．基質親和性を利用した新しいタンパク賞蛍光標識法の開発: 古くて新しいベンゼンスルホン酸エステルの反応性を利用したタンパク葉新規化学修飾

摘要

緑色蛍光タンパク質（green auorescent protein，GFP）に代表される蛍光タンパク質を遺伝子組換え技術によって生体成分分子に組み込hで構築されたバイオセンサーは，FRET（fluorescence resonance energytransfer，蛍光共鳴エネルギー移動）などを利用した蛍光検出技術の開発もあって，タンパク質問相互作用の解析などに革新的な進歩をもたらした（1～3）．しかし，蛍光タンパク質はその分子量が大きいため（～27，000），その insitu 才ね‘における応用が限られる場合が少なくなかった．一方，低分子化合物によるタンパク質の（蛍光）標識も頻繁に利用されているが，主にタンパク質中の側鎖アミノ基もしくはカルポキシル基をターゲットとしており，その反応性および修飾残基の制御は容易ではなかった．たとえばアミノ酸残基特異的な化学修飾法を見ても，まずリガンドで活性部位近傍の重要アミノ酸残基をマスクし，次に活性部位近傍にない同じアミノ酸残基を修飾し，修飾されていない残基を特定することによって活性発現に重要なアミノ酸を同定するといった手間のかかる手法がとられてきていた．