Cas9ニツカ-ゼを用いた才フタ-ゲッ卜のない新しいゲノム編集法(CRISPR Nickaseシステム)の開発 ゲノムのほぼ全域にわたる正確な編集

摘要

任意の塩基配列を改変するゲノム編集技術が開発さ れ，バイオサイエンスの基礎研究から医薬研究，農林水 産開発などの応用まで，さまざまな分野でその利用が急速に広がりつつある.初期段階ではZFNs (zinc finger nucleases)やTALENs (transcription activator-like effector nucleases)などの人工切断酵素が利用されてきた 力s，これらの作製には煩雑な操作を必要とするため個人 での作製は困難であった.化膿レンサ球菌はtreptococ-cus pyogenes)由来のCas9 (CRISPR-associated protein 9),およびそれと複合体を形成するsgRNA (single guide RNA)からなるCRISPR (clustered regularly interspaced short palindromic repeats)-Cas9が開発され ると，作製が簡便なこともあり，ゲノム編集技術の中心 を担うようになつたひ).sgRNAはPAM (proto-spacer adaptor motif; 5'-NGG-3', Nは任意の塩基）配列とそれ に続く 20塩基を認識してCas9力標的DNAに効率良く 二 本鎖切断を引き起こす.二本鎖切断はドナーDNAが存 在する場合には相同組換え（HDR: homology-directed repair)によつて修復され遺伝子ノックインが可能とな り，存在しない場合には非相同末端結合（NHEJ: nonhomologous end joining)を介して修復されるせ,数塩 基の挿入、欠損を伴った結果，遺伝子ノックアウトを可 能とする.