ В УСЛОВИЯХ СВЕРХМАЛЫХ КОЛИЧЕСТВГЕНЕТИЧЕСКОГО МАТЕРИАЛА

摘要

Классический метод полимеразной цепной реакции (ПЦР) в реальном времени обладает большой погрешностью определения сверхмалых количеств (сотни копий и менее) генетического материала. В этих условиях используются методы цифровой ПЦР. При этом наименьшая погрешность количественного анализа достигается при условиях сопоставимости числа копий и числа аналитических ячеек, в которых регистрируется присутствие хотя бы одной копии анализируемого материала. В работе приведен теоретический вероятностный расчет схемы принципиально новой комбинации: ПЦР и капельной микрофлюидики, которая обеспечит приемлемые характеристики анализа сверхмалых количеств пробы. При этом ПЦР используется исключительно для копирования генетического материала, а количественный анализ производится с помощью капельной микрофлюидики. Приведен пример оценивания погрешности счета числа копий при учете двух различных независимых случайных факторов - отбор 10%-й части пробы и 1%-я погрешность счета капель с положительным результатом реакции.