ИНДУКЦИЯ АЛЬТЕРНАТИВНОГО СПЛАЙСИНГА И ИНГИБИРОВАНИЕ АКТИВНОСТИ КАТАЛИТИЧЕСКОЙ СУБЪЕДИНИЦЫ ТЕЛОМЕРАЗЫ В Т, В И NK КЛЕТКАХ ЧЕЛОВЕКА АПОПТОТИЧЕСКОЙ ЭНДОНУКЛЕАЗОЙ EndoG

摘要

Исследовали влияние аиоптотической эндонуклеазы EndoG на альтернативный сплайсинг мРНК каталитической субъединицы теломеразы hTERT (human Telomerase Reverse Transcriptase) и активность теломеразы в нормальных лимфоцитах человека. CD4~+, CD8~+ В и NK клетки человека трансфицировали плазмидой, содержащей ген EndoG (pEndoG-GFP), или контрольной плазмидой pGFP. Уровень мРНК EndoGи сплайс-вариантов hTERT проводили методом ОТ-ПЦРв реальном времени. Содержание белка оценивали с помощью вестерн-блоттинга. Активность теломеразы определяли по протоколу амплификации теломерных повторов. Сверхэкспрессия EndoG в клетках вызывала снижение экспрессии полноразмерного активного варианта hTERT и увеличение экспрессии неактивного сплайс-варианта. Нарушение пропорции сплайс-вариантов hTERT в клетках приводило к значительному снижению теломеразной активности уже через 72 ч после трансфекции.